抗LILRB抗体及其在检测和治疗癌症中的用途制造技术

本公开涉及结合LILRB的抗体以及用其检测和治疗癌症的方法。

Anti LILRB antibody and its use in the detection and treatment of cancer

The present disclosure involves the antibody to LILRB and the method of detecting and treating cancer with it.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗LILRB抗体及其在检测和治疗癌症中的用途本申请要求2015年3月6日提交的美国临时申请序列号62/129,572的优先权的权益，所述临时申请的全部内容以引用的方式并入本文。背景公开领域本公开一般涉及医学、肿瘤学和免疫学的领域。更具体地，本公开涉及LILRB的抗体以及可以治疗癌症(包括白血病)的抗体。背景急性髓性白血病(AML)是成人最常见的急性白血病。即使连续治疗，大多数患者仍会在5年内复发。为了有效治疗急性白血病，必须确定新的分子靶标和治疗方法。近来，专利技术人克隆了人白细胞免疫球蛋白样受体B2(LILRB2)作为几种血管生成素样蛋白(Angptl)的受体(Zheng等人，2012)。LILRB家族受体是含有结合配体的胞外Ig样结构域和细胞内基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)的I型跨膜糖蛋白，并且被分类为抑制性受体，因为ITIM基序可以募集磷酸酶SHP-1、SHP-2或SHIP来负调节免疫细胞活化(Takai等人，2011；Daeron等人，2008；Katz等人，2006)。已知LILRB在骨髓细胞和某些其他造血细胞上表达(Mori等人，2008)。令人惊奇的是，专利技术人已经表明，LILRB2的小鼠直向同源物PirB以及密切相关的ITIM受体LAIR1由AML干细胞(AML-SC)表达并支持AML发育(Zheng等人，2012；Kang等人，出版中)。虽然违反直觉，但是这一结果与抑制性受体在免疫系统中一般的免疫抑制和因此的肿瘤促进作用一致(Ma等人，2011)。在最近的研究中，专利技术人发现LILRB家族的几个成员在AML细胞上高度表达，并且其表达与人AML患者的总体存活呈负相关。LILRB由AML-SC和一些分化的急性白血病细胞(包括AML和急性淋巴母细胞性白血病或ALL)表达。不表达测试的任何单独LILRB的小鼠中的正常造血发育不存在缺陷。然而，有趣的是，各个LILRB的敲除在多种AML和急性淋巴母细胞性白血病(ALL)小鼠模型中逆转白血病发展并且摧毁AML-SC(Zheng等人，2012；Kang等人，出版中；还参见PCT/US13/43431)。另外，在培养的不同的人白血病细胞系中单独抑制几种LILRB的表达并且阻断异种移植小鼠中的白血病发展(Kang等人，出版中；还参见PCT/US13/43431)。专利技术人已经确定一些白血病干细胞表达高水平的ITIM抑制性受体，包括LILRB。当前用于急性白血病患者的治疗选择(包括化疗)不能有效靶向癌干细胞，因为这些抑制性受体使得白血病干细胞能够在常规疗法下存活，最终导致肿瘤复发。专利技术人推理LILRB信号转导代表治疗AML的理想靶标，出于以下几个原因：1)几种LILRB对于AML细胞(包括AML-SC)的存活至关重要；2)单个LILRB的敲除不会导致正常血细胞生成的明显缺陷；和3)抑制LILRB活性刺激免疫并间接增加抗肿瘤作用。概述因此，根据本公开，提供了一种检测样品或受试者中癌细胞或癌干细胞的方法，所述方法包括(a)使受试者或来自所述受试者的样品与具有图22的克隆配对的重链和轻链CDR序列的抗体或抗体片段接触；和(b)检测所述受试者或样品中所述抗体与癌细胞或癌干细胞的结合。样品可以是活检或体液，诸如血液、痰液、眼泪、唾液、粘液或血清、尿液或粪便。检测可包括免疫组织化学、ELISA、RIA或蛋白质印迹。所述方法还可包括第二次执行步骤(a)和(b)并且确定与第一次测定相比细胞水平的变化。抗体特征可在于图21中列出的克隆配对的可变序列。抗体或抗体片段可以由与图21的克隆配对序列具有70％、80％或90％同一性的轻链和重链可变核酸序列编码。抗体或抗体片段可以由与图21的克隆配对序列具有95％同一性的轻链和重链可变氨基酸序列编码。抗体片段可以是重组ScFv(单链片段可变)抗体、Fab片段、F(ab’)2片段或Fv片段。抗体可结合或不结合埃博拉病毒。在另一个实施方案中，提供了治疗患有癌症的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用具有图22的克隆配对的重链和轻链CDR序列的抗体或抗体片段。抗体特征可在于图21中列出的克隆配对的重链和轻链可变核酸序列。抗体特征可在于图21中列出的克隆配对的重链和轻链可变氨基酸序列。抗体或抗体片段可以由与图21的克隆配对序列具有70％、80％或90％同一性的轻链和重链可变核酸序列编码。抗体或抗体片段可以由与图21的克隆配对序列具有95％同一性的轻链和重链可变氨基酸序列编码。抗体片段可以是重组ScFv(单链片段可变)抗体、Fab片段、F(ab’)2片段或Fv片段。抗体可以是IgG和/或嵌合抗体。癌症可以是急性髓性白血病。施用可以是静脉内、动脉内或肿瘤内的。