作为代谢病症的治疗剂的皮连蛋白制造技术

本公开描述了一种治疗受试者的代谢病的方法，其中所述方法包括向受试者施用皮连蛋白，其中所述皮连蛋白是重组皮连蛋白，并且所述代谢病选自由以下组成的组：体重增加、饮食诱导的体重增加、肥胖症、病态肥胖症、代谢综合征、葡萄糖稳态、胰岛素抵抗、I型糖尿病、II型糖尿病和心血管疾病。本文还公开了确定受试者对代谢病和肥胖症的易感性或对代谢病和肥胖症进行预后的方法，所述方法包括测量从受试者获得的样品中的循环皮连蛋白的水平；和比较获得的所述循环皮连蛋白的水平与之前在对照中测定的皮连蛋白的水平；和基于所述循环皮连蛋白水平和对照中所述皮连蛋白的水平之间的差异确定所述受试者对代谢病和肥胖症的易感性。

For the treatment of metabolic disorders of the skin attached protein agent

The disclosure describes a method for treating metabolic disease subjects, wherein the method comprises administering to the subject skin attached protein, wherein the recombinant protein is the skin attached skin attached protein, and the metabolic disease selected from the group consisting of the following: weight gain, diet induced weight gain, obesity and morbid obesity and the metabolic syndrome, glucose homeostasis, insulin resistance, type I diabetes, type II diabetes and cardiovascular disease. This paper also discloses a method for determining the subjects of susceptibility to metabolic diseases and obesity or metabolic disease and prognosis of obesity, including measurements obtained from a sample of subjects in the circulation of skin attached the method protein level; and the circulating water to the skin attached protein and determination in the control before the skin attached protein level; and based on the cyclic difference between protein level and control skin attached in the skin attached protein levels determined by the subjects of metabolic disease and obesity susceptibility.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】作为代谢病症的治疗剂的皮连蛋白对相关申请的交叉引用本申请要求2015年02月11日提交的新加坡临时申请第10201501053Q号的优先权权益，它的内容通过引用以其整体并入本文，用于所有目的。
本专利技术一般涉及生物
具体而言，本专利技术涉及蛋白质生物
专利技术背景代谢病，诸如心血管疾病、糖尿病和肥胖症是全球性流行病，仅糖尿病就影响大约3.82亿人。目前，能有效对抗糖尿病的药是有限的。一种方法是劫持血液中循环因子的生物学作用，以改善全身代谢。诸如，分别从肝脏、肌肉和脂肪组织分泌的FGF-21，鸢尾素和脂连蛋白的因子之前已经被证明通过调节能量稳态的各个方面来改善全身新陈代谢。因此，需要鉴定用于治疗代谢相关疾病的新治疗靶点。
