miR-21在制备治疗宫腔粘连和/或薄型内膜的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了miR‑21在制备治疗宫腔粘连和/或薄型内膜的药物中的应用。本发明专利技术发现宫腔粘连患者，子宫内膜上皮细胞及间质细胞miR‑21表达显著降低，尤其以上皮细胞减少最为显著。而且体外结果显示，miR‑21逆转子宫内膜上皮细胞的EMT，抑制纤维化。因此，miR‑21在宫腔粘连和/或薄型内膜诊断及治疗方面可能发挥重要作用，可以用于制备治疗宫腔粘连和/或薄型内膜诊断及治疗或者制备治疗其他与子宫纤维化相关的疾病的药物。

Application of miR 21 in the preparation of drug treatment of intrauterine adhesions and / or thin endometrium in

The present invention discloses the application of the drug miR 21 in preparation for the treatment of intrauterine adhesions and / or thin endometrium in. The present invention found intrauterine adhesions, uterine epithelial cells and interstitial cells of miR 21 was significantly decreased, especially above the skin cells decreased most significantly. And in vitro results showed that miR reversed 21 endometrial epithelial cells EMT, inhibition of fibrosis. Therefore, miR 21 in intrauterine adhesions and / or thin endometrium may play an important role in diagnosis and treatment, can be used for the preparation of the treatment of intrauterine adhesions and / or thin endometrium of diagnosis and treatment or preparation treatment associated with uterine fibrosis diseases.

【技术实现步骤摘要】
miR-21在制备治疗宫腔粘连和/或薄型内膜的药物中的应用
本专利技术属于生物制药领域，涉及miR-21在制备治疗宫腔粘连和/或薄型内膜的药物中的应用。
技术介绍
子宫内膜再生性障碍疾病主要包括宫腔粘连和薄型内膜。宫腔粘连是由于子宫内膜基底层损伤，功能层再生修复障碍，形成以内膜纤维化为特征的子宫壁间粘连，是子宫性不孕症最常见的原因，在不孕症患者中占比高达25-30％。在我国，随着宫腔手术特别是无痛人流数量的上升，宫腔粘连及子宫内膜纤维化的发生率明显增高。目前主要治疗方式是手术分离粘连，并放置宫内节育器、球囊或生物材料阻隔子宫前后壁，预防再粘连。但是，这些治疗方式对重度宫腔粘连的疗效不佳，再粘连的发生率仍高达62.5％，且即使不再粘连，内膜纤维化仍然是胚胎着床的严重障碍。而薄型内膜是指病人在使用大剂量雌激素刺激后内膜厚度仍无明显提高，这种内膜被称为薄型内膜。目前对于薄型内膜厚度的定义尚未达成广泛共识(一般认为<7mm)。由于发病机制不清，严重阻碍了宫腔粘连和薄型内膜的有效治疗。专利技术人在研究工作中发现，有很大比例的薄型内膜患者也是由于宫腔手术所致，并且存在一定程度的子宫内膜纤维化。因此，亟待寻找有效的预测及治疗宫腔粘连和薄型内膜的方法。miRNA是一类内源性非编码小分子单链RNA，其长约为18—25个核苷酸，具有高度的物种保守性。miRNA可通过碱基匹配的作用机制，对靶mRNA进行降解或抑制翻译来调节靶基因的表达。miR-21是一种位于17q23.2染色体FRAl7B脆性区域上，且具有自主转录单位的miRNA。在多种肿瘤细胞中miR-21的表达均出现显著异常，参与调控多种抑癌基因的表达以及上皮间质转化(EMT)，提示miR-21作为一个致癌miRNA，在多种肿瘤的发生和迁移中发挥着重要的作用。此外，在肝、肾及肺部纤维化中，miR-21显著高表达，提示其促进纤维化。但是，miR-21与宫腔粘连综合征是否存在相关性，miR-21是否影响子宫内膜纤维化等研究未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供miR-21在制备治疗宫腔粘连和/或薄型内膜的药物中的应用。本专利技术的另一目的是提供miR-21在制备宫腔粘连和/或薄型内膜诊断试剂中的应用。本专利技术的目的通过以下技术方案实现：miR-21在制备治疗宫腔粘连和/或薄型内膜的药物中的应用。miR-21在制备治疗宫腔粘连和/或薄型内膜引起的疾病的药物中的应用。所述的宫腔粘连和/或薄型内膜引起的疾病优选由宫腔粘连和/或薄型内膜导致的子宫性不孕、反复流产及胎盘粘连、植入。miR-21在制备宫腔粘连和/或薄型内膜诊断试剂中的应用。检测miR-21的试剂在制备宫腔粘连和/或薄型内膜诊断试剂中的应用。所述的检测miR-21的试剂优选包括：PCR及qPCR引物、Taqman探针、地高辛或荧光染料标记探针、miRNA表达谱芯片、深度测序。所述的地高辛或荧光染料标记探针序列进一步优选为：5’ucaacaucagucugauaagcua3’(SEQIDNO.1)。miR-21在治疗宫腔粘连和/或薄型内膜中的应用。miR-21在治疗因宫腔粘连和/或薄型内膜引起的疾病中的应用；所述的子宫内膜再生性障碍引起的疾病优选由宫腔粘连和/或薄型内膜导致的子宫性不孕、反复流产及胎盘粘连、植入。检测miR-21的试剂在宫腔粘连和/或薄型内膜诊断中的应用。所述的检测miR-21的试剂优选包括：PCR及qPCR引物、Taqman探针、地高辛或荧光染料标记探针、miRNA表达谱芯片、深度测序。本专利技术中所述的miR-21的序列为：5’uagcuuaucagacugauguuga3’(SEQIDNO.2)。本专利技术中所述的宫腔粘连指由于子宫内膜基底层损伤，功能层再生修复障碍，形成以内膜纤维化为特征的子宫壁间粘连。本专利技术中所述的薄型内膜是指子宫内膜厚度不能在雌激素刺激下明显提高，一般指内膜厚度<7mm。有益效果：我们发现宫腔粘连患者，子宫内膜上皮细胞及间质细胞miR-21表达显著降低，尤其以上皮细胞减少最为显著。而且体外结果显示，miR-21逆转子宫内膜上皮细胞的EMT，抑制纤维化。因此，miR-21在宫腔粘连治疗、诊断方面可能发挥重要作用，可以用于制备治疗宫腔粘连诊断、治疗或者制备治疗其他与子宫纤维化相关的疾病的药物。专利技术人在研究工作中发现，有很大比例的薄型内膜患者也是由于宫腔手术所致，并且存在一定程度的子宫内膜纤维化。miR-21能够逆转子宫内膜上皮细胞的EMT，抑制纤维化，因此有望用于治疗薄型内膜，尤其是由于宫腔手术所致的薄型内膜。附图说明图1、原位杂交分析子宫内膜组织中miR-21的表达情况。A：miRNA阴性对照；B：miRNA阳性表达对照(miR-16)；C，正常人子宫内膜miR-21表达；D，宫前粘连患者子宫内膜miR-21表达。图2、miR-21对细胞纤维化相关基因表达的影响。A-D依次为E-cadherin、纤维化相关基因FN1、α-SMA及CollagenI的表达情况。图3、miR-21对Np63引起的子宫内膜上皮细胞纤维化的影响。A图为E-cadherin免疫荧光结果；B图为N-cadherin免疫荧光结果。具体实施方式实施例1miR-21在正常及重度宫腔粘连患者子宫内膜组织中的表达1、材料，试剂，设备1.1人子宫内膜组织来源收集5例正常子宫内膜组织以及5例宫腔粘连综合征重度患者子宫内膜组织，获取子宫内膜组织时，通过超声检测卵泡大小，确保内膜组织获取阶段全部统一为增殖晚期阶段。所有参与者均签署了纸质版的知情同意书，并经过南京鼓楼医院伦理委员会批准。1.2主要试剂MicroRNA原位检测探针HASProbeTM(彭济凯丰生物科技有限公司)、杂交试剂盒彭济凯丰生物科技有限公司)、抗地高辛抗体(Anti-Digoxigenin-AP，Roche)、NBT/BCIP显色(彭济凯丰生物科技有限公司)、二甲苯、乙醇、DEPC水、PBS、PFA、蛋白酶K、乙酸酐、甲酰胺、TEA、SSC、MAB、吐温。1.3主要仪器杂交仪(Thermobrite)、摇床、荧光显微镜(Leica)。1.4主要方法采用石蜡切片原位杂交方法检测miR-21的表达。二甲苯处理两次，每次15min，梯度酒精(100％乙醇5min，100％乙醇5min，95％乙醇3min，85％乙醇3min，70％乙醇3min，30％乙醇3min)处理后DEPC水洗3min，然后1×PBS洗3min。随后用4％PFA冰上处理10min，1×PBS洗两次，每次5min。蛋白酶K室温下浸泡切片15min后，1×PBS洗2min。1×TEA摇床漂洗10min，2×SSC处理5min。晾干后，预杂交孵育1h，随后杂交过夜。1×SSC(含50％甲酰胺+0.1％吐温20)浸泡15min，0.2×SSC(含50％甲酰胺+0.1％吐温20)浸泡两次，每次10min。1×MAB(含0.1％吐温20)室温处理两次，每次10min。Blockingbuffer37℃封闭30min后加入抗体(Anti-DIG-antibody)并4℃过夜。洗脱后，NBT/BCIP显色，封片后显微镜观察并拍照。2、结果重度宫腔粘连患者子宫内膜组织中，上皮细胞及间质细本文档来自技高网...

【技术保护点】
miR‑21在制备治疗宫腔粘连和/或薄型内膜的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.miR-21在制备治疗宫腔粘连和/或薄型内膜的药物中的应用。2.miR-21在制备治疗宫腔粘连和/或薄型内膜引起的疾病的药物中的应用。3.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述的宫腔粘连和/或薄型内膜引起的疾病指由宫腔粘连和/或薄型内膜导致的子宫性不孕、反复流产及胎盘粘连、植入。4.miR-21在制备宫腔粘连和/或薄型内膜诊断试剂中的应用。5.检测miR-21的试剂在制备宫腔粘连和/或薄型内膜诊断试剂中的应用。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于所述的检测miR-21的试剂包括：PCR及qPCR引物、Taqman探针、地...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡娅莉，周艳，赵光锋，李若天，
申请(专利权)人：南京鼓楼医院，
类型：发明
国别省市：江苏,32