在又一实施方案中，提供单克隆抗体或抗体片段，其中所述抗体特征在于图22的克隆配对的重链和轻链CDR序列。单克隆抗体或抗体片段可以由根据图21的克隆配对序列的轻链和重链可变核酸序列编码。抗体或抗体片段可以由与图21的克隆配对序列具有70％、80％或90％同一性的轻链和重链可变核酸序列编码。抗体或抗体片段可以由根据图21的克隆配对序列的轻链和重链可变氨基酸序列编码。抗体或抗体片段可以由与图21的克隆配对序列具有95％同一性的轻链和重链可变氨基酸序列编码。抗体片段可以是重组ScFv(单链片段可变)抗体、Fab片段、F(ab’)2片段或Fv片段。抗体可以是嵌合抗体，或者是双特异性抗体，和/或IgG。抗体可以是人源化的和/或优化的。另一个实施方案涉及杂交瘤，其编码其中特征在于图22的克隆配对重链和轻链CDR序列的抗体。单克隆抗体可以由根据图21的克隆配对序列的轻链和重链可变核酸序列编码。抗体可以由与图21的克隆配对序列具有70％、80％或90％同一性的轻链和重链可变核酸序列编码。抗体可以由根据图21的克隆配对序列的轻链和重链可变氨基酸序列编码。抗体可以由与图21的克隆配对序列具有95％同一性的轻链和重链可变氨基酸序列编码。当在权利要求和/或说明书中连同术语“包含”一起使用时，使用措辞“一个(a)”或“一种(an)”可意味“一个”，但它也符合“一个或多个”、“至少一个”及“一个或一个以上”的含义。措辞“约”意指所述数字加或减5％。预期本文描述的任何方法或组合物可相对于本文描述的任何其他方法和组合物来实现。通过以下详细描述，本公开的其他目的、特征和优势将变得显而易见。然而，应理解的是，尽管指示本专利技术的具体实施方案，但是详细描述和具体实施例仅通过说明的方式给出，因为从此详细描述中，本专利技术的精神和范围内的各种改变和修改对于本领域技术人员来说将变得显而易见。附图简述以下附图形成本说明书的一部分并且被包括来进一步说明本公开的某些方面。本公开可通过参考这些附图中的一个或多个结合本文提出的具体实施方案的详细描述来更好地理解。以下附图组成本说明书的一部分，并且被包括以进一步证明本专利技术的某些方面。本专利技术可通过参考这些附图中的一个或多个结合本文提出的具体实施方案的详细描述来更好地理解。图1A-D–LILRB在原代人AML细胞中的表达。(图1Al)LILRB4在约50％测试的人AML病例中表达。(图1B)LILRB4对于人单核AML细胞(M5b，外周血)是比CD14更好的标记物，并且LILRB(包括LI本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测样品或受试者中癌细胞或癌干细胞的方法，所述方法包括：(a)使受试者或来自所述受试者的样品与具有图22的克隆配对的重链和轻链CDR序列的抗体或抗体片段接触；和(b)检测所述抗体与所述受试者或样品中的癌细胞或癌干细胞的结合。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.03.06 US 62/129,5721.一种检测样品或受试者中癌细胞或癌干细胞的方法，所述方法包括：(a)使受试者或来自所述受试者的样品与具有图22的克隆配对的重链和轻链CDR序列的抗体或抗体片段接触；和(b)检测所述抗体与所述受试者或样品中的癌细胞或癌干细胞的结合。2.如权利要求1所述的方法，其中所述样品是体液或活检。3.如权利要求1所述的方法，其中所述样品是血液、痰液、眼泪、唾液、粘液或血清、尿液或粪便。4.如权利要求1所述的方法，其中检测包括免疫组织化学、ELISA、RIA或蛋白质印迹。5.如权利要求1所述的方法，其还包括第二次执行步骤(a)和(b)并且确定与所述第一次测定相比细胞水平的变化。6.如权利要求1所述的方法，其中所述抗体特征在于图21中列出的克隆配对的可变序列。7.如权利要求1所述的方法，其中所述抗体或抗体片段由与图21的克隆配对序列具有70％、80％或90％同一性的轻链和重链可变核酸序列编码。8.如权利要求1所述的方法，其中所述抗体或抗体片段由与图21的克隆配对序列具有95％同一性的轻链和重链可变氨基酸序列编码。9.如权利要求1所述的方法，其中所述抗体片段是重组ScFv(单链片段可变)抗体、Fab片段、F(ab’)2片段或Fv片段。10.如权利要求1所述的方法，其中所述抗体不与埃博拉病毒结合。11.一种治疗患有癌症的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用具有图22的克隆配对的重链和轻链CDR序列的抗体或抗体片段。12.如权利要求11所述的方法，所述抗体特征在于图21中列出的克隆配对的重链和轻链可变核酸序列。13.如权利要求11所述的方法，所述抗体特征在于图21中列出的克隆配对的重链和轻链可变氨基酸序列。14.如权利要求12所述的方法，其中所述抗体或抗体片段由与图21的克隆配对序列具有70％、80％或90％同一性的轻链和重链可变核酸序列编码。15.如权利要求13所述的方法，其中所述抗体或抗体片段由与图21的克隆配对序列具有95％同一性的轻链和重链可变氨基酸序列编码。16.如权利要求11所述的方法，其中所述抗体片段是重组ScFv(单链片段可变)抗体、Fab片段、F(ab...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·张，M·邓，Z·安，W·熊，N·张，J·郑，X·桂，
申请(专利权)人：德克萨斯大学体系董事会，
类型：发明
国别省市：美国,US