一种去除蟾酥药材中刺激性物质的方法技术

本发明专利技术公开了本发明专利技术公开了一种去除蟾酥刺激性物质的方法，该方法是取蟾酥药物粉末和水按一定比例混合，提取一段时间，静置，液固分离，去除上清液，得到去除蟾酥药材中刺激性物质的蟾酥药材。本发明专利技术通过药理实验和化学分析手段相结合，通过大量实验筛选工艺，采用本发明专利技术的方法可以将蟾酥中多肽，色胺等刺激性的物质明显减少，使药材蟾酥的刺激性明显降低，但是抗肿瘤活性成分得到很好的保留，不影响抗肿瘤活性。本发明专利技术提供的方法，工艺设计合理，可操作性强，不但能有效去除蟾酥药材的刺激性物质，降低蟾酥的刺激性，还不降低其抗肿瘤效果，能为蟾酥药材的临床应用提供安全保障。

A method for stimulating substance removal in Venenum Bufonis

The present invention discloses the invention discloses a method of material removal arenobufagin stimulation, the method is to take the drug Chansu powder and water according to a certain proportion, extraction time, static, liquid-solid separation, removing supernatant by removal of Bufonis herbs irritant substances in Venenum bufonis. The invention combines the pharmacological experiment and chemical analysis methods, through a lot of experiments in the screening process, the method of the invention can be toad venom peptides, serotonin and other irritating substances significantly reduced, the stimulation of the medicine Venenum Bufonis decreased significantly, but the anti-tumor active composition of well preserved and does not affect the antitumor activity. The method provided by the invention, the process design is reasonable, feasible, not only can effectively remove irritants Bufonis reduce irritation, arenobufagin, also does not reduce its anti-tumor effect, to provide security for the clinical application of Venenum bufonis.

