包含长链RNA的干粉组合物制造技术

本发明专利技术针对长链RNA的储存稳定制剂。特别地，本发明专利技术涉及包含长链RNA分子的干粉组合物。本发明专利技术还针对通过喷雾冻干制备包含长链RNA分子的干粉组合物的方法。本发明专利技术还涉及这种包含长链RNA分子的干粉组合物在制备药物组合物和疫苗中的用途，治疗或预防病症或疾病的方法，这种包含长链RNA分子的干粉组合物的第一和第二医药用途，以及试剂盒，特别是包括这种含有长链RNA分子的干粉组合物的套装试剂盒。

Dry powder composition containing long chain RNA

The invention is for the storage of stable preparation for long chain RNA. In particular, the present invention relates to a dry powder composition containing long chain RNA molecules. The invention also provides a method for preparing a dry powder composition containing long chain RNA molecules by spray freeze drying. The invention relates to a powder composition containing long chain RNA molecules use in preparing pharmaceutical compositions and vaccines, methods of treatment or prevention of disease or disease, the first and second medical use this kind of dry powder compositions containing long chain RNA molecules, and the kit, especially suit kit includes a dry powder composition containing this long chains of RNA.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含长链RNA的干粉组合物本专利技术针对长链RNA的储存稳定制剂。特别地，本专利技术涉及包含长链RNA分子的干粉组合物。本专利技术还涉及通过喷雾冻干制备包含长链RNA分子的干粉组合物的方法。本专利技术还涉及这种包含长链RNA分子的干粉组合物在制备药物组合物和疫苗中的用途，治疗或预防病症或疾病的方法，这种包含长链RNA分子的干粉组合物的第一和第二医药用途，和试剂盒，特别是包括这种含有长链RNA分子的干粉组合物的套装试剂盒。本专利技术是在根据DARPA授予的协议HR0011-11-3-0001号的政府支持下完成的。政府对本专利技术具有一定的权利。在基因治疗和许多其他治疗相关的生物化学和生物技术应用中，核酸分子用于治疗和诊断目的的用途是非常重要的。例如，近年来基因治疗领域已经出现了快速进展，其中已经取得了令人满意的成果。因此，核酸被认为是用于针对感染性疾病和恶性疾病的基因治疗以及预防性和治疗性疫苗接种的重要工具。除了DNA之外，RNA的应用也代表了现代分子医学中受青睐的工具。其还显示出相对于DNA细胞转染的优越性。如众所周知的，DNA分子的转染可能导致严重的并发症。例如，DNA分子的应用承担着DNA整合到宿主基因组中的风险。外源DNA整合到宿主基因组中可能会影响宿主基因的表达，并可能引发致癌基因的表达或肿瘤抑制基因的失活。此外，，必需基因—以及作为结果的这种必需基因的产物—也可以被外源DNA向基因的编码区中的整合而灭活。如果DNA被整合到参与细胞生长调节的基因中，则这种事件的结果可能是特别危险的。尽管有与其应用相关的风险，DNA仍然代表着重要的工具。然而，如果使用RNA特别是mRNA代替DNA则不会发生这些风险。使用RNA而不是DNA的优点是不必须在体内施用病毒来源的启动子元件，并且不会发生向基因组中的整合。此外，为了发挥其的功能，RNA不需要克服到细胞核的屏障。然而，使用RNA的主要缺点是其不稳定性。