一种龙胆离体再生体系的建立方法技术

本发明专利技术公开了一种龙胆离体再生体系的建立方法，龙胆属多年生草木，根茎短，簇生多数细长的根，根长可达25厘米，淡棕黄色。茎直立，粗壮，通常不分枝，粗糙。叶对生，无柄，基部叶甚小，鳞片状；中部及上部叶卵形、卵状披针形，先端渐尖，基部连合抱于节上，叶缘及叶脉粗糙，花无梗，数朵成束簇生于茎顶及上部叶腋。蒴果长圆形，有短柄，成熟时2瓣裂。种子细小，根及根茎可入药。春、秋均可采收，晒干。用于泻肝胆实火，除下焦湿热。龙胆通过植物组织培养技术以GGB途径再生的方法。本发明专利技术以龙胆的成熟孢子为外植体，经过外植体消毒、孢子萌发培养、增殖与分化等步骤建立了龙胆离体再生体系，对瀕危植物保护和缓解商业化生产。

A method for the establishment of a gentian regeneration system in vitro

The invention discloses a method for establishing regeneration system of Gentiana in vitro. The perennial grass of Gentiana is short, and its roots are short, and its clusters are mostly slender. Its roots can grow up to 25 centimeters and light brown yellow. Stem erect, stout, usually unbranched, rough. Leaves opposite, sessile, basal leaves are small, scaly; middle and upper leaves ovate, ovate lanceolate, apex acuminate, connate is held at the festival, leaf margin veins and rough, flowers sessile, number of flowers into fascicles in stem top and upper axils. Capsule oblong, with short handle, 2 cleft when mature. The seeds are fine and the roots and rhizomes are medicable. Spring and autumn can be harvested and dried. It is used to purge the liver and gallbladder, with the exception of the heat and heat of the lower coke. Gentiana is regenerated by GGB pathway through plant tissue culture. The mature spores of Gentiana were used as explants, and the regeneration system of Gentiana in vitro was established through disinfection of explants, spore germination, culture, proliferation and differentiation.

【技术实现步骤摘要】
一种龙胆离体再生体系的建立方法
本专利技术涉及植物生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种龙胆离体再生体系的建立方法。
技术介绍
龙胆又名：草龙胆、四叶胆、水龙胆、地胆草。属多年生草木，高30~60厘米。根茎短，簇生多数细长的根，根长可达25厘米，淡棕黄色。茎直立，粗壮，通常不分枝，粗糙。叶对生，无柄，基部叶甚小，鳞片状；中部及上部叶卵形、卵状披针形或狭披针形，先端渐尖或急尖，基部连合抱于节上，叶缘及叶脉粗糙，主脉3条基出。花无梗，数朵成束簇生于茎顶及上部叶腋。蒴果长圆形，有短柄，成熟时2瓣裂。种子细小，线形而扁，褐色，四周有翅。花期9~10月，果期10月。龙胆的根及根茎可入药。春、秋均可采收，秋采较好，晒干。我国大部份地区均有分布，生于林缘及山坡草丛、灌木丛中。龙胆性寒，味苦涩。具有泻肝胆实火，除下焦湿热功效。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供出一种龙胆离体再生体系的建立方法，本专利技术以龙胆的成熟孢子为外植体，经过外植体消毒、孢子萌发培养、增殖与分化等步骤建立了龙胆离体再生体系，从而实现了本专利技术的目的。制造方法简单，技术容易，形成生产能力快，收益大。本专利技术的一种本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种龙胆离体再生体系的建立方法，其特征在于包括以下步骤：（1）外植体采取及处理：选择孢子囊群盖变为褐色、孢子囊群没有开裂的孢子叶剪下，置于干燥纸袋中，自然晾干，8天后孢子囊自然开裂，孢子散落于纸袋中，清除袋内杂质，收集干燥的孢子置于离心管中，并将装有孢子的离心管置于冰箱5℃保存备用;（2）孢子的消毒：选取经步骤（1）处理后的孢子置于1.8mL离心管中，在离心管中加入4滴吐温和适量蒸馏水，盖上离心管盖,稍稍摇晃后平放静置10min，然后将孢子在混合液中震荡均匀后转移到快速滤纸上，通过漏斗将过滤的废水用锥形瓶接住并迅速将该过滤装置置于超净工作台中，先用无菌水冲洗6次后用70%乙醇浸泡46s，用无菌...

【技术特征摘要】
1.一种龙胆离体再生体系的建立方法，其特征在于包括以下步骤：（1）外植体采取及处理：选择孢子囊群盖变为褐色、孢子囊群没有开裂的孢子叶剪下，置于干燥纸袋中，自然晾干，8天后孢子囊自然开裂，孢子散落于纸袋中，清除袋内杂质，收集干燥的孢子置于离心管中，并将装有孢子的离心管置于冰箱5℃保存备用;（2）孢子的消毒：选取经步骤（1）处理后的孢子置于1.8mL离心管中，在离心管中加入4滴吐温和适量蒸馏水，盖上离心管盖,稍稍摇晃后平放静置10min，然后将孢子在混合液中震荡均匀后转移到快速滤纸上，通过漏斗将过滤的废水用锥形瓶接住并迅速将该过滤装置置于超净工作台中，先用无菌水冲洗6次后用70%乙醇浸泡46s，用无菌水清洗6次后用0.1%升汞溶液消毒15min，再用无菌水清洗6次后备用;（3）孢子萌发培养：将经步骤（2）处理后的孢子配置成浓度为2.0mg/mL的孢子悬浊液接种于萌发培养基上进行孢子萌发培养,接种后置于每天光照11小时，光照强度为1800lx，培养温度为24℃的条件下培养直至孢子萌发，所述的萌发培养基为：MS+2.0mg/L6-BA+5mg/L2,4-D+3.6%蔗糖+0.6%...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗荣棋，
申请(专利权)人：罗荣棋，
类型：发明
国别省市：广西,45