一种注射用人体软组织填充剂及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种注射用人体软组织填充剂及其制备方法，系将来源于治疗者自体的皮肤经过消化分离，得到的真皮成纤维干细胞、成纤维前体细胞、成纤维细胞进行体外全程无血清充分培养后，将收集到的有效成分与浓度５％的葡萄糖注射液或其它注射液以及任选项的其它适用成分制成混悬液，有效成分选自真皮成纤维干细胞、成纤维前体细胞、成纤维细胞中的至少一种及胶原蛋白，每毫升混悬液含有１０００－８０００万个有效细胞成分，胶原蛋白的含量为１０－１００ｍｇ／ｍｌ注射用填充剂。本发明专利技术的优点是：使用的材料取自治疗者自体，无排斥反应及副作用，治疗后见效快，疗效显著，表情自然，效果作用持久，可维持数年。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种细胞类组织填充剂，用于人体软组织的填充和修复，包括除去皱纹和修复凹陷性疤痕。在其组织填充剂中包含了经体外培养、扩增后的自体的成纤维干细胞、成纤维前体细胞、成纤维细胞和胶原蛋白。其制备过程应用了无血清培养材料，最终制备成组织填充剂的注射悬浮液，注射到皱纹、凹陷性疤痕、创伤性皮肤真皮中、以及嘴唇等部位，以达到填充，修复的目的。
技术介绍
通常应用于人体软组织填充的方法可分为真皮填充和皮下填充，这些填充剂以往都不是自体组织活体材料，而是生物合成材料或者异性蛋白。最早应用填充材料是在十九世纪末，它以石蜡作为填充剂，出现了许多并发症，前期效果也不好。六十年代又应用了硅氧烷溶液作为填充剂，也同样出现了局部和全身性反应。随后又应用外源性蛋白作为填充材料，尤其是牛的胶原蛋白填充剂，这种填充剂可以立刻得到治疗效果，但三到六个月内被组织消化吸收。牛的胶原蛋白制备和利用可见美国专利3,949,073和4,424,208及4,488,911。其规格为35mg/ml及65mg/ml，商品名为ZydermI、ZydermII、ZydermIII，在使用Ryder后，90％受治者有抗体产生，1-3％的受治者产生了明显的过敏反应而不能令人满意；因而应用戊二醛交联，然后用细筛过滤，产生出一种Zyplast的交联牛胶原蛋白，从而克服过敏的反应，其制备过程见美国专利4,582,640和4,642,117，但其治疗效果又出现了不平整的问题，是因为戊二醛交联后得到的材料粘性太大。对应用过牛胶原蛋白的受试者调查表明，一个处理过程的效果一般只能持续4-6月。为了消除牛胶原的免疫反应，有人从人的胎盘中提取人胶原，像美国曾经出售过的品牌AUTOLOGEN，见美国专利4,969,912和5,332,802，但也只能维持几个月的时间。美国市场上也出现过一种称为FIBREL的软组织填充剂，它是明胶粉末和氨基乙酸以及受治者的血浆的混合物，它对部分受治者有效，但易出现注射部位团块和疗效不持久等问题。肉毒素(BOTOX)是一种近年来应用广泛的短期注射除皱液，于2004年4月获得FDA的批准，进行临床应用。依靠其可以使面部运动肌肉麻醉而达到治疗效果。因为该制剂操作简便，立即见效而闻名，但其治疗后出现面部表情僵化，疗效短，也有些出现面瘫的问题。爱贝芙(Artecoll)是人工合成颗粒和牛胶原蛋白的复合物，已在加拿大、墨西哥和欧洲应用多年。通过该材料刺激局部真皮而诱导产生自体胶原来达到长期有效的目的，疗效上也出现了治疗者触摸有颗粒感等问题，16％的治疗者的治疗部位出现突出肿块。由于异体材料注射后常出现过敏、排异反应和疗效短等问题，美国Isolagen公司1995年开始在门诊上应用一种培养自体真皮成纤维细胞修复皮肤和软组织缺损的治疗方法(见美国专利5,591,444、5,665,372、5,660,850)，其具体做法是，应用自体取得的皮肤组织，在体外应用含有牛血清的培养液进行培养，最后制备于林格斯液中而得到自体成纤维细胞注射液，它无严重的过敏、排斥反应。但是美国FDA从2000年开始对于应用动物血清制备的、用于人的注射液提出了限用和禁用的要求，并且受试者对于牛血清疑带有疯牛病等病毒的潜在危险提出了质疑，因而Isolagen公司重新开始了三期临床试验。该方法的另一个不足之处是，林格斯液不便于较长时间地保持有效成分的活性，配制成了注射剂后需要很快使用，实际使用中不方便。北京以岭生物工程有限公司从2000年开始开发得到的一种除皱祛疤的注射剂(中国专利申请第03155833.X号)中，应用了自体皮肤，经体外分离、培养和扩增，制成于葡萄糖液中的一种注射剂，治疗疤痕和祛除皱纹。按照中国专利申请号03155833.X的注射剂中的有效成分是用部分含血清的培养液对自体皮肤样品进行组织培养而得到的。在当时的分析技术水平下，其中的有效成分都被表征为成纤维细胞；但经现有分析手段测定，培养和扩增后的有效成分不仅含有成纤维细胞，还含有成纤维干细胞、成纤维前体细胞和少量的胶原蛋白。该技术的不足之处是，注射剂中能立即发挥人体软组织的填充和修复功能的胶原蛋白含量较低，导致注射到疤痕和皱纹处后见效较慢，一般要4-6个月；另外，受治者对使用动物血清作为培养液的成分也可能存有安全性方面的疑惑。近来，申请人应用无血清培养液，从自体皮肤组织中培养出了既可包含大量自体的成纤维干细胞、成纤维前体细胞和成纤维细胞、同时又含有丰富的自体胶原蛋白的复合填充剂，在1-3个月就可出现明显的填充和修复效果，其见效快，疗效持久，自然安全。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种新的自体注射用人体软组织填充剂，它可以用于美容、改善皮肤弹性和光泽、以及其它部位和类型的填充，自然、疗效持久。本专利技术的另一个目的是提供这种注射用填充剂在美容、改善皮肤弹性和光泽、以及其它部位和类型的填充和修复中的应用。本专利技术的另一个目的是提供这种注射用填充剂的制备方法。为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案按本专利技术的注射用人体软组织填充剂由来源于治疗者自体的皮肤经过消化分离，得到的真皮成纤维干细胞、成纤维前体细胞、成纤维细胞进行体外全程无血清培养和扩增后，再与浓度5％的葡萄糖注射液或其它注射液、以及任选的其它适用成分配成，有效成分由选自培养后收集到的真皮成纤维干细胞、成纤维前体细胞、成纤维细胞中的至少一种和胶原蛋白组成；在每毫升填充剂中，有效细胞成分的总个数为1000-8000万个，胶原蛋白的含量为10-100mg/ml，优选20-60mg/ml。按本专利技术的组织填充剂的一个优选方案，所述的填充剂中的自体真皮成纤维干细胞、成纤维前体细胞、成纤维细胞、胶原蛋白是将来源于治疗者自体的少量皮肤(1-30平方毫米的皮肤)，在细胞培养室经过消化分离，得到的真皮成纤维干细胞、成纤维前体细胞、成纤维细胞，在加入了生长因子和营养材料的无血清培养液中进行体外培养和扩增而最终得到的；采用了较长的体外培养和扩增时间，优选6-10周。按本专利技术的组织填充剂的一个优选方案，填充剂中的有效成分由所说的自体真皮成纤维干细胞、成纤维前体细胞、成纤维细胞及胶原蛋白和胶原蛋白共同组成，成纤维干细胞、成纤维前体细胞、成纤维细胞之间的个数比例范围为5-20 20-5 30-70；胶原蛋白的重量比例10-100mg/ml，优选20-60mg/ml注射填充剂。附图说明附图1是成纤维干细胞在100倍光学显微镜下形态学照片；附图2是成纤维前体细胞在100倍光学显微镜下形态学照片；附图3是成纤维细胞在100倍光学显微镜下形态学照片。本专利技术所采集的皮肤组织包括从耳后，切眼袋，切眉，以及其他部位所取的皮肤，为包括表皮和真皮的皮肤。成纤维干细胞、成纤维前体细胞、成纤维细胞和胶原蛋白的鉴定和表征方式为成纤维干细胞采用Brdu抗体测定(黄晖，赖西南，王正国，王丽丽，创伤愈合中物质对表皮干细胞迁移及受体表达的作用；中华创伤杂志2004年；20(3)142-145.利用核标记物)，细胞形态可参见说明书附图1。成纤维前体细胞在100倍光学显微镜下做形态学观察，其标准形态为细小长索状，细胞形态可参见说明书附图2。成纤维细胞在100倍光学显微镜下做形态学观察，其标准形态为呈多触突的长索形细胞，细胞形本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种注射用人体软组织填充剂，其特征在于：由来源于治疗者自体的皮肤经过消化分离，得到的真皮成纤维干细胞、成纤维前体细胞、成纤维细胞进行体外全程无血清培养和扩增后，将收集到的有效成分与浓度５％的葡萄糖注射液或其它注射液、以及任选的其它适用成分配成，有效成分由选自培养后收集到的真皮成纤维干细胞、成纤维前体细胞、成纤维细胞中的至少一种和胶原蛋白组成；每毫升注射用填充剂中，有效细胞成分的总个数为１０００－８０００万个，胶原蛋白的含量为１０－１００ｍｇ／ｍｌ注射用填充剂。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：韩斌，田书彦，
申请(专利权)人：吕伟光，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]