【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种快速提取植物根际土中ＡＭ真菌环境ＤＮＡ的方法，包括根际土中ＡＭ真菌相关结构的收集、真菌基因组ＤＮＡ的提取、用ＡＭ真菌特异性引物进行ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ扩增、及扩增片段测序及测序结果分析步骤，其特征在于本方法中所用根际土ＡＭ真菌ＤＮＡ由下列方法得到：ａ．称取１００ｇ根际土壤样品，经湿筛倾析法收集ＡＭＦ厚垣孢子及根外菌丝结构，并将其置于无菌的研钵中，用液氮冷却材料，待水份蒸发后，加入少量石英砂，充分研磨材料使之呈粉末状，然后迅速将粉末状的材料转入２ｍｌ的离心管中；ｂ．在装有材料的离心管中加入６５℃水浴预热的２×ＣＴＡＢ提取液１ｍｌ，使材料完全分散在提取液中，在６５℃水浴锅中温浴１小时，期间每２０分钟摇匀１次；ｃ．将温浴的材料取出置于室温下，待冷却至室温后加入３００μｌ等体积的苯酚－氯仿颠倒混匀，然后６５００转／分钟离心２０ｍｉｎ；ｄ．取上清液１０μｌ转移到另一０．５ｍｌ的离心管中，再加入３００μｌ２０％Ｃｈｅｌｅｘ－１００树脂混匀，置于９９．９℃的ＰＣＲ仪上煮沸１５ｍｉｎ；ｅ．待样品冷却至室温，瞬时离心３０ｓ，取上清液稀释２０－１００倍置于－２０℃冰箱中保存备用或直接作为ＤＮＡ模板进行Ｐ...
【技术特征摘要】
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。