蟾酥提取物在制备T‑型钙离子通道阻断剂药物方面的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种中华大蟾蜍蟾酥提取物，蟾酥灵(英文名：bufalin)，在制备T‑型钙离子通道阻断剂药物方面的应用。该化合物通过非G‑蛋白偶联受体及非酪氨酸激酶受体途径对T‑型钙离子通道产生阻断作用，可以构建包含蟾酥灵的T‑型钙离子通道阻断剂来进行临床镇痛的应用。

Chansu extract in the preparation of T type calcium channel blocking agent application of drugs

【技术实现步骤摘要】
蟾酥提取物在制备T-型钙离子通道阻断剂药物方面的应用
本专利技术涉及生物化学领域，具体涉及一种蟾酥提取物蟾酥灵(英文名：bufalin)在制备T-型钙离子通道阻断剂方面的应用。
技术介绍
蟾酥为我国传统名贵中药，《中国药典》2010年版明确规定本品为蟾蜍科动物中华大蟾蜍或黑眶蟾蜍的干燥分泌物。中医认为具有消肿，清热解毒，止痛之功效，主要用于牙痛，瘰疬，咽喉肿痛，吐泻等疾病。现代药理学研究表明蟾酥具有抗肿瘤、镇痛、局麻、抗炎等作用。目前蟾酥已广泛应用于临床中，在治疗心血管疾病(如心绞痛等)、抗肿瘤、及镇痛方面疗效显著。蟾酥灵(bufalin)是从蟾酥中提取的一种化合物，分子式C24H34O4，相对分子质量为386.5。一系列报道表明，bufalin具有强心、免疫调节、抗肿瘤、抗炎、镇痛等作用。之前的研究表明，bufalin在动物神经病理性痛模型中具有明确的镇痛效果，且无成瘾及耐受性，作用持久，可作为新的疼痛治疗的药物。但是，到目前为止，其产生镇痛作用的靶点及机制还不清楚。电压依赖性钙离子通道分为三家族:L-型钙离子通道(或Cav1),神经元N-,P/Q-和R-型(或Cav2)及T-型钙离子通道(或Cav3)。其中，T-型钙离子通道是一种低压门控性离子通道，具有独特的电生理特性：一个小的去极化后，可使细胞膜快速接近静息膜电位，进而调节神经元兴奋性，参与痛觉神经信号传递。目前为止，分子生物学已鉴定出三种低压门控T-型钙通道亚单位，分别为Cav3.1、Cav3.2和Cav3.3。研究显示，异常的低压门控T-型钙通道表达可导致癫痫、神经胶质瘤及癌症痛、糖尿病疼痛、三叉神经痛等神经病理性疼痛。此外,药理学、遗传学及功能学研究都表明,外周神经元T-型钙通道可以促进和放大来自外周的疼痛信号。因此，基于低压门控T-型钙通道改变膜兴奋性，进而影响痛觉,可被认为是治疗急性和慢性疼痛的潜在治疗靶点。然而，蟾酥提取物蟾酥灵(bufalin)是否对T-型钙离子通道是否产生作用，目前并无任何报道。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供蟾酥提取物蟾酥灵(bufalin)在制备T-型钙离子通道阻断剂方面的应用。为了解决上述问题，本专利技术提供的技术方案是：蟾酥灵(bufalin)在制备T-型钙离子通道阻断剂药物方面的应用。本专利技术的一优选技术方案，所述蟾酥灵(bufalin)通过抑制T-型钙离子通道发挥在神经系统疾病治疗中的作用，特别是用于制备镇痛药物的应用。本专利技术的一优选技术方案，蟾酥灵抑制DRG神经元T-型钙离子通道电流，具有剂量依赖性，其有效剂量(IC50)为17μM。本专利技术的第二方面提供了一种药物组合物，为T-型钙离子通道抑制剂，其含有有效成分的蟾酥灵(bufalin)及药学上可接受的辅料。相对于现有技术中的方案，本专利技术的优点在于：本专利技术揭示了蟾酥灵(bufalin)在制备T-型钙离子通道阻断剂方面的应用，所述蟾酥灵(bufalin)可通过抑制T-型钙离子通道发挥神经系统疾病(如镇痛等)方面的临床治疗。附图说明下面结合附图及实施例对本专利技术作进一步描述：图1：小鼠背根神经节神经元T-型钙离子通道检测及验证；其中图1A为记录到的小直径DRG神经元T-型钙离子通道电流。图1B为不同浓度NiCl2对小直径DRG神经元T-型钙离子通道的抑制作用的统计图。图2：蟾酥灵可剂量依赖性抑制T-型钙离子通道电流；图2A为蟾酥灵的化学结构图。图2B显示了蟾酥灵在100μM浓度时抑制T-型钙离子通道的电流示意图。图2C为蟾酥灵抑制T-型钙离子通道的量效曲线。