包含长链RNA的干燥粉末组合物制造技术

本发明专利技术涉及长链RNA的储存稳定的制剂。具体地，本发明专利技术涉及包含长链RNA分子的干燥粉末组合物。本发明专利技术还涉及通过喷雾干燥制备包含长链RNA分子的干燥粉末组合物的方法。本发明专利技术还涉及该包含长链RNA分子的干燥粉末组合物在制备药物组合物和疫苗中的用途，涉及治疗或预防病症或疾病的方法，涉及该包含长链RNA分子的干燥粉末组合物的第一医药用途和第二医药用途，和涉及试剂盒，特别是多部件试剂盒，其包含该包含长链RNA分子的干燥粉末组合物。

Dry powder composition containing long chain RNA

The present invention relates to a stable storage preparation of long chain RNA. Specifically, the present invention relates to a dry powder composition containing long chain RNA molecules. The invention also relates to a method for preparing a dry powder composition containing long chain RNA molecules by spray drying. Dry powder compositions of the invention also relates to the containing long chain RNA molecules in the preparation of pharmaceutical compositions thereof and vaccines, and relates to a method for the treatment or prevention of disease or disease, involving the dry powder composition containing long chain RNA molecules of the first medical application and second medical use, and particularly relates to a kit component kit, dry powder compositions comprising the RNA containing long chain molecules.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含长链RNA的干燥粉末组合物本专利技术涉及长链RNA的储存稳定的制剂。特别地，本专利技术涉及包含长链RNA分子的干燥粉末组合物。此外，本专利技术涉及通过喷雾干燥制备包含长链RNA分子的干燥粉末组合物的方法。本专利技术还涉及该包含长链RNA分子的干燥粉末组合物在制备药物组合物和疫苗中的用途，涉及治疗或预防病症或疾病的方法，涉及该包含长链RNA分子的干燥粉末组合物的第一医药用途和第二医药用途，以及涉及试剂盒，特别是多部件试剂盒，其包括该包含长链RNA分子的干燥粉末组合物。本专利技术是根据DARPA授予的第HR0011-11-3-0001号协议在政府的支持下完成的。政府具有本专利技术的某些权利。在基因治疗和许多其他治疗相关的生物化学和生物技术应用中，出于治疗和诊断目的使用核酸分子是至关重要的。例如，在基因治疗领域中，近年来已经发生快速进展，其中已经实现了有前景的结果。核酸因此被认为是针对传染性和恶性疾病的基因治疗和预防性及治疗性疫苗的重要工具。除了DNA，RNA的应用也代表了现代分子医学中的有利工具。其还表现出一些比DNA细胞转染更优越的性质。如通常已知的，DNA分子的转染可导致严重的并发症。例如，DNA分子的应用具有DNA整合到宿主基因组中的风险。外源DNA整合到宿主基因组中会对宿主基因的表达具有影响，并可以触发致癌基因的表达或肿瘤抑制基因的失活。此外，必需基因——以及因此的该必需基因的产物——也会因为外源DNA整合到基因的编码区而失活。如果DNA整合到涉及细胞生长调节的基因中，那么该事件的结果会是特别危险的。尽管有与其应用相关的风险，DNA仍然代表重要工具。然而，如果使用RNA特别是mRNA代替DNA，则不会出现这些风险。使用RNA而不是DNA的优势是不必在体内施用来源于病毒的启动子元件，并且不会出现到基因组中的整合。此外，为了发挥其作用，RNA不需要克服细胞核障碍。然而，使用RNA的主要劣势是其不稳定性。