【技术实现步骤摘要】
一种去除蟾酥药材中刺激性物质的方法
本专利技术涉及中药
，具体涉及一种去除蟾酥药材中刺激性物质的方法。
技术介绍
蟾酥是蟾蜍科动物中华大蟾蜍或黑眶蟾蜍的耳后腺及皮肤腺分泌的白色浆液，经加工干燥而成，是我国传统的名贵中药之一，具有解毒止痛、开窍醒神等功能。近年研究发现蟾酥还有抗肿瘤、镇痛、强心、抗白血病等作用，广泛用于心血管、肿瘤相关疾病。然而蟾酥有毒，多数入药需经炮制，其炮制方法多种多样，自古以来的方法有焙法、酒制、乳汁制和醋制等。炮制后毒性降低，但是临床用药蟾酥还是有较大的刺激性和毒性。含蟾酥制剂往往具有强烈的刺激性。比如用于肿瘤治疗的华蟾素注射液，研究者随机抽取80例患者观察(参麦注射静滴为对照观察)，华蟾素注射液的血管刺激性发生比率高达60.94％，说明其具有强烈的血管刺激性。对于含蟾酥的经典制剂六神丸，也报道具有口腔粘膜刺激性。对于这种药物刺激性，以往观点认为其可能来自于制剂中其他药物或辅料，忽略了蟾酥本身具有的刺激性。已有大量研究证实蟾酥抗肿瘤效果确切，具有良好的新药开发前景，但蟾酥刺激性明显，明显制约了蟾酥临床用药安全。因此，很有必要在现有技术的基础上研究开发一种能有效去除蟾酥中刺激性物质，又不会对其活性物质造成损失的方法。
技术实现思路
专利技术目的：本专利技术的目的是为了解决现有技术的不足，提供一种工艺设计合理，可操作性强，既能有效去除蟾酥中刺激性物质，又能保留其抗肿瘤活性物质的方法。采用本专利技术的方法可为物制剂生产提供更为安全的蟾酥药材。技术方案：为了实现以上目的，本专利技术采取的技术方案为：一种去除蟾酥药材中刺激性物质的方法，包括以下步骤：取蟾酥药物粉末和水按一定比例混合，提取一段时间，静置，液固分离，去除上清液，得到去除蟾酥药材中刺激性物质的蟾酥。作为优选方案，以上所述的去除蟾酥药材中刺激性物质的方法，蟾酥药物粉末的质量毫克与水的体积毫升比为1：0.01～100。作为更加优选方案，所述的去除蟾酥药材中刺激性物质的方法，蟾酥药物粉末的质量毫克与水的体积毫升比为1：0.01～0.25。作为更加优选方案，所述的去除蟾酥药材中刺激性物质的方法，蟾酥药物粉末的质量毫克与水的体积毫升比为1：0.025～0.05。作为优选方案，以上所述的去除蟾酥药材中刺激性物质的方法，所述的水为pH值为5～6的酸水或中性水。作为优选方案，以上所述的去除蟾酥药材中刺激性物质的方法，所述的提取方法为浸提或者超声提取，特别优选超声提取法。作为优选方案，以上所述的去除蟾酥药材中刺激性物质的方法，超声提取时间为5～120min，特别优选30min，提取温度为0～5℃，特别优选0℃。作为优选方案，以上所述的去除蟾酥药材中刺激性物质的方法，静置的温度为4℃，静置时间为2～12小时，特别优选静置2小时。本专利技术通过大量实验筛选静置的温度和时间，静置温度过高或过低不能有效去除刺激下杂质，且能将活性成分去除，因此本专利技术通过大量实验筛选得到最佳的静置的温度为4℃，静置时间为2小时。作为优选方案，以上所述的去除蟾酥药材中刺激性物质的方法，其特征在于，液固分离方法为过滤法、减压抽滤或离心法，特别优选离心法。离心法时转速为5000-20000rpm/分钟。实验过程中，如加入水过多，会使有效成分少量溶出，降低疗效，但是过少的水又不能完全将刺激性物质完全溶出，因此，本专利技术通过单因素筛选，确定最佳的蟾酥药物粉末的质量毫克与水的体积毫升比为1：0.025和1：0.05。另外本专利技术筛选结果表明，当采用pH值为5～6的酸水时，具有将刺激性成分快速溶出的优点。同时本专利技术对提取方法进行了优选，实验结果表明，采用冰水浴(0℃)超声提取的方法可以有效的将刺激性成分溶出，而不溶出有效成分，实验对比表明，超声提取过程中温度过高会降低蟾酥药材的药效活性，在冰水浴条件下超声可以使刺激性成分很好溶出而不影响其活性。超声提取后，需要进行静置处理，本专利技术通过大量实验筛选静置的温度和时间，静置温度过高或过低不能有效去除刺激下杂质，且能将活性成分去除，本专利技术优选得到最佳的静置处理的温度，实验结果表明静置的温度为4℃，静置时间为2～12小时，特别优选静置2小时，能使有效成分沉淀，而刺激性成分溶解在上清液中。因此本专利技术通过大量实验筛选得到最佳的静置的温度为4℃，静置时间为2小时。本专利技术根据蟾酥药材中刺激性为色胺，多肽等物质，有效成分甾烯类等物质的特点，通过大量实验筛选提取溶剂种类，提取溶剂和蟾酥药材的用量比，提取方法，提取时间和温度，静置温度和时间，固液分离方法，优选得到最佳的处理工艺。实验结果表明。经过本专利技术方法处理后的蟾酥药材刺激性几乎完全去除，降低了刺激下，增加了安全性，但是有效成分得到很好的保留，保证疗效，取得了非常好的技术效果。有益效果：本专利技术提供的去除蟾酥药材中刺激性物质的方法具有以下优点：本专利技术提供的去除蟾酥药材中刺激性物质的方法，通过大量实验筛选得到最佳工艺，采用化学分析和药理分析相结合的方法，对蟾酥刺激性物质的去除工艺进行了全面分析考察。整个处理工艺设计合理，可操作性强，处理效率高，可实现工业化生产，处理得到的蟾酥药材刺激性成分小，安全性高，并且保留有效成分，从而可为蟾酥临床安全用药提供有利保障。附图说明图1为处理前后蟾酥药材样品的总离子流图。图2为处理前后蟾酥药材样品刺激性的色胺类成分的峰面积变化图。图3为处理前蟾酥中刺激性肽类物质的水平图。图4为处理后蟾酥中刺激性肽类物质的水平图。图5为处理前后蟾酥药材样品的抗肿瘤活性结果图。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐明本专利技术，应理解这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围，在阅读了本专利技术之后，本领域技术人员对本专利技术的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。实施例1蟾酥刺激性去除工艺一.实验方法1.工艺流程1.1精密称取蟾酥80mg生药，加入2ml超纯水涡旋混匀，冰水浴超声10min，4℃静置2h，然后离心(12000r，4℃)20min，去除上清液，再加2ml超纯水重复操作一次，得下层固体即可。简称样本1。1.2精密称取80mg生药，加入4ml超纯水涡旋混匀，冰水浴超声10min，4℃静置2h，然后离心(12000r，4℃)20min，去除上清液，再加4ml超纯水重复操作一次，得下层固体即可。简称样本2。1.3精密称取80mg生药不做任何处理，作为对照组。简称样本3。2.蟾酥有效成分提取分别取以上样本1，2，3分别加入8ml80﹪乙醇，冰水浴超声30min，离心(12000r，4℃)20min，分别取上清液收集备用。3.化学分析取上述2中的上清液200ul，经0.22um有机膜过滤，UPLC-qTOF进样分析；另取上述2中的上清液400ul，离心浓缩挥干乙醇，再用0.1％甲酸水复溶至200um，超滤管超滤，离心(14000r，4℃)15min，取200ul上清液，进样分析NanoHPLC-Orbitrap质谱进样分析。4.蟾酥抗肿瘤活性细胞实验(MTT)取上述2中的上清液100ul，稀释1000倍，再依次稀释，浓度分别为0.1、1、10ug/ml，利用SMMC-7721(肝癌细胞)测定蟾酥的抗肿瘤活性。5.蟾酥刺激性大鼠实验：分别取上述2中的上清液7ml，离心浓缩，加1ml含0.5﹪D本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种去除蟾酥药材中刺激性物质的方法，其特征在于，包括以下步骤：取蟾酥药物粉末和水按一定比例混合，提取一段时间，静置，液固分离，去除上清液，得到去除蟾酥药材中刺激性物质的蟾酥药材。

【技术特征摘要】
1.一种去除蟾酥药材中刺激性物质的方法，其特征在于，包括以下步骤：取蟾酥药物粉末和水按一定比例混合，提取一段时间，静置，液固分离，去除上清液，得到去除蟾酥药材中刺激性物质的蟾酥药材。2.根据权利要求1所述的去除蟾酥药材中刺激性物质的方法，其特征在于，蟾酥药物粉末的质量毫克与水的体积毫升比为1：0.01～100。3.根据权利要求2所述的去除蟾酥药材中刺激性物质的方法，其特征在于，蟾酥药物粉末的质量毫克与水的体积毫升比为1：0.01～0.25。4.根据权利要求2所述的去除蟾酥药材中刺激性物质的方法，其特征在于，蟾酥药物粉末的质量毫克与水的体积毫升比为1：0.025～0.05。5.根据权利要求1至4任一项所述的去除蟾酥药材中...

【专利技术属性】
技术研发人员：马宏跃，段金廒，钱大玮，唐志书，牛会霞，曹琴，王子月，
申请(专利权)人：南京中医药大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32