重叠扩增子的选择性扩增制造技术

本发明专利技术涉及一种可扩展的多重PCR方法，可以同时扩增重叠扩增子而没有常规多重PCR的缺点。该方法选择性地扩增具有重叠区域的靶核酸片段。该方法包括步骤：获得包括第一标签t2和第一正向引物F1的第一核酸序列，获得包括第二标签t1和第一反向引物R1的第二核酸序列，获得包括第二标签t1和第二正向引物F2的第三核酸序列，获得包括第三标签t3和第二反向引物R2的第四核酸序列，其中每一个引物都是基因特异性引物；执行PCR的初始循环；以及接下来在更高的退火温度下执行PCR随后的循环，以获得扩增产物。

Selective amplification of overlapping amplicons

The invention relates to an extensible multiple PCR method, which can amplify overlapping amplicons at the same time without conventional multiple PCR. This method selectively amplified target nucleic acid fragments with overlapping regions. The method comprises the steps of: obtaining a first nucleic acid sequence comprising a first tag T2 and the first positive primer F1, second nucleic acid sequences including second first label T1 and reverse primer R1, third nucleic acid sequences including second tag T1 and second forward primers F2, fourth nucleic acid sequences including third tag T3 and second reverse primer R2 among them, each primer are gene specific primers; initial loop PCR; and the next cycle in the higher annealing temperatures under the implementation of PCR then, in order to obtain amplification products.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】重叠扩增子的选择性扩增
本专利技术涉及选择性扩增具有重叠区域的靶核酸片段的方法。本方法富集靶扩增子的拷贝，超过扩增子重叠区域的拷贝。参考序列表、表格或计算机程序序列表在此随说明书同时提交，该序列表以ASCII格式的文本文件通过EFS-Web提交，文件名为“序列表.txt”(“SequenceListing.txt”)，创建日期是2016年2月23日，文件大小为5.11千字节。该通过EFS-Web提交的序列表是说明书的一部分，在此其全部内容通过引用结合在说明书中。
技术介绍
多重PCR由单一PCR混合物中的多个引物集组成，从而生成对不同DNA序列特异的扩增子。通过一次性靶向多个基因，可由单个测试轮次获得额外信息，否则需要若干倍的试剂和更多的时间才能完成。必须优化每个引物集的退化温度以在单个反应中正确地工作。已有用于多重PCR通用试剂的市售试剂盒。多重PCR技术已经被用于下一代测序(NGS)中的靶标富集，下一代测序是指高通量平行DNA测序技术。数百万乃至数十亿的DNA链可以同时测序，产生非常高的通量。扩增子漏码的一个主要原因是扩增中两个重叠扩增子之间短重叠区域的优先扩增。目前，为了扩增两本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种选择性扩增具有重叠区域的靶核酸片段的方法，包括步骤：(a)获得第一核酸序列，所述第一核酸序列包括第一标签(t2)和第一正向引物(F1)，所述第一正向引物与第一靶核酸片段互补，(b)获得第二核酸序列，所述第二核酸序列包括第二标签(t1)和第一反向引物(R1)，所述第一反向引物与所述第一靶核酸片段互补，(c)获得第三核酸序列，所述第三核酸序列包括所述第二标签(t1)和第二正向引物(F2)，所述第二正向引物与第二靶核酸片段互补，(d)获得第四核酸序列，所述第四核酸序列包括第三标签(t3)和第二反向引物(R2)，所述第二反向引物与所述第二靶核酸片段互补，其中所述第一靶核酸片段和所述第二靶核酸片段具...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.03.06 US 62/129,3601.一种选择性扩增具有重叠区域的靶核酸片段的方法，包括步骤：(a)获得第一核酸序列，所述第一核酸序列包括第一标签(t2)和第一正向引物(F1)，所述第一正向引物与第一靶核酸片段互补，(b)获得第二核酸序列，所述第二核酸序列包括第二标签(t1)和第一反向引物(R1)，所述第一反向引物与所述第一靶核酸片段互补，(c)获得第三核酸序列，所述第三核酸序列包括所述第二标签(t1)和第二正向引物(F2)，所述第二正向引物与第二靶核酸片段互补，(d)获得第四核酸序列，所述第四核酸序列包括第三标签(t3)和第二反向引物(R2)，所述第二反向引物与所述第二靶核酸片段互补，其中所述第一靶核酸片段和所述第二靶核酸片段具有重叠区域，(e)混合所述第一靶核酸片段、所述第二靶核酸片段、所述第一核酸序列、所述第二核酸序列、所述第三核酸序列、所述第四核酸序列以及有效量的用于执行聚合酶链式反应(PCR)所必需的试剂；(f)通过PCR的变性、退火和引物延伸步骤对(e)的混合物循环至少两次，以及(g)在高于步骤(f)中退火温度的退火温度下，通过PCR的变性、退火和引物延伸步骤对(f)的混合物循环以获得扩增产物。2.根据权利要求1所述的方法，其中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：王朝晖，宋钢，
申请(专利权)人：真固生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US