The invention relates to the field of biological technology, and specifically discloses a method for rapidly improving the tolerance of yeast. The invention uses a haploid Saccharomyces cerevisiae can by diploid formation characteristics of mating, and the Cre LoxP system to improve the specificity of the recombinant technology, not only eliminates the in vitro molecular construction operation, greatly improve the evolution speed and efficiency, also achieved a site-specific recombination level of whole genome, get a large number of yeast genomic library the rearrangement, significantly improve the high-throughput screening to the possibility of an evolutionary advantage to phenotype.
【技术实现步骤摘要】
一种快速提升酵母耐受性的方法
本专利技术涉及生物
，更具体的说是涉及一种快速提升酵母耐受性的方法。
技术介绍
菌种改造技术是利用遗传学、生物化学等原理，对目标菌种进行分子改造以及对应条件筛选，为生产提供优良菌种进而促进生产发展的一门技术。菌种改造技术目前主要包括基因突变(如诱变等)、基因重组(如杂交、原生质体融合、基因工程等)、基因直接进化(如易错PCR、DNA改组、外显子改组等)等方法。但目前的菌种改造方法存在很多缺点，基因突变方法具有一定的盲目性和随机性，操作靶点不明确；而基因重组、基因直接进化方法大多需要借助体外PCR技术以及PCR产物有效转化进入目标菌株才能实现，有时还需利用大肠杆菌作为质粒扩增载体，操作流程繁琐麻烦，需要大量的筛选工作。以提高酿酒酵母耐高温性能为例，当与酿酒酵母耐高温性状相关的基因未知时，由于原理未知且操作复杂，很难在基因组水平的所有基因全部改造一遍从而筛选到具有耐高温性状的酿酒酵母。因此，目前的菌种改造方法还存在菌株筛选文库小的缺点。酵母与人们的生活息息相关，在酿酒、烘焙、生物燃料、污染治理、营养品、生物医药等领域中都起着至关重要...
【技术保护点】
一种快速提升酵母耐受性的方法，其特征在于，包括：步骤1、构建在至少两个非必需基因的3’端或至少两个完整功能元件3’端插入SEQ ID NO:1所示核苷酸序列的待交配单倍体酵母；步骤2、将需要提高耐受性的单倍体酵母与步骤1所述待交配单倍体酵母进行交配，形成二倍体酵母菌株；步骤3、将带有筛选标签的能够表达Cre重组酶的质粒转化到所述二倍体酵母菌株，然后在所述筛选标签对应的培养基上培养，同时加入雌激素开启Cre重组酶的表达进行基因重排，培养完成后除去雌激素关闭Cre重组酶的表达，获得基因组重组的二倍体酵母菌株文库；步骤4、根据所要提高的耐受性设立筛选条件，将步骤2和步骤3所获得的...
【技术特征摘要】
1.一种快速提升酵母耐受性的方法，其特征在于，包括：步骤1、构建在至少两个非必需基因的3’端或至少两个完整功能元件3’端插入SEQIDNO:1所示核苷酸序列的待交配单倍体酵母；步骤2、将需要提高耐受性的单倍体酵母与步骤1所述待交配单倍体酵母进行交配，形成二倍体酵母菌株；步骤3、将带有筛选标签的能够表达Cre重组酶的质粒转化到所述二倍体酵母菌株，然后在所述筛选标签对应的培养基上培养，同时加入雌激素开启Cre重组酶的表达进行基因重排，培养完成后除去雌激素关闭Cre重组酶的表达，获得基因组重组的二倍体酵母菌株文库；步骤4、根据所要提高的耐受性设立筛选条件，将步骤2和步骤3所获得的二倍体酵母菌株均在该筛选条件下培养，以步骤2所述二倍体酵母菌株为对照，根据菌落大小，从步骤3所述基因组重组的二倍体酵母菌株文库中选择菌落较大的菌株再次在筛选条件下进行稀释点板，菌落最大的菌株即为耐受性最佳的酵...
【专利技术属性】
技术研发人员：元英进，吴毅，张皓然，李云祥，徐晖，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：天津,12
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