用于分离和纯化核酸的核酸吸附性多孔膜以及用于分离纯化核酸的装置制造方法及图纸

本发明专利技术提供一种核酸吸附性多孔膜以及一种使用该膜的装置，该膜具有优异的分离能力、良好的洗涤效率，可以使操作过程方便快捷，并具有自动操作适应性和尺寸减小适应性，可以批量生产分离能力基本上相同的这种膜，并且该膜适用于分离和纯化核酸的方法；用于分离和纯化核酸的核酸吸附性多孔膜具有核酸吸附性固相，该核酸吸附性固相用在分离和纯化核酸的方法中，该固相吸附核酸，该方法包括以下步骤：（１）通过使含有核酸的样品溶液与核酸吸附性固相接触，使得所述核酸吸附到所述固相上；（２）通过使洗涤液与所述固相接触来洗涤该固相，在此期间所述核酸仍吸附在所述固相上；以及（３）通过使回收液与所述固相接触，使得所述核酸从所述固相解吸附。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种用于分离和纯化核酸的核酸吸附性多孔膜以及一种使用该多孔膜的核酸分离纯化装置。更具体地说，本专利技术涉及这样这样一种核酸吸附性膜，其用于通过使用含有核酸的样品溶液并使用核酸分离纯化柱，而从含有核酸的样品中分离和纯化核酸，所述核酸分离纯化柱具有设在容器中的核酸吸附性多孔膜，所述容器具有至少两个开口并具有压力产生装置，本专利技术还涉及一种使用该多孔膜的核酸分离纯化装置。
技术介绍
各种形式的核酸应用于各个领域。例如，在重组核酸
中，核酸以探针、基因组核酸和质粒核酸的形式使用。在诊断领域中，核酸以各种方法使用。例如，在检测和诊断人类病原体时，常常使用核酸探针。同样，核酸也用于检测遗传性病症。核酸还用于检测食品污染物。此外，基于从绘制基因图谱到克隆和重组表达的各种原因，也常常用核酸对所关心的核酸进行定位、识别和分离。在许多情况下，只有极微量的核酸可以利用，因此分离和纯化过程费时费力。这些经常费时费力的操作可能会导致核酸损失。在从来自于血清、尿和细菌培养物的样品中纯化核酸时，会碰到污染和假阳性结果的问题。一种广为人知的纯化方法是把核酸吸附到固相(例如二氧化硅、二氧化硅聚合物或硅酸镁)的表面，随后进行例如洗涤和解吸附操作，以进行纯化(例如，参见专利文献1JP-B-7-51065)。该方法表现出良好的分离能力。但是，该方法在操作简单性、快速性、自动操作适应性和尺寸缩小适应性方面存在不足之处，并且在工业上很难批量生产出性能相同的吸附剂。此外，该方法还有其它缺点，例如操作不方便并且难以加工成各种形状。此外，作为简单高效的分离和纯化核酸的方法，已描述有这样一种方法使用一种用来在固相上吸附核酸的溶液和一种用来使核酸从固相解吸附的溶液，使核酸吸附到固相上，然后再使核酸从固相解吸附，所述固相在其表面上含有带羟基的有机聚合物(参见专利文献2JP-A-2003-128691)。另一方面，还有离心法、使用磁珠的方法和使用滤膜的方法作为分离和纯化核酸的常规方法。例如，作为使用滤膜的核酸分离纯化装置，人们提出了一种机构，其中把若干带有滤膜的滤管固定在台架上，把含有核酸的样品溶液注入滤管中，在该装置内，使用气囊通过密封件形成减压环境，所述密封件位于台架底部周围，由此从排出侧抽吸所有滤管，使样品溶液从滤管中通过，从而使核酸吸附到滤膜上，然后依次注入洗涤液和回收液，随后以相同方式生成减压环境以进行抽吸、洗涤和解吸附(例如，参见专利文献3日本专利No.2,832,586)。但是，常规的分离和纯化方法在收率和纯度方面仍然存在不足之处，还需要进一步改善。此外，常规的自动装置尺寸很大，适用于分析多种样品，但具有如下问题这种装置价格昂贵，并且不适用于样品数少且分析频率低的情况，这样会使处理效率降低。特别是，在样品溶液彼此具有不同性能(例如收集的是全血样品)的情况下，如专利文献3(日本专利No.2,832,586)所述的装置(其中同时抽吸所有的管子)，具有如下问题当部分滤管结束抽吸并因此使抽吸阻力减小时，其它滤管受到的减压力会变小，从而可能使得对高粘度样品溶液的处理不够完全。增大减压容积会造成在减小装置尺寸方面的问题，并且大的减压容积需要一定的时间来实施减压。此外，难以检测溶液是否完全排放，并会使预定的分析时间延长，从而使操作效率受损。此外，对于低粘度样品溶液来说，溶液被过于有力而迅速地从滤管排出，使得泡沫喷溅而落到相邻的滤管和台架上，从而导致污染，因而使分析准确性降低。
技术实现思路