虽然知道DNA例如裸露DNA当被引入患者循环系统中时通常是不稳定的，因此可能很少有机会影响大多数疾病进程(见例如Poxon等人，PharmaceuticaldevelopmentandTechnology，5(1)，115-122(2000))，在RNA的情况下稳定性的问题变得更加突出。通常已知RNA分子在溶液中的生化稳定性是极低的。RNA易于被普遍存在的核糖核酸酶或被二价阳离子水解，通常例如在溶液中几小时或几天之后被快速降解。甚至在不存在核糖核酸酶的情况下也发生快速降解，例如当RNA在室温下在溶液中储存几小时或几天时。为了避免这种快速降解，通常将RNA(在溶液中)在-20℃或甚至-80℃下并且在无核糖核酸酶的条件下储存以防止RNA的降解。然而这种储存条件并不能充分地防止随着时间的功能损失。另外，应用这种条件是非常成本密集的，尤其对于运输和储存，例如无论何时都必须保证这种低温。已知且已应用的使长链RNA稳定化的唯一方法包括RNA的冻干或冷冻干燥(参见例如WO2011/069587和WO2011/069586)。冻干是本领域已知和公认的用于提高对温度敏感的生物分子例如核酸的储存稳定性的方法。在冻干期间，通常水经由升华从含有核酸的冷冻样品被去除。冻干过程通常以初级干燥步骤和次级干燥步骤为特征。在初级干燥步骤中，核酸(序列)周围的自由水即非结合水和任选的其他组分从冷冻溶液中蒸发。然后，在次级干燥步骤中通过增加热能可以去除在分子基础上通过核酸分子结合的水。由此，失去了核酸周围的水合球。冻干是用于从生物药物去除水分的最常用的处理方法，它可提高这些产品的稳定性、温度耐受性和保质期。然而，冻干的确有其局限性，尤其在需要扩大规模时。冻干的一个主要缺点是含有样品的每一个瓶都必须被单独冻干。由于冻干产物不是以例如粉末形式提供的，冻干产物不能被分成单独的装载物或等份。相反地，通过冻干获得饼状产物，其不能被分成单独的装载物或等份。因此，如果期望粉末状产物，必须进行另外的造粒步骤。目前，用于扩大规模生产的样品冻干涉及成本密集的设备，因为例如需要大量冻干器用于市场生产，其需要大型生产设备。加之冻干所需的时间和需要另外的造粒步骤，使得冻干成为通常不适合用于工业规模生产的技术。尤其在预算紧张和时间及设备空间非常珍贵的环境下，例如制药工业不会认为冻干是有竞争力的方法。少量的案例报道涉及喷雾干燥的核糖核苷酸。通过使用喷雾干燥技术来干燥用于吸入的双链短干扰RNA(siRNA)。Jensen等人(2010)研究了应用于siRNA-负载的聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)纳米颗粒(NP)的喷雾干燥的参数以提供用于吸入的纳米复合微粒。由于认为siRNA在高于55℃的温度下变性，该研究应用了较低的干燥温度(T入口＝45℃；T出口＝30℃)和高的赋形剂浓度(10％至30％)以获得残余含水量小于4％的干燥粉末。US2011/077284公开了提供抗流感病毒的治疗性和可吸入的短siRNA的干燥粉末。其中，实验地确定干燥温度。一般地，入口温度为约65℃至约125℃，而出口温度为约30℃至约70℃。在其中提供的实施例中，siRNA在T出口≤55℃下干燥。粉末一般具有通常为小于10重量％、或小于5重量％或小于3重量％的水含量。另外，该研究表征了干燥粉末的化学稳定性。在干燥粉末组合物在环境条件下储存18个月的时间段后，小于10重量％的活性siRNA降解。然而，没有确定作为干燥粉末储存的siRNA的生物活性。综上所述，本领域存在对于提供允许(技术人员)储存长链RNA而不损失活性、特别是在体内应用中通常观察到的效果的手段的长期且迫切的需求。在这种情况下，现有技术方法产生的挑战性问题为确保核酸的稳定性，特别是较长单链RNA储存和运输的稳定性。现有技术的另一个问题是储存后的核酸的生物活性的损失。最后，通过使用现有技术方法只获得少量核酸。用于递送这些核酸的适当形式及其生产、运输和储存，尤其是RNA运输的提供由于确保用于运输的-20℃和更低的温度的条件而成为问题。此外，长链RNA的冻干，尤其是作为药物而使用具有以下问题：其为非常成本密集和时间密集的，特别是设想以扩大规模的方法进行商业化生产的情况下。因此基本目的是提供核酸分子，特别是长链RNA，其在使用前的储存时不表现出活性损失并且是通过节省成本的生产过程可获得的。具体地，本专利技术的目的是提供在储存稳定的制剂中的长链RNA分子。本专利技术的一个目的是提供包含长链RNA分子的干燥粉末组合物。另外，本专利技术的目的是提供用于制备包含长链RNA分子的干燥粉末的方法，其中RNA分子保持其化学完整性及其生物活性。