即使认为DNA如裸DNA在引入患者循环系统时通常是不稳定的，因此其几乎没有机会影响大多数疾病过程(参见例如Poxon等人,PharmaceuticaldevelopmentandTechnology,5(1),115-122(2000))，在RNA的情况下，稳定性的问题甚至变得更加突出。众所周知，溶液中RNA分子的物理化学稳定性极低。RNA易于被普遍存在的核糖核酸酶或二价阳离子水解，并且通常迅速地降解，例如已经在溶液中几小时或几天后。即使在不存在核糖核酸酶的情况下也发生快速降解，例如当RNA在溶液中、在室温下储存几小时或几天时。为了避免这样的快速降解，(在溶液中的)RNA通常被存储在-20℃或甚至-80℃和无核糖核酸酶的条件下以防止RNA的降解。但是，这样的储存条件不能充分地防止功能随时间丧失。另外，应用这样的条件成本非常昂贵，特别是对于运输和存储，例如任何时候都必须保证这样的低温。已知且应用的用于稳定长链RNA的唯一方法包括RNA的冻干或冷冻干燥(参见例如WO2011/069587和WO2011/069586)。冻干是本领域已知且认可的用来增强温度敏感型生物分子例如核酸的储存稳定性的方法。在冻干期间，通常通过升华从含有核酸的冷冻样品中除去水。通常，冻干过程的特征在于主干燥步骤和二次干燥步骤。在主干燥步骤中，核酸(序列)周围的游离水即未结合的水和任选的其他组分从冷冻溶液中蒸发。然后，在二次干燥步骤中通过增加热能将在分子基础上与核酸结合的水除去。由此，失去核酸周围的水合球。冻干是从生物药品中去除水分最常用的加工方法，其可以提高这些产品的稳定性、耐温性和保质期。然而，冻干有其局限性，特别是在需要放大的情况下。冻干的一个主要缺点是含有样品的每一个小瓶必须分开冻干。因为没有提供例如粉末形式的冻干产品，冻干产品不能分为不同的装料或等分试样。相反，通过冻干获得的饼状产品，其不能分成不同的装料或等分试样。因此，如果需要粉末状产品，则必须进行进一步的造粒步骤。目前，用于放大生产的样品冻干涉及高成本的设备，因为例如需要大量的冻干机用于市场生产，其需要大型生产设备。连同冻干所需的时间以及造粒步骤的其他要求，使得冻干技术通常不适合工业规模生产。特别是在预算紧缩的情况中，以及时间和设施空间短缺时，例如制药工业，可能不会考虑将冻干作为有竞争力的方法。少量实例报告涉及喷雾干燥的核糖核苷酸。使用喷雾干燥技术干燥用于吸入的双链短干扰RNA(siRNA)。Jensen等人(2010)研究了用于提供用于吸入的纳米复合微粒的载有siRNA的聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)纳米颗粒(NP)的喷雾干燥中应用的参数。US2011/077284公开了提供针对流感病毒的治疗性和可吸入的短siRNA的干粉。粉末通常具有典型地小于10重量％、或小于5重量％、或小于3重量％的水分含量。在该研究中，还表征了干粉的化学稳定性。在环境条件下将干粉组合物储存18个月后，小于10重量％的活性siRNA发生降解。然而，未确定作为干粉储存的siRNA的生物活性。总结上述情况，本领域长期且紧迫需要的是提供能够使得(技术人员)储存长链RNA而不失去活性的手段，所述活性是通常观察到的作用，特别是在体内应用中的作用。在这种情况下，现有技术方法产生的挑战性问题是确保核酸的稳定性，特别是在较长的单链RNA的储存和递送时的稳定性。现有技术的另一个问题是储存后的核酸失去生物活性。最后，通过使用现有技术的方法，仅获得少量的核酸。由于确保用于装运的-20℃以下的温度条件，提供用于递送以及生产、运输和储存这些核酸的合适形式是问题，特别是RNA的运输是问题。此外，长链RNA的冻干、特别是作为药剂使用的长链RNA的冻干具有高成本和耗时的问题，特别是设想在放大过程的商业生产的情况下。因此，根本目的是提供一种核酸分子，特别是长链RNA，其在使用之前储存时不显示活性损失，并且是可以通过避免成本的生产过程而得到的。具体地，本专利技术的目的是提供储存稳定制剂中的长链RNA分子。本专利技术的一个目的是提供包含长链RNA分子的干粉组合物。此外，本专利技术的目的是提供制备包含长链RNA分子的干粉的方法，其中所述RNA分子保持其化学完整性及其生物学活性。本专利技术的另一个目的是这种方法适用于工业大规模生产条件，优选通过连续法。具体的目的是提供允许干燥包含长链RNA分子的液体的方法。本专利技术的根本目的是通过所要求保护的主题来解决的。在第一方面，本专利技术涉及颗粒制剂中的长链RNA分子。具体地，本专利技术涉及包含长链RNA分子的干粉组合物。在本文所述的专利技术之前，从未提供作为干粉组合物的长链RNA(相对于较短的双链RNA)。