因此，本专利技术的目的是要提供一种核酸吸附性固相，其适用于高收率和高纯度地分离和纯化样品中所含的核酸。本专利技术的另一目的是要提供一种核酸吸附性固相，该固相具有优异的分离能力和良好的洗涤效率，可进行高速简单操作，具有优异的自动操作适应性和尺寸减小适应性，并且可以批量生产出分离能力基本上相同的这样的固相。本专利技术的另一目的是要提供一种核酸分离纯化装置，该装置可以在短时间内高效操作，而不会产生污染且其尺寸可以减小。作为为解决上述问题而进行的深入研究的结果，本专利技术人已发现在分离和纯化核酸的方法中，采用使核酸吸附到多孔膜并从多孔膜解吸附的步骤是有效的。因此，本专利技术提供了一种适用于该方法的核酸吸附性多孔膜。特别是，已经发现在分离和纯化核酸的方法中，通过使用使核酸吸附于其上的多孔膜(核酸通过相互作用吸附于其上，其中离子键不参与作用)来作为所述的多孔膜，可以使核酸从含有核酸的样品溶液中高收率、高纯度地分离出来。本专利技术基于上述发现而完成。也就是说，本专利技术具有以下内容。1.一种用于分离和纯化核酸的核酸吸附性多孔膜，该膜具有在分离和纯化核酸的方法中所使用的核酸吸附性固相，该固相吸附所述的核酸，所述方法包括以下步骤(1)通过使含有核酸的样品溶液与所述的核酸吸附性固相接触，使得所述核酸吸附到所述固相上；(2)通过使洗涤液与所述固相接触来洗涤该固相，在此期间所述核酸仍吸附在该固相上；以及(3)通过使回收液与所述固相接触，使得所述核酸从该固相解吸附。2.如第1项所述的核酸吸附性多孔膜，其厚度为10μm到500μm。3.如第1至2项中任意一项所述的核酸吸附性多孔膜，其平均孔径为0.9μm到5.0μm。4.如第1至3项中任意一项所述的核酸吸附性多孔膜，其具有彼此不对称的前表面和后表面。5.如第4项所述的核酸吸附性多孔膜，其中最大孔径和最小孔径之比为2或2以上。6.如第1至5项中任意一项所述的核酸吸附性多孔膜，其空隙容积为50％到95％。7.如第1至6项中任意一项所述的核酸吸附性多孔膜，其泡点为0.1kgf/cm2到10kgf/cm2。8.如第1至7项中任意一项所述的核酸吸附性多孔膜，其压力损失为0.1kPa到100kPa。9.如第1至8项中任意一项所述的核酸吸附性多孔膜，在25℃的温度和1kg/cm2的压力下，水可以1mL/分钟到5000mL/分钟的量通过所述的膜。10.如第1至9项中任意一项所述的核酸吸附性多孔膜，其中每毫克的所述多孔膜吸附0.1μg或更多量的所述核酸。11.如第1至10项中任意一项所述的核酸吸附性多孔膜，所述多孔膜通过该多孔膜和所述核酸之间的基本上不涉及离子键的相互作用来吸附所述核酸。12.如第11项所述的核酸吸附性多孔膜，其中所述的通过基本上不涉及离子键的相互作用来吸附所述核酸的多孔膜包含具有多糖结构的有机聚合物。13.如第12项所述的核酸吸附性多孔膜，其中所述的吸附所述核酸并包含具有多糖结构的有机聚合物的多孔膜是乙酰值各不相同的醋酸纤维素的混合物。14.如第13项所述的核酸吸附性多孔膜，其中所述的乙酰值各不相同的醋酸纤维素的混合物是三醋酸纤维素和二醋酸纤维素的混合物。15.如第14项所述的核酸吸附性多孔膜，其中以重量计，所述混合物中三醋酸纤维素/二醋酸纤维素的混合比为99∶1到1∶99。16.如第13项所述的核酸吸附性多孔膜，其中所述的乙酰值各不相同的醋酸纤维素的混合物是三醋酸纤维素和单醋酸纤维素的混合物。17.如第13项所述的核酸吸附性多孔膜，其中所述的乙酰值各不相同的醋酸纤维素的混合物是三醋酸纤维素、二醋酸纤维素和单醋酸纤维素的混合物。18.如第13项所述的核酸吸附性多孔膜，其中所述的乙酰值各不相同的醋酸纤维素的混合物是二醋酸纤维素和单醋酸纤维素的混合物。19.本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于分离和纯化核酸的核酸吸附性多孔膜，该膜具有在分离和纯化核酸的方法中所使用的核酸吸附性固相，该固相吸附所述的核酸；所述方法包括以下步骤：（１）通过使含有核酸的样品溶液与所述的核酸吸附性固相接触，使得所述核酸吸附到所述固相上；（２）通过使洗涤液与所述固相接触来洗涤该固相，在此期间所述核酸仍吸附在该固相上；以及（３）通过使回收液与所述固相接触，使得所述核酸从该固相解吸附。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：境野佳树，牧野快彦，森寿弘，
申请(专利权)人：富士胶片株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]