图3：蟾酥灵通过非受体及非蛋白激酶途径抑制T-型钙离子通道；图3A为电极内分别给予G-蛋白抑制剂GDP-β-S，蛋白激酶A抑制剂PKI6-22，及酪氨酸激酶抑制剂PKI-PA后，均不影响蟾酥灵对T-型钙离子通道的抑制。图3B为细胞孵浴Na+/K+-ATP酶阻断剂乌本苷，并不影响蟾酥灵对T-型钙通道电流；图3C为图3B的柱状统计图。具体实施方式以下结合具体实施例对上述方案做进一步说明。应理解，这些实施例是用于说明本专利技术而不限于限制本专利技术的范围。实施例中采用的实施条件可以根据具体厂家的条件做进一步调整，未注明的实施条件通常为常规实验中的条件。实施例本实施例运用全细胞膜片钳中电压钳的记录方法，记录T-型钙离子通道电流，研究蟾酥灵(bufalin)对小鼠背根神经节神经元T-型钙离子通道电流的影响，并阐明其机制。1)小鼠背根神经节神经元T-型钙离子通道检测及验证实验材料昆明种小鼠，体重18-22g，由苏州大学动物中心提供，动物合格证号：SYXK(苏)2007-0035。NiCl2购自Sigma公司。实验方案显微外科取DRG，酶法分离DRG神经元，应用全细胞膜片钳记录小直径DRG神经元T-型钙离子通道电流，每组记录5-7个细胞。实施例检测了NiCl2对小鼠小直径(胞体直径小于30微米)背根神经元T-型钙离子通道电流的影响。结果如图1所示。全细胞膜片钳结果表明，10μM及100uMNiCl2分别能够抑制小直径DRG神经元T-型钙离子通道电流65.3％及82.6％。图1A为记录到的小直径DRG神经元T-型钙离子通道电流。DRG神经元钳制在-110mV，刺激方波至-40mV，刺激时程为40ms。图1B为不同浓度NiCl2(10μM，n＝5；100μM，n＝6)对小直径DRG神经元T-型钙离子通道的抑制作用的统计图。**p<0.01；***p<0.001vs.control。2)蟾酥灵(bufalin)可剂量依赖性抑制T-型钙离子通道电流。实验材料蟾酥灵(bufalin)(批号：SLBQ5349V)购自美国Sigma公司。实验方案：实施例应用全细胞膜片钳记录小鼠小直径DRG神经元T-型钙离子通道电流，每组记录5-7个细胞。检测蟾酥灵(bufalin)对DRG神经元T-型钙离子通道电流的影响。结果如图2所示，全细胞膜片钳结果显示蟾酥灵(bufalin)能够抑制DRG神经元T-型钙离子通道电流，并具有剂量依赖性。图2A为蟾酥灵(bufalin)的化学结构图。图2B显示了蟾酥灵(bufalin)在100μM浓度时抑制T-型钙离子通道的电流示意图。蟾酥灵(bufalin)洗脱后，电流可部分恢复。DRG神经元钳制在-70mV，刺激方波采用-110mV至-40mV，刺激时程为40ms。图2C显示蟾酥灵(bufalin)可剂量依赖性抑制T-型钙离子通道电流。浓度依赖曲线采用sigmoidalHill方程[Y＝1/(1+10(logIC50-X)nH],其中X是浓度的对数值，IC50是半数有效剂量，经Prism5.0(Graph-PadSoftwareInc.,CA,USA)软件拟合。括号内数字为各浓度蟾酥灵(bufalin)作用的细胞记录个数。结果显示其最大抑制率为41.13±3.17％(n＝5)，半数有效量(IC50)为17μM。3)蟾酥灵(bufalin)抑制T-型钙离子通道均不依赖于G蛋白耦联受体、蛋白酪氨酸激酶受体及Na+/K+-ATP酶途径。实验材料：实验用G蛋白阻断剂GDP-β-S、Na+/K+-ATP酶抑制剂乌本苷(ouabain)、受体酪氨酸激酶阻断剂proteinkinaseinhibit本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蟾酥提取物蟾酥灵在制备T‑型钙离子通道阻断剂药物方面的应用。

【技术特征摘要】
1.一种蟾酥提取物蟾酥灵在制备T-型钙离子通道阻断剂药物方面的应用。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述蟾酥灵通过抑制T-型钙离子通道用于制备镇痛药物。3.根据权利要求1所述的用途，...

【专利技术属性】
技术研发人员：陶金，柯进，季和夷，张园，李华，蒋星红，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32