An aggregation based affinity chromatography method for the preparation of reversible modification. The invention relates to a preparation method of an affinity chromatography column with a reversible modifier, which belongs to the field of material technology. The preparation method for the cellulose anion liquid solution and emulsifier mixed solution after the formation of the breasts, and pour it into the column, remove excess oil and ionic liquid, porous fiber column material. The chelated copper ions in the matrix are physically combined with the affinity ligands, and the affinity column can be regenerated by adsorption / analytical reaction. The results show that the crystallinity of the cellulose column modified by IDA is slightly lower, but the structure is not changed, and good mechanical properties have been maintained. Affinity chromatography of glycoproteins adsorption capacity of up to 18.9 mg mL 1, and maintain good circulation adsorption efficiency after use. The above results show that the affinity chromatography column material prepared by this method is a kind of active material which can be used efficiently in the field of protein adsorption.
【技术实现步骤摘要】
一种具有可逆修饰的凝聚素基亲和色谱柱的制备方法
本专利技术属于材料
,具体而言,涉及一种高选择性、低成本的亲和配基的设计合成,特别涉及一种利用金属螯合作用构建具有配基可逆修饰的凝聚素亲和整体柱的新方法。
技术介绍
在亲和色谱法是一种分离和分析生物大分子的重要方法,它可以特异性结合混合溶液中的生物分子。这种亲和吸附方法关键是在生物分子和固定在色谱基质多孔表面的配体间的可离解的特定配合物。目前,不同的配合物,如酶-底物,抗原-抗体和受体的补充物等已广泛应用于亲和色谱的制备。通常,可利用一系列的化学反应将亲和配体固定在基质上,使吸附剂获得较好的稳定性。然而,这种方式是使亲和配体通过共价结合的方式固定在载体上,这种固定方式是不可逆的。其缺点是:在反复分离操作之后,一旦载体上的亲和配体失去活性,昂贵的色谱基质则需作为废物被移除,因此分离成本较高。另外,这种共价结合方式是一种随机化学反应,存在着使配体上起亲合作用的氨基酸残基屏蔽掉的风险,从而导致非特异性吸附,降低最终的分离效率。为了弥补以上制备亲和色谱过程中的缺点,本专利技术设计了一种新型制备方法,用以制备高效率的蛋白色谱中的亲和吸附剂。该制备方法的关键点在于:在配基结构设计上,引入具有螯合作用的金属离子,使其通过物理吸附作用分别连接载体和亲和配基,配基的可逆修饰通过螯合的金属离子实现。需要注意的是,在制备具有可逆修饰特性的亲和吸附剂过程中,需要对蛋白质/亲和配基的体系进行系统筛选,使亲和配基对蛋白质的吸附解析作用不受金属螯合作用的影响。基于这种思路,我们通过三步合成了具有可逆修饰的亲和色谱柱。研制过程如下:( ...
【技术保护点】
一种具有可逆修饰的凝聚素基亲和色谱柱的制备方法,其特征在于包括如下步骤:(1)将无水的高结晶度纤维素溶于氯化1‑丁基3‑甲基咪唑,油浴反应温度为80~110℃,在磁力搅拌下反应11~13小时,形成浓度为5~10 wt%的溶液;(2)将环己烷和吐温60加入上诉溶液,加入比例分别为0.5~1.0和0.05~0.1,进行磁力搅拌,转速为2000rpm,形成纤维素乳化溶液;(3)迅速将上述油/水乳化液倒入至玻璃色谱柱中,冷却后加入0.1~0.3M的硫酸钠溶液进行侵泡,分别用酒精和蒸馏水冲洗,用乙二醇二环氧丙醚进一步交联,得到多孔纤维素柱;(4)将上述纤维素柱与高点酸钠溶液作用4.0小时,然后将50℃的0.5M PEHA与0.1M氢氧化钠混合液循环作用12小时,依次与三种溶液(戊二醛,0.2M, pH9.0, 2.5h; IDA, 0.1M, pH11, 12h, 70℃; CuSO4, 0.5M, Ph5.0, 2h)作用,得到Cu(II)‑IDA‑MCM型纤维素柱;(5)将上述纤维素柱依次与1 mg mL‑1凝聚素(Con A)在4℃下作用12h,得到Con A‑Cu(II)‑IDA‑MCM ...
【技术特征摘要】
1.一种具有可逆修饰的凝聚素基亲和色谱柱的制备方法,其特征在于包括如下步骤:(1)将无水的高结晶度纤维素溶于氯化1-丁基3-甲基咪唑,油浴反应温度为80~110℃,在磁力搅拌下反应11~13小时,形成浓度为5~10wt%的溶液;(2)将环己烷和吐温60加入上诉溶液,加入比例分别为0.5~1.0和0.05~0.1,进行磁力搅拌,转速为2000rpm,形成纤维素乳化溶液;(3)迅速将上述油/水乳化液倒入至玻璃色谱柱中,冷却后加入0.1~0.3M的硫酸钠溶液进行侵泡,分别用酒精和蒸馏水冲洗,用乙二醇二环氧丙醚进一步交联,得到多孔纤维素柱;(4)将上述纤维素柱与高点酸钠溶液作用4.0小时,然后将50℃的0.5MPEHA与0.1M氢氧化钠混合液循环作用12小时,依次与三种溶液(戊二醛,0.2M,pH9.0,2.5h;IDA,0.1M,pH11,12h,70℃;CuSO4,0.5M,Ph5.0,2h)作用,得到Cu(II)-IDA-MCM型纤维素柱;(5)将上述纤维素柱依次与...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。