本专利技术的另一个目的是这种方法可以在工业大规模生产条件下应用，优选通过连续方法。特别的目的是提供允许干燥包含长链RNA分子的液体的方法。为本专利技术的基础的目的通过所要求保护的主题解决。在第一方面，本专利技术涉及颗粒配方中的长链RNA分子。具体地，本专利技术涉及包含长链RNA分子的干燥粉末组合物。在本文描述的本专利技术之前，长链RNA(相比于较短的双链RNA)从未以干燥粉末组合物的形式提供。有利地，根据本专利技术的干燥粉末组合物提供了长链RNA分子的存储稳定形式。另外，根据本专利技术的干燥粉末组合物的特征为较好的处理性质。例如，本专利技术的干燥粉末组合物可以分本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含长链RNA分子的干燥粉末组合物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.05.20 EP 15001517.0;2015.10.13 EP PCT/EP2015/1.一种包含长链RNA分子的干燥粉末组合物。2.根据权利要求1所述的干燥粉末组合物，其包含多个颗粒。3.根据权利要求1或2所述的干燥粉末组合物，其具有7％(重量/重量)或更低的残余水分含量。4.根据权利要求1至3中任一项所述的干燥粉末组合物，其中以体积加权分布的中值粒径为至少1μm。5.根据权利要求1至4中任一项所述的干燥粉末组合物，其中所述颗粒的平均球度为0.7至1.0。6.根据权利要求1至5中任一项所述的干燥粉末组合物，其中所述长链RNA分子以游离长链RNA分子的形式或者以包含所述长链RNA分子的复合物的形式存在。7.根据权利要求1至6中任一项所述的干燥粉末组合物，其中所述长链RNA分子是与阳离子化合物或聚阳离子化合物的复合物形式。8.根据权利要求1至7中任一项所述的干燥粉末组合物，其中所述长链RNA分子为单链RNA分子。9.根据权利要求1至8中任一项所述的干燥粉末组合物，其中所述长链RNA分子包含至少30个核苷酸。10.根据权利要求1至9中任一项所述的干燥粉末组合物，其中所述长链RNA分子包含多于200个核苷酸，优选至少250个核苷酸。11.根据权利要求1至10中任一项所述的干燥粉末组合物，其中所述长链RNA分子包含编码蛋白质或肽的至少一个开放阅读框(ORF)。12.根据权利要求1至11中任一项所述的干燥粉末组合物，其中所述长链RNA分子为mRNA分子。13.根据权利要求1至12中任一项所述的干燥粉末组合物，其中所述长链RNA分子包含至少一种修饰。14.根据权利要求1至13中任一项所述的干燥粉末组合物，其包含至少一种另外的赋形剂。15.一种用于制备包含长链RNA分子的干燥粉末的方法，其中所述方法包括以下步骤：a)提供包含长链RNA分子的液体，b)通过喷雾干燥来干燥步骤a)中提供的液体。16.根据权利要求15所述的方法，其中所述长链RNA分子的特征在于权利要求6至13中任一项所限定特征的任一个。17.根据权利要求15或16所述的方法，其中所述包含长链RNA分子的液体还包含选自冷冻保护剂、冻干保护剂和填充剂的至少一种赋形剂。18.根据权利要求15至17中任一项所述的方法，其中所述包含长链RNA分子的液体不含有脂质化合物。19.根据权利要求15至18中任一项所述的方法，其中所述包含长链RNA分子的液体包含适合于喷雾干燥的溶剂。20.根据权利要求15至19中任一项所述的方法，其中T入口为至少85℃。21.根据权利要求15至20中任一项所述的方法，其中T出口为至少50℃。22.根据权利要求15至21中任一项所述的方法，其中将所述包含长链RNA分子的液体雾化，由所述液体雾化产生的液滴的特征在于300nm至200μm的质量中值空气动力学直径。23.根据权利要求15至22中任一项所述的方法，其中通过使用选自旋转雾化器、压力喷嘴、双流体喷嘴、超声喷雾器和振动孔式气溶胶发生器的雾化器来雾化所述包含长链RNA分子的液体。24.一种通过根据权利要求15至23中任一项所述的方法能够获得的干燥粉末组合物。25.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至14中任一项所述的干燥粉末组合物或根据权利要求24所述的干燥粉末组合物，或者由根据权利要求1至14中任...

【专利技术属性】
技术研发人员：约翰内斯·法比安·艾伯，本雅明·亚兹丹·帕纳，斯蒂芬妮·瑟维希，托马斯·克特雷尔，索斯滕·穆茨科，蒂尔蔓·鲁斯，迈克尔·松塔格，迈克尔·维希根霍恩，卡塔琳娜·科兰德，
申请(专利权)人：库瑞瓦格股份公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE