含有主要是MAN*GLCNAC*糖形的免疫球蛋白制造技术

本发明专利技术涉及免疫球蛋白糖蛋白组合物，其在免疫球蛋白糖蛋白上具有赋予其特定效应物功能的主要Ｎ－聚糖结构。此外，本发明专利技术还涉及药物组合物，其中含有具有特定的富集的Ｎ－聚糖结构的抗体，其中所述Ｎ－聚糖结构是Ｍａｎ↓［３］ＧｌｃＮＡｃ↓［２］。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于产生具有特定的N-连接糖基化(N-linkedglycosylation)模式的糖蛋白的组合物和方法。特别地，本专利技术涉及含有多个具有特定N-聚糖结构的N-聚糖的免疫球蛋白糖蛋白组合物，更特别地，涉及含有免疫球蛋白糖蛋白的组合物，其中多数在免疫球蛋白上具有一种或多种调节，例如促进，特定效应物功能的主要糖形(glycoform)结构。
技术介绍
在人和其它哺乳动物中，糖蛋白调节许多基本的功能，包括催化，信号传导，细胞间通讯，以及分子识别和结合。糖蛋白构成了真核生物体中的非胞质蛋白的大多数(Lis and Sharon，1993，Eur.J.Biochem.2181-27)。多种糖蛋白已被用于治疗目的，在过去的二十年间，天然存在的糖蛋白的重组形式已成为生物技术工业的主要部分。用作治疗剂的重组糖基化蛋白的实例包括促红细胞生成素(EPO)，治疗用单克隆抗体(mAbs)，组织纤溶酶原激活物(tPA)，干扰素-β(IFN-β)，粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，和人绒膜促性腺激素(hCH)(Cumming et al，1991，Glycobiology 1115-130)。随着作为潜在的预防剂和治疗剂生产的重组蛋白接近临床，重组产生的糖蛋白的糖基化模式的变化最近成为科学团体关注的课题。抗体或免疫球蛋白(Ig)是在体液免疫反应中具有重要作用的糖蛋白。抗体可以视为是接头分子，其在体液和细胞防御机制之间提供连接。抗体对抗原的特异性识别导致形成免疫复合体，其可激活多种效应机制，导致该复合体的清除和破坏。在免疫球蛋白的大类中，五个种类的抗体——IgM，IgD，IgG，IgA，和IgE——可以从生物化学上和功能上被区分开，然而局限于可变区的更精细的差别决定着抗原结合特异性。在这五种Ig中，只有两种类型的轻链，称为lambda(λ)和kappa(κ)。没有发现在具有λ或κ链的抗体之间有功能上的差异，这两种类型的轻链的比率随物种而不同。有五种重链种类或同种型，它们决定了抗体分子的功能活性。这五种功能类别的免疫球蛋白是免疫球蛋白M(IgM)，免疫球蛋白D(IgD)，免疫球蛋白G(IgG)，免疫球蛋白A(IgA)和免疫球蛋白E(IgE)。每个同种型在免疫反应中具有特定的功能，它们的不同的功能性质是由重链的羧基末端部分决定的，此处其不与轻链结合。IgG是血浆中最丰富的免疫球蛋白同种型，(参见例如，Immunobiology，Janeway et al，6thEdition，2004，Garland Publishing，New York)。免疫球蛋白G(IgG)分子含有具有恒定和可变区的Fab(抗原结合片段)域和Fc(结晶片段)域。每个重链的CH2域包括在天冬酰胺残基上的用于N-连接糖基化的单个位点，其将N-聚糖连接到Ig分子上，通常是在残基Asn-297处(Kabat et al.，Sequences of proteins ofimmunological interest，Fifth Ed.，U.S.Department of Health andHuman Services，NIH Publication No.91-3242)。对于N-连接的低聚糖的结构和功能方面的分析是生物学中所关心的，有三个主要的原因(1)CH2域的糖基化在进化上是保守的，暗示低聚糖具有重要的作用；(2)免疫球蛋白分子可作为低聚糖异质性分析的模型系统(Rademacher and Dwek，1984；Rademacheret al.，1982)；和(3)抗体含有两个重链的二聚连接，这使得两个低聚糖单位互相直接接触，以致于该免疫球蛋白分子同时包括特定的蛋白质-碳水化合物和碳水化合物-碳水化合物相互作用。已表明Ig的不同的糖基化模式与不同的生物学性质相关(Jefferisand Lund，1997，Antibody Eng.Chem.Immunol.，65111-128；Wrightand Morrison，1997，Trends Biotechnol.，1526-32)。但是，只有少数特定的糖形已知能赋予所希望的生物学功能。例如，在N-连接聚糖上具有减少的岩藻糖化的免疫球蛋白组合物据报道具有增加的与人FcγRIII的结合，因而具有增强的抗体依赖的细胞的细胞毒性(ADCC)(Shields et al.，2002，J.Biol Chem，27726733-26740；Shinkawa et al.，2003，J.Biol.Chem.2783466-3473)。而且，在CHO细胞中制备的岩藻糖化的G2(Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2)IgG组合物据报道增加补体依赖的细胞毒性(CDC)活性至比异源抗体组合物更大的程度(Raju，2004，美国专利申请No.2004/0136986)。也提示了抗肿瘤的最佳抗体是优先与激活的Fc受体(FcγRI，FcγRIIa，FcγRIII)结合，并且最小程度地与抑制性FcγRIIb受体结合的抗体(Clynes et al.，2000，Nature，6443-446)。因此，在Ig糖蛋白上富集特定糖形的能力是高度期望的。通常，糖蛋白上的糖基化结构(低聚糖)随表达宿主和培养条件而不同。非人宿主细胞产生的治疗蛋白质可能含有非人的糖基化，其可能在人中引发免疫原性反应-例如酵母中的超甘露糖化(Ballou，1990，Methods Enzymol.185440-470)；植物中的α(1，3)-岩藻糖和β(1，2)-木糖，(Cabanes-Macheteau et al.，1999，Glycobiology，9365-372)；中国仓鼠卵巢细胞中的N-羟乙酰神经氨酸(N-glycolylneuraminic acid)(Noguchi et al.，1995，J.Biochem.1175-62)和小鼠中的Galα-1，3Gal糖基化(Borrebaeck et al.，1993，Immun.Today，14477-479)。而且，半乳糖苷化可能会随细胞培养条件而变化，可能会使一些免疫球蛋白组合物产生免疫原性，这取决于它们的特定的半乳糖模式(Patel et al.，1992.Biochem J.285839-845)。非人哺乳动物细胞产生的糖蛋白的低聚糖结构倾向于与人糖蛋白更紧密相关。因此，大部分商业的免疫球蛋白都是在哺乳细胞中生产的。然而，哺乳动物细胞作为宿主细胞用于蛋白质生产有几个重要的缺点。除了成本高昂之外，哺乳细胞中的蛋白质表达过程产生糖形的异质群体(heterogeneous populations ofglycoforms)，具有低的体积滴度，并且需要持续的病毒抑制(ongoingviral containment)和显著的时间以产生稳定的细胞系。应当理解，不同的糖形可以深切影响治疗剂的特性，包括药物代谢动力学，药物效应动力学，受体相互作用和组织特异性靶定(Graddiset al.，2002，Curr Pharm Biotechnol.3285-297)。特别地，对于抗体来说，低聚糖结构可以影响与下列相关的特性蛋白酶抗性，FcRn受体介导的抗体血清半衰期，与补体复合物C本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种含有多个免疫球蛋白的组合物，每个免疫球蛋白含有至少一个与之相连的Ｎ－聚糖，其中所述组合物因而含有多个Ｎ－聚糖，其中主要的Ｎ－聚糖基本由Ｍａｎ↓［３］ＧｌｃＮＡｃ↓［２］组成。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：TU格恩格罗斯，H李，S维尔德特，
申请(专利权)人：格利科菲公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]