技术实现思路
在一个方面，本专利技术涉及一种治疗受试者的代谢病的方法，其中所述方法包括向受试者施用重组皮连蛋白。在另一方面，本专利技术涉及确定受试者对代谢病和肥胖症的易感性或对代谢病和肥胖症进行预后的方法，所述方法包括测量从受试者获得的样品中的循环皮连蛋白的水平；和比较获得的所述循环皮连蛋白的水平与之前在对照中测定的皮连蛋白的水平；和基于所述循环皮连蛋白水平和对照中所述皮连蛋白的水平之间的差异确定所述受试者对代谢病和肥胖症的易感性。在另一方面，本专利技术涉及治疗代谢病的方法，包括本文所定义的皮连蛋白。附图说明当结合非限制性实例和附图参考详细描述时，本专利技术将被更好地理解，在所述附图中：图1显示的简图概述重组皮连蛋白(rDPT)在肥胖小鼠模型中的作用。该概述图显示与被施以对照(盐水)的肥胖模型小鼠相比，施用重组皮连蛋白至肥胖模型小鼠导致较少的体脂肪、较少的体重增加、较好的葡萄糖清除率、更高的胰岛素敏感度、增加的能量消耗和改善的代谢。图2显示在小鼠模型中施用重组皮连蛋白(rDPT)的结果。综合起来，该数据显示与已经接收媒介物(盐水)的小鼠相比，注入重组皮连蛋白增加全身能量消耗并改善全身代谢。A)显示在被工程化以表达人DPT基因的酵母系统中产生的重组皮连蛋白的考马斯蓝染色(左栏)和蛋白质印迹(右栏)。B)是线图，显示已经经媒介物(阴性对照)或重组皮连蛋白(rDPT)处理的小鼠的体重变化，从而显示rDPT处理的小鼠随着时间的推移显示降低的体重增加。C)是柱状图，显示总瘦体重和总脂肪量(以百分比计)在注射媒介物或重组皮连蛋白(rDPT)的小鼠中的分布。这显示相比媒介物处理的小鼠，经rDPT处理的小鼠显示具有较高百分比的瘦体重。D)是线图，显示在处理后第4周对注射媒介物或重组皮连蛋白(rDPT)的小鼠进行的葡萄糖耐受性试验(GTT)的结果，显示相比媒介物处理的小鼠，rDPT处理的小鼠在摄取葡萄糖后具有整体较低的血糖水平。E)显示柱状图，其表示之前在D)中示出的葡萄糖耐受性试验(GTT)数据的曲线下面积(AUC)，其中针对rDPT处理的小鼠测定的AUC小于针对媒介物处理的小鼠测定的AUC。F)是线图，显示在处理后第9周对经媒介物处理的小鼠组和经重组皮连蛋白(rDPT)处理的小鼠组进行的胰岛素耐受性试验(ITT)的结果。该数据显示经rDPT处理的小鼠比经媒介物处理的小鼠具有更低的血糖水平。G)显示柱状图，其表示之前在F)中示出的胰岛素耐受性试验的曲线上面积(AAC)。曲线上面积(AAC)是一种类似于“曲线下面积”(通过积分法定义)的数学概念，其通常用于确定观测变量在一段时间内的总浓度。为了获得本专利技术实施例的曲线上面积(AAC)，首先计算曲线下面积(AUC)值。然后，为了计算AUC，在时间点15分钟、30分钟、45分钟、60分钟和90分钟计算梯形面积的总和。为了计算AAC，则从图的总面积(例如，x-轴上的0至12乘y-轴的0至90)减去AUC值。在该实例中，AAC用于确定胰岛素注射后血流中葡萄糖的浓度。H)显示线图(包括针对每个数据点计算的单个标准差)，其描绘在处理后第11周经媒介物(盐水)或重组皮连蛋白(rDPT)处理的小鼠组的能量消耗。该图显示相比盐水处理的小鼠，rDPT处理的小鼠在光照小时和黑暗小时期间均显示增加的能量消耗。I)是柱状图，其显示之前在H)中显示的能量消耗的量化的平均能量消耗，进一步证明rDPT处理的小鼠的平均能量消耗整体比媒介物处理的小鼠的平均能量消耗高。以下标准适用于图2的所有图：注射媒介物的组n＝4和注射rDPT的组n＝5。*p＜0.05、**p＜0.01、***p＜0.005。图3显示的数据证明皮连蛋白在皮下脂肪中高度表达，并且通过脂肪细胞分泌。使用角蛋白10(一种成熟的皮肤标志物)作为阳性对照，皮连蛋白的相对mRNA水平分别显示在A)和B)的柱状图中。A)显示最高的皮连蛋白表达存在于皮下组织中，而B)显示角蛋白10(皮肤标志物，阳性对照)的表达仅限于皮肤。C)和D)显示使用针对皮连蛋白(DPT)、葡萄糖转运体4型(GLUT4)和蛋白质14-3-3的抗体，从野生型小鼠和皮连蛋白敲除(DPTKO)小鼠的各种组织中分离的细胞裂解物的蛋白质印迹图像。该数据证明，皮连蛋白的表达局限于如在A)中定量测定的相同样品中，也证实在皮连蛋白敲除小鼠中皮连蛋白表达被有效阻止。E)显示来自三种不同脂肪库的原代脂肪细胞的裂解物的蛋白质印迹，使用针对皮连蛋白(DPT)、棕色脂肪组织标志物解偶联蛋白质1(UCP1)、脂肪组织标志物葡萄糖转运体4型(GLUT4)和遍在蛋白质14-3-3的抗体对所述裂解物进行免疫印迹，其中UCP1作为证实分离的脂肪库包含棕色脂肪组织的鉴定对照(identitycontrol)被提供。GLUT4在所有脂肪组织中高度表达，因此充当分离的组织是脂肪组织的阳性对照。遍在蛋白质14-3-3用作一般蛋白质标志物。F)显示3T3-L1成纤维细胞向脂肪细胞分化的时间过程的蛋白质印迹的图像。在指定的时间点收获细胞裂解物，并且用针对皮连蛋白(DPT)、葡萄糖转运体4型(GLUT4)和蛋白质14-3-3的抗体进行免疫印迹。此处显示的数据证明脂肪细胞中存在的DPT的水平随着时间的推移，随着细胞的分化而增加。G)显示分离自野生型或皮连蛋白敲除(DPTKO小鼠)的血清样品的蛋白质印迹，所述血清样品用针对皮连蛋白(DPT)的抗体进行免疫印迹。此处显示的非特异条带充当加载参照。H)显示的图像显示了表达皮连蛋白(DPT)-myc的3T3-L1脂肪细胞的蛋白质印迹分析的结果，所述3T3-L1脂肪细胞在不含血清的培养基中孵育。在指定的时间点收获培养基和细胞裂解物，并且针对myc和脂肪酸结合蛋白质4(FABP4，脂肪细胞中的一种脂类转运蛋白质)进行免疫印迹。此处的数据证明皮连蛋白虽然也存在于细胞中，但大部分被分泌到培养基中，而FABP4主要存在于细胞裂解物中，证明FABP4不从细胞中分泌出来。I)显示表达DPT-myc的3T3-L1脂肪细胞的蛋白质印迹，所述3T3-L1脂肪细胞经指定的化合物处理6小时。布雷菲德菌素A(BFA)是抑制内质网和高尔基体功能的化合物。胰岛素(Ins)是引起许多信号传导事件并且已经被证明在脂肪细胞中诱导许多分泌事件的激素。收获细胞裂解物和培养基，并使用针对myc、脂连蛋白、脂肪酸结合蛋白质4(FABP4，脂肪细胞中的一种脂类转运蛋白质)和蛋白质激酶b(AKT)的抗体进行免疫印迹。脂本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种治疗受试者的代谢病的方法，其中所述方法包括向受试者施用重组皮连蛋白。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.02.11 SG 10201501053Q1.一种治疗受试者的代谢病的方法，其中所述方法包括向受试者施用重组皮连蛋白。2.如权利要求1所述的方法，其中所述重组皮连蛋白来源于人类、牛科动物、猪或鼠科动物。3.如前述权利要求任一项所述的方法，其中所述重组皮连蛋白包含选自由以下组成的组的序列：SEQIDNO：1、SEQIDNO：2、SEQIDNO：3或SEQIDNO：4。4.如前述权利要求任一项所述的方法，其中所述重组皮连蛋白包含SEQIDNO：1。5.如前述权利要求任一项所述的方法，其中所述重组皮连蛋白是SEQIDNO：1、SEQIDNO：2、SEQIDNO：3或SEQIDNO：4任一种的、具有至少60％序列同一性的同源物。6.如前述权利要求任一项所述的方法，其中所述重组皮连蛋白经过翻译后修饰。7.如前述权利要求任一项所述的方法，其中所述重组皮连蛋白在其C-末端或N-末端被修饰。8.如权利要求7所述的方法，其中所述重组皮连蛋白包含检测标签和/或表征标签。9.如前述权利要求任一项所述的方法，其中所述重组皮连蛋白其N-末端处包含分泌信号肽。10.如权利要求9所述的方法，其中所述分泌信号肽包含选自由以下组成的组的序列：SEQIDNO：6、SEQIDNO：7或SEQIDNO：8。11.如前述权利要求任一项所述的方法，其中所述重组皮连蛋白的核酸序列由SEQIDNO：5组成。12.如前述权利要求任一项所述的方法，其中所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：洪万进，陈世雄，韩卫平，
申请(专利权)人：新加坡科技研究局，
类型：发明
国别省市：新加坡,SG