一种林蛙皮透明质酸的提取方法技术

本发明专利技术提出了一种林蛙皮透明质酸的提取方法，包括：(1)获取林蛙皮粉；(2)利用蒸馏水对林蛙皮粉进行溶解；(3)将林蛙皮粉溶解液进行超高压处理；(4)利用胰酶和碱性蛋白酶对超高压浸出液进行酶解处理；(5)向酶解液中添加乙醇以便生成沉淀，离心收集沉淀并进行干燥处理；(6)利用氯化钠对经过干燥处理后的沉淀进行溶解；(7)向沉淀的溶解液中添加过氧化氢进行脱色；(8)调节pH至4.5‑5.0，并加入氯仿和正丁醇的混合溶液，离心分离出蛋白并收集水相；(9)对水相进行透析，收集透析液；(10)对透析液进行醇沉和干燥处理，以便得到透明质酸精品。该方法工艺简单，透明质酸提取率高、纯度高且活性好。

A method for the extraction of hyaluronic acid from the skin of Rana chensinensis

The invention provides a method of extracting frog skin hyaluronic acid includes: (1) obtain the frog skin powder; (2) to dissolve the frog skin powder with distilled water; (3) the frog skin powder solution of ultra high pressure treatment; (4) by enzymatic treatment of ultra high pressure leaching solution by trypsin and alkaline protease; (5) to the enzyme solution of adding ethanol to precipitate collected by centrifugation and dried; (6) after drying to precipitate was dissolved by sodium chloride; (7) adding hydrogen peroxide solution to precipitate in the decolorization (; 8) adjusted to pH 4.5 5 mixed solution and adding chloroform and n-butanol, isolated protein and collect water; (9) dialysis water, collecting dialysate; (10) by ethanol precipitation and drying for the dialysis solution, in order to obtain the hyaluronic acid products. The process is simple, the extraction rate of hyaluronic acid is high, the purity is high and the activity is good.

【技术实现步骤摘要】
一种林蛙皮透明质酸的提取方法
本专利技术涉及生物
，具体而言，本专利技术涉及一种林蛙皮透明质酸的提取方法。
技术介绍
透明质酸(Hyaluronicacid，简称HA)是一种由β-D-N-乙酰基葡萄糖和β-D-葡萄糖醛酸为结构单元以β-1，4-糖苷键缩合而成的二糖单元，二糖单元再由β-1，3-糖苷键反复交替连接形成HA链。HA链长度最高可达25，000个二糖单元，相对分子质量在104-107道尔顿之间。HA在医药、食品和化妆品等领域具有广泛的应用，具有独特的保湿性能。它可以作为伤口愈合，促进术后粘连作用，可以作为原始材料合成具有抗炎、止痛等作用的新药。由于HA分子中含有的大量羧基和羟基，可与水形成氢键而具有很强的保水能力。因此，HA被当做天然的保湿因子广泛应用到化妆品中。目前可以通过动物组织提取和微生物发酵生产两种方式得到HA，由于目前微生物发酵生产机制尚未成熟，正处于研究阶段，而动物组织提取操作简单，方便，因此适合小规模的生产需要。HA广泛存在于动物的组织、器官中，如鸡冠、牛眼玻璃体、人的脐带以及蛙皮等中含有较多的透明质酸。中国林蛙(RanaChensinensis)是一种集本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从林蛙皮中提取透明质酸的方法，其特征在于，包括：(1)获取林蛙皮粉；(2)利用蒸馏水对所述林蛙皮粉进行溶解，以便得到林蛙皮粉溶解液；(3)将所述林蛙皮粉溶解液在超高压容器内进行超高压处理，以便得到超高压浸出液；(4)利用胰酶和碱性蛋白酶对所述超高压浸出液进行酶解处理，以便得到酶解液；(5)向所述酶解液中添加2‑3倍体积的95％乙醇以便生成沉淀，离心收集沉淀并进行干燥处理；(6)利用氯化钠对经过所述干燥处理后的沉淀进行溶解；(7)向溶解的沉淀中添加过氧化氢进行脱色处理；(8)调节经过所述脱色处理后的溶液的pH至4.5‑5.0，并加入氯仿和正丁醇的混合溶液，搅拌4h，离心分离出蛋白并收集水相；...

【技术特征摘要】
1.一种从林蛙皮中提取透明质酸的方法，其特征在于，包括：(1)获取林蛙皮粉；(2)利用蒸馏水对所述林蛙皮粉进行溶解，以便得到林蛙皮粉溶解液；(3)将所述林蛙皮粉溶解液在超高压容器内进行超高压处理，以便得到超高压浸出液；(4)利用胰酶和碱性蛋白酶对所述超高压浸出液进行酶解处理，以便得到酶解液；(5)向所述酶解液中添加2-3倍体积的95％乙醇以便生成沉淀，离心收集沉淀并进行干燥处理；(6)利用氯化钠对经过所述干燥处理后的沉淀进行溶解；(7)向溶解的沉淀中添加过氧化氢进行脱色处理；(8)调节经过所述脱色处理后的溶液的pH至4.5-5.0，并加入氯仿和正丁醇的混合溶液，搅拌4h，离心分离出蛋白并收集水相；(9)利用磷酸盐缓冲液对所述水相进行透析，收集透析液；(10)向所述透析液中添加2-3倍体积的95％乙醇以便生成沉淀，离心收集沉淀并进行干燥处理，以便得到透明质酸精品。2.根据权利要求1所述的从林蛙皮中提取透明质酸的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述溶解按照下列步骤进行：(2-1)将所述林蛙皮粉溶于蒸馏水中，磁力搅拌4-8h，于4℃冰箱放置至少12h；(2-2)将步骤(2-1)得到的溶液在20-35KHz和100-300W条件下超声处理20-30min，以便得到林蛙皮粉溶解液。3.根据权利要求1所述的从林蛙皮中提取透明质酸的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述超高压处理是在200-400Mpa的压力下保持2-5min，并在2s内卸除压力而完成的。4.根据权利要求1所述的从林蛙皮中提取透明质酸的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述酶解处理按照下列步骤进行：(4-1)调节所述超高压浸出液的pH值至8.0-8.5，添加1％的胰酶并于37℃的水浴中进行第一酶解2-4h，沸水浴灭活所述胰酶，以便得到第一酶解液；(4-2)向所述第一酶解液中添加1％的碱性蛋白酶并于50℃的水浴中进行第二酶解3-6h，沸水浴灭活所述碱性蛋白酶，以便得到第二酶解液。5.根据权利要求1所述的从林蛙皮中提取透明质酸的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述酶解处理按照下列步骤进行：(4-1)调节所述超高压浸出液的pH值至8.0-8.5，添加1％的碱性蛋白酶并于50℃的水浴中进行第一酶解3-6h，沸水浴灭活所述碱性蛋白酶，以便得到第一酶解液；(4-2)向所述第一酶解液中添加1％的胰酶并于37℃的水浴中进行第二酶解2-4h，沸水浴灭活所述胰酶，以便得到第二酶解液。6.根据权利要求1所述的从林蛙皮中提取透明质酸的方法，其特征在于，步骤(5)和步骤(10)中的干燥处理是在40-60℃的真空干燥箱中进行的。7.根据权利要求1所述的从林蛙皮中...

【专利技术属性】
技术研发人员：裴雪涛，南雪，游子娟，单紫筠，岳文，魏红，姚海雷，吴旭敏，练利芳，
申请(专利权)人：华南生物医药研究院，
类型：发明
国别省市：广东,44