提高胚胎生存力的方法技术

本发明专利技术提供一种提高胚胎生存力的方法，其包括将至少一种ｐ５３或ｐ５３相关途径的抑制剂给予以下的一种或多种：胚胎、卵母细胞、精子、雌性动物或雄性动物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
总体上，本专利技术涉及和组合物，具体地，涉及通过辅助生殖技术产生胚胎。本专利技术进一步涉及保护胚胎不受遗传或后天缺陷正选择压力的方法。
技术介绍
胚胎在其存在的最初几周不能存活被认为是哺乳动物低受精能力和不育的主要原因。这一点尤其在通过辅助生殖技术(ART)，包括人工受精(IVF)及所有相关技术产生的胚胎中得到例证。大部分的ART胚胎在植入前和刚植入后的时期由于细胞凋亡而死亡。2000年在澳大利亚进行了共计27,067个ART治疗周期(Hurst和Lancaster，2001，AIHW National Perinatal Statistic Unit，Sydney，ISSN1038-7234)，产生了4,319例能成活的妊娠(成功率16％)。假定在每次治疗周期中平均转移2.1个胚胎(90％以上的成功的治疗周期转移了2个或者更多个胚胎)，这相当于ART产生的胚胎中具有长期生存能力的低于10％。ART是昂贵的。在美国每个治疗周期的平均费用为US$9547(Collins，2002，Human Reproduction Update.8265-77)。人们确定ART过程中胚胎生存力的丧失多数发生在植入前阶段或者刚植入之后。ART导致特征性的胚胎发育迟缓，使得在发育程序中受精96-120小时后胚胎通常比它们天然产生的对应物晚至少一整天。每个胚胎中的细胞也较少，而且胚胎中许多细胞经历调亡(Jurisicova等人，1996，Molecular Human Reproduction.293-8；O’Neill，1997，Biology of Reproduction.56，229-237)。在许多情况下表现型便足以导致整个胚胎的退化。这种迟缓是与培养条件有关的细胞应激物的后果。植入前的胚胎组成性地表达细胞凋亡的部件并具有细胞调亡的效应器和调控元件。胚胎的成功发育看起来要求对这种调亡部件的抑制。处理各种应激物的尝试仅取得有限的成功。例如，胚胎氧化损伤和还原刺激之间通过自分泌和旁分泌生长/存活因子的相互作用是IVF导致胚胎死亡的重要原因。但是，减轻氧化应激并提供宽范围的推定胚胎存活/生长因子仅部分改善了IVF的效果。这表明存在其它作用于胚胎的相关应激物，并且/或者应激物对胚胎作用的本质尚未很好地明确。细胞生存力的丧失是限制ART成功的重要因素，人们明确需要更完整地阐明导致ART过程中细胞死亡率降低的因素，并设计提高ART胚胎生存力的适当策略。关于体细胞对各种环境应激的反应，人们知之甚多。例如，细胞通过稳定和增加转录因子p53的表达而响应于多种形式的基因毒性和非基因毒性应激(例如，参见Agarwal等人，1998，Journal of BiologicalChemistry 273，1-4)。p53是在基因组正常稳定性的维持中起重要作用的细胞应激“传感物”。p53在相互连接的细胞途径的复杂网络内发挥作用，细胞通过其感觉并响应于不适当的应激。其它在该网络内发挥作用的肿瘤抑制因子包括但不限于Rb、PTEN、p21、p27、ARF和INK。p53能够(通过CDK抑制因子如p21的诱导)诱导周期细胞级数降低，或者(通过诱导前细胞凋亡介体如Bax、PUMA、AIF等的合成)诱导细胞凋亡。p53突变导致对细胞过程的调节丧失，并与多种癌症的发生有关。半数以上的人类癌症中发现有p53突变。现在人们相信许多成年人疾病至少部分源于胚胎和胎儿发育(包括胚胎植入前阶段)过程中的约束因素。因此，对作用于胚胎的应激和对这些策略的胚胎反应的理解在使许多成年人疾病的发作降至最低的策略设计中是十分重要的。植入前哺乳动物胚胎通常产生一批可以刺激胚胎生长并存活的营养因子(Hardy和Spanos(2002)Journal of Endocrinology 172，221-236)。ART产生的胚胎生存力降低的主要原因是这些生长因子产生的数目减少。例如，已经观察到血小板活化因子(PAF；1-0-烷基-2-乙酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱)和胰岛素样生长因子II(IGF-II)在IVF源胚胎中产生迟缓(O’Neill等人，1987，Fertility and Sterility 47，969-975；和Stojanov等人，1999，Molecular Human Reproduction 5，116-124)。这些观察结果已经导致发展了一系列为体外胚胎培养基补充包括PAF在内的外源营养因子的方案(Ryan等人，1990，Journal ofReproduction and Fertility 89，309-315；O’Neill等人，1989，The Lancetii，769-772)，以致力于增加胚胎的生存力。但是，这种培养基补充的效力是有限的。澳大利亚专利申请第608530号描述了使用外源PAF或PAF类似物来增加植入率。但是，观察到的效果不如预期的显著。假使有正常胚胎发育中需要自分泌和旁分泌营养因子的实验证据(O’Neill，1997，Biology of Reproduction 56，229-237)，这一临床成果是令人惊讶的。因此，需要提高胚胎生存力的改进方法。
技术实现思路
根据本专利技术的第一个方面，提供了一种，该方法包括将至少一种p53或p53相关途径的抑制剂给予以下的一种或多种胚胎、卵母细胞、精子、雌性动物或雄性动物。抑制剂可以是以下的一种或多种的抑制剂p53、Rb、PTEN、p21、p27、ARF和INK。在一个实施方式中抑制剂为p53抑制剂。抑制剂可以选自小分子抑制剂、核酸基抑制剂、肽基抑制剂及其任意组合。可以将至少一种抑制剂加入到含胚胎和/或配子的培养基中作为补充。可以将p53或p53相关途径的两种或多种抑制剂给药。两种或多种抑制剂可以是相同或不同分子的抑制剂。分子可以选自p53、Rb、PTEN、p21、p27、ARF和INK。根据本专利技术的第二个方面，提供了一种，该方法包括将至少一种p53抑制剂给予以下的一种或多种胚胎、卵母细胞、精子、雌性动物或雄性动物。p53抑制剂可以选自小分子抑制剂、核酸基抑制剂、肽基抑制剂及其任意组合。抑制剂可以是例如p53抑制素(PFT-α)的小分子抑制剂或其衍生物或类似物。抑制剂可以是p53特异性反义分子，如p53-特异性siRNA。在一个实施方式中，可以将两种或多种p53抑制剂给药。两种或多种p53抑制剂可以是小分子抑制剂和p53特异性siRNA。根据本专利技术的第三个方面，提供了一种，该方法包括将至少一种p53或p53相关途径的抑制剂和至少一种促生长剂给予以下的一种或多种胚胎、卵母细胞、精子、雌性动物或雄性动物。促生长剂可以是营养因子或其类似物或衍生物，或者是能够激活营养因子相关的信号传导途径的制剂。可以通过将胚胎瞬时暴露于例如离子霉素的钙离子通道来实现这一点。营养因子可以选自血小板活化因子(PAF)、胰岛素样生长因子-I(EGF-I)和-II(IGF-II)、转化生长因子-α(TGF-α)、表皮生长因子(EGF)、自血病抑制因子(LIF)、集落刺激因子-I(CSF-I)和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)。在一个实施方式中，营养因子是PAF或其类似物或衍生物。在一个实施方式中，营养因子是I本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提高胚胎生存力的方法，所述方法包括将至少一种ｐ５３或ｐ５３相关途径的抑制剂给予以下的一种或多种：胚胎、卵母细胞、精子、雌性动物或雄性动物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：C奥尼尔，
申请(专利权)人：悉尼北方和中部海岸区医疗服务系统，
类型：发明
国别省市：AU[澳大利亚]