一步法检测甲萘威残留的ELISA试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一步法检测甲萘威残留的ELISA试剂盒及其应用，所述试剂盒包括盒体、设在盒体内的酶标板以及试剂；其中，酶标板的每个孔包被有甲萘威包被抗原，所述试剂包括抗甲萘威VHH‑AP基因工程抗体、甲萘威标准溶液、缓冲液PBS、洗涤液PBST、显色液和反应终止液等。检测过程中，酶标板孔壁上吸附的包被抗原和待测甲萘威相互竞争与抗体反应，通过显色反应观察结果。本发明专利技术的优点是能一步准确灵敏地检测出水、土壤和蔬菜中甲萘威的残留，样品前处理过程简单，耗时少，能同时检测大量样品，样品检测成本远低于现有检测方法，与传统ELISA试剂盒相比，样品检测所需时间大大缩短。

ELISA kit for one-step detection of residual carbaryl and its application

The invention discloses a ELISA Kit Method to detect the residual carbaryl and its application, the reagent box comprises a box body, a box body and a microtiter plate ELISA reagent; wherein each pore plate coated with carbaryl coated antigen, the reagent including VHH anti carbaryl AP gene engineering antibody, carbaryl standard solution, buffer PBS, washing liquid, PBST color liquid and reaction termination liquid etc.. In the process of detection, enzyme adsorption plate on the hole wall antigen and carbaryl competition and antibody response measured by chromogenic reaction results. The invention has the advantages of being able to step accurately and sensitively detect carbaryl residue from the water, soil and vegetables in the sample preparation process is simple, less time-consuming, and can simultaneously detect a large number of samples, sample testing cost is far lower than the existing detection methods, compared with the traditional ELISA kit, sample detection required time is greatly reduced.

【技术实现步骤摘要】
一步法检测甲萘威残留的ELISA试剂盒及其应用
本专利技术涉及基因工程、噬菌体展示技术以及ELISA检测
，具体地说，涉及一步法检测甲萘威残留的ELISA试剂盒及其应用。
技术介绍
甲萘威是一种氨基甲酸酯杀虫剂，这类农药残留的常规检测主要是应用仪器分析法，包括气相色谱法(GC)和高效液相色谱法(HPLC)等。这些分析方法所需的仪器价格昂贵，样品的分离、提取、净化、衍生等前处理复杂，分析速度慢、检测灵敏度低，难以满足现场快速检测需求。许多理化分析技术本身存在局限性，如甲萘威的热稳定性差，难于用气相色谱法分析，而液相色谱尚缺乏选择性好的高灵敏度检测器等。随着待检样品、特别是要求现场快速检测样品量的迅速增加，传统的农药残留分析手段难以适应要求。胆碱酯酶抑制法是利用有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶的抑制作用原理而建立的一种农药残留检测方法，具有通用性强、简便快速等优点，一定程度上满足了现场检测需求，但其灵敏度低，在0.1-10mg/L范围内，难以满足痕量检测需求。因此，亟待开发一种高效农药残留快速分析技术。基于常规抗体显色原理(HRP酶标二抗显色、2M硫酸终止反应)的甲萘威残留酶联免本文档来自技高网...

【技术保护点】
抗甲萘威VHH‑AP基因工程抗体，其特征在于，所述抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
1.抗甲萘威VHH-AP基因工程抗体，其特征在于，所述抗体的氨基酸序列如SEQIDNO:4所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。2.一步法检测甲萘威残留的ELISA试剂盒，包括盒体、设在盒体内可拆卸的酶标板以及设在盒体内的试剂，其特征在于，所述酶标板的每个孔包被有甲萘威包被抗原，所述试剂包括权利要求1所述的抗甲萘威VHH-AP基因工程抗体、甲萘威标准溶液、缓冲液PBS、洗涤液PBST、显色液和反应终止液。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述甲萘威包被抗原制备方法如下：(1)将30.2mgN-(1-萘氧羰基)-6-氨基己酸、13.9mgN-羟基琥珀酰亚胺和24.3mgN,N'-二环己基碳二亚胺，溶于1mL无水二甲基甲酰胺中，室温下搅拌过夜反应；将反应液离心，弃沉淀，收集上清液；(2)将牛血清蛋白20mg溶于0.05M，pH9.6的碳酸盐缓冲液2mL中，搅拌下逐滴加入所...

【专利技术属性】
技术研发人员：许艇，王楷，林优优，李季，布鲁斯·杜普里·哈莫克，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京,11