有利地，根据本专利技术的干粉组合物提供了长链RNA分子的储存稳定形式。此外，根据本专利技术的干粉组合物的特征在于优异的操作性能。例如，本专利技术的干粉组合物可以分别以任何量或在任何容器中或以任何剂型包装。根据本专利技术的干粉组合物的处理通过其自由流动性被进一步改善。具体地，本专利技术的干粉组合物不形成抑制包装和/或剂量的团块或聚集体。由于其流动性，可以容易地进一步加工根据本专利技术的干粉组合物。例如，所述干粉组合物可以仅通过倾倒，例如从一个容器转移到另一个容器，或者从较大的容器转移进入多个较小的容器。根据实际需要，本专利技术的干粉组合物可以容易地被包装在本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含长链RNA分子的干粉组合物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.05.20 EP 15001517.0;2015.10.13 EP PCT/EP2015/1.一种包含长链RNA分子的干粉组合物。2.根据权利要求1所述的干粉组合物，其包含多个颗粒。3.根据权利要求1或2所述的干粉组合物，其具有7重量％或更少的残余水分含量。4.根据权利要求1至3中任一项所述的干粉组合物，其中体积加权的分布的中值粒度为至少1μm。5.根据权利要求1至4中任一项所述的干粉组合物，其中颗粒的平均球度为0.7至1.0。6.根据权利要求1至5中任一项所述的干粉组合物，其中所述长链RNA分子以游离的长链RNA分子的形式存在，或以包含所述长链RNA分子的复合物的形式存在。7.根据权利要求1至6中任一项所述的干粉组合物，其中所述长链RNA分子与阳离子化合物或聚阳离子化合物形成复合物。8.根据权利要求1至7中任一项所述的干粉组合物，其中所述长链RNA分子为单链RNA分子。9.根据权利要求1至8中任一项所述的干粉组合物，其中所述长链RNA分子包含至少30个核苷酸。10.根据权利要求1至9中任一项所述的干粉组合物，其中所述长链RNA分子包含多于200个核苷酸，优选至少250个核苷酸。11.根据权利要求1至10中任一项所述的干粉组合物，其中所述长链RNA分子包含编码蛋白质或肽的至少一个开放阅读框(ORF)。12.根据权利要求1至11中任一项所述的干粉组合物，其中所述长链RNA分子为mRNA分子。13.根据权利要求1至12中任一项所述的干粉组合物，其中所述长链RNA分子包含至少一个修饰。14.根据权利要求1至13中任一项所述的干粉组合物，其包含至少一种另外的赋形剂。15.一种制备包含长链RNA分子的干粉的方法，其中所述方法包括以下步骤：a)提供包含所述长链RNA分子的液体，b)通过喷雾冻干干燥步骤a)中提供的所述液体。16.根据权利要求15所述的方法，其中所述长链RNA分子的特征在于权利要求6至13中任一项所限定的特征中的任一个。17.根据权利要求15或16所述的方法，其中包含所述长链RNA分子的所述液体还包含选自冷冻保护剂、冻干保护剂和填充剂的至少一种赋形剂。18.根据权利要求15至17中任一项所述的方法，其中包含所述长链RNA分子的所述液体不含有脂质化合物。19.根据权利要求15至18中任一项所述的方法，其中包含所述长链RNA分子的所述液体包含适合于喷雾冻干的溶剂。20.根据权利要求15至19中任一项所述的方法，其中所述干燥包括喷雾冷冻的步骤和冻干步骤。21.根据权利要求15至20中任一项所述的方法，其中使包含所述长链RNA分子的所述液体雾化，并且由所述液体的雾化产生的液滴的特征在于质量中值空气动力学直径为300nm至200μm。22.根据权利要求15至21中任一项所述的方法，其中通过使用选自旋转雾化器、压力喷嘴、双流体喷嘴、超声雾化器和振动孔气溶胶发生器的雾化器使包含所述长链RNA分子的所述液体雾化。23.一种根据权利要求15至22中任一项所述的方法可获得的干粉组合物。24.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至14中任一项所述的干粉组合物或根据权利要求23所述的干粉组合物，或由根据权利要求1至14中任...

【专利技术属性】
技术研发人员：法比安·约翰内斯·艾伯，本雅明·亚兹丹·帕纳，斯蒂芬妮·瑟维希，托马斯·克特雷尔，索斯滕·穆茨科，蒂尔蔓·鲁斯，迈克尔·松塔格，迈克尔·维希根霍恩，卡塔琳娜·科兰德，
申请(专利权)人：库瑞瓦格股份公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE