具有N-末端游离硫羟基的新的重组蛋白制造技术

本发明专利技术涉及具有Ｎ末端游离硫羟基的新的修饰的蛋白，其可以通过重组方法生产，并且可以用于进一步化学衍生化。具体地，本发明专利技术涉及具有改变的生物化学、生理化学和药代动力学特性的促红细胞生成素缀合物化合物。更具体地，本发明专利技术的一个实施方案涉及式（Ｍ）↓［ｎ］－Ｘ－Ａ－ｃｙｓ－ＥＰＯ（Ⅰ）的促红细胞生成素缀合物化合物，其中ＥＰＯ是促红细胞生成素部分，选自促红细胞生成素或具有至少一个与野生型人ＥＰＯ不同的氨基酸的促红细胞生成素变体，或任何具有导致骨髓细胞对红细胞的生产增加的生物学性质的其药学可接受的衍生物；ｃｙｓ代表半胱氨酸，并且存在于相对于促红细胞生成素部分的氨基酸序列的－１位；Ａ表示用于将Ｘ化学连接于－１Ｃｙｓ的硫羟基的残基部分的结构；Ｘ是水溶性聚合物，如聚亚烷基二醇或其它聚合物；Ｍ是增加构建体的循环半衰期的有机分子（包括肽和蛋白）；并且ｎ是０到１５的整数。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

【技术保护点】
制备治疗性蛋白缀合物的方法，该缀合物具有缀合到治疗性蛋白的Ｎ末端半胱氨酸的聚合物，其中所述半胱氨酸残基的硫羟基参与所述缀合物的共价键的形成，该方法包括：ａ）获得所述治疗性蛋白的核酸序列，ｂ）选择用于在细胞中表达所述蛋白的信号 序列，并且获得所述信号序列的核酸序列，ｃ）通过将（ｂ）的信号序列工程化到（ａ）的蛋白序列，并且将密码子ＴＧＴ插入这两者之间使得信号序列在ＴＧＴ上游，定向形成构建体，ｄ）使所述构建体在细胞中表达，ｅ）回收由所述构建体编 码的多肽，和ｆ）在Ｎ末端半胱氨酸将所述多肽缀合于聚合物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：C普尔，J米尔斯，M昆宁哈姆，
申请(专利权)人：森托科尔公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]