王老吉凉茶指标性成分的分离纯化方法技术

本发明专利技术涉及一种王老吉凉茶指标性成分的分离纯化方法，属于凉茶植物饮料质量控制技术领域。该分离纯化方法以AB‑8型大孔树脂进行粗分，以HP20型大孔树脂进行细分，在液相色谱进行检测监控的条件下，以Sephadex LH‑20凝胶与反相硅胶柱为固定相，对各组份进行色谱分离纯化，最终得到能够作为王老吉凉茶指标性成分的单体化合物，可用做对照品，辅助检测其中各成分，为王老吉凉茶的质量检测提供先决条件和保障。

Separation and purification of the index components of Wang Laoji cold tea

The present invention relates to a separation and purification method of the index component of Wang old Ji cool tea, which belongs to the technical field of quality control of cold tea plant beverage. The separation and purification methods were divided by AB 8 macroporous resin, to subdivide the HP20 macroporous resin, were detected in monitoring liquid chromatography conditions, using Sephadex LH 20 gel and reversed-phase silica gel column as the stationary phase, the components of the chromatographic separation and purification, the final can be obtained as a single compound herbal tea Wang Laoji index components, can be used as a reference, the auxiliary detection component, provides the precondition and guarantee for the quality inspection of herbal tea Wang Laoji.

【技术实现步骤摘要】
王老吉凉茶指标性成分的分离纯化方法
本专利技术涉及凉茶植物饮料质量控制
，特别是涉及一种王老吉凉茶指标性成分的分离纯化方法。
技术介绍
岭南凉茶文化拥有悠久的历史积蕴和民俗内涵。古时岭南为百越之地，多瘴气，染者无有不死。岭南人民在与恶劣自然环境的不断抗争中，积累了调理保健、防病治病的宝贵经验。他们根据本地的气候、水土特性，以一些具有清热解毒、生津止渴、祛火除湿等功效的岭南特色中草药为基础，在中医养生理论指导下经过长期实践，创造出各种各样的"凉茶"，用于防病治病，形成了一条岭南文化的独特风景线。王老吉凉茶是历史最早的广东凉茶，始创于1828年(清道光八年)，至今已有180多年历史，被公认为凉茶始祖，有"药茶王"之称。最近几十年，随着现代化生产设备和先进管理理念的引入，凉茶业发生了大变革，过去守着凉茶铺喝凉茶的局面被打破，凉茶被加工成饮用更方便的颗粒剂、袋泡茶、利乐包、罐装等多种规格。王老吉凉茶以水、白砂糖、仙草、蛋花、菊花、夏枯草、甘草、金银花、布渣叶为原料，经提取、浓缩、配制、灭菌、包装等主要加工工艺制成，其口感清凉爽口，冷热饮用皆宜，受到消费者的喜爱。为全面的反映及监测该品种的内在质量，促进该品种的发展，应开展该品种中各成分检测方法的研究。但是，要对王老吉凉茶中各成分进行检测，需要满足的先决条件为获得这些指标性成分的纯品，用以辅助检测。
技术实现思路
本专利技术提供一种王老吉凉茶指标性成分的分离纯化方法，能够将王老吉凉茶中的指标性成分分离纯化，用以辅助检测其中各成分，为王老吉凉茶的质量检测提供先决条件和保障。一种王老吉凉茶指标性成分的分离纯化方法，包括以下步骤：粗分：取王老吉凉茶浸膏，上样至AB-8型大孔吸附树脂柱；以3-5个柱体积的水洗脱，弃去水液；再以2-4个柱体积的体积百分数为70-80％的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液；蒸干得稠膏，备用；细分：取上述稠膏，上样至HP20型大孔树脂柱；以3-5个柱体积的水洗脱，弃去水液；再以8-12个柱体积的体积百分数为15-25％的甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液，回收溶剂得到组份2；以8-12个柱体积的体积百分数为35-45％的甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液，将相同流份合并，依次得到组份3和组份4；以15-25个柱体积的体积百分数为60-80％的甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液，回收溶剂得到组份5；纯化：将上述得到的各组份经SephadexLH-20凝胶与反相硅胶柱分离纯化，并以液相色谱进行检测监控，得到单体化合物，即为王老吉凉茶指标性成分。上述王老吉凉茶指标性成分的分离纯化方法，以AB-8型大孔树脂进行粗分，以HP20型大孔树脂进行细分，再在液相色谱进行检测监控的条件下，以SephadexLH-20凝胶与反相硅胶柱为固定相，对各组份进行色谱分离纯化，最终得到能够作为王老吉凉茶指标性成分的单体化合物，可用做对照品，辅助检测其中各成分，为王老吉凉茶的质量检测提供先决条件和保障。在其中一个实施例中，所述粗分步骤中：取王老吉凉茶浸膏，上样至AB-8型大孔吸附树脂柱；以4个柱体积的水洗脱，弃去水液；再以3个柱体积的体积百分数为75％的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液；蒸干得稠膏，备用；所述细分步骤中：取上述稠膏，上样至HP20型大孔树脂柱；以3-5个柱体积的水洗脱，弃去水液；再以10个柱体积的体积百分数为20％的甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液，回收溶剂得到组份2；以10个柱体积的体积百分数为40％的甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液，将相同流份合并，依次得到组份3和组份4；以20个柱体积的体积百分数为75％的甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液，回收溶剂得到组份5。在其中一个实施例中，所述纯化步骤中：将组份2上样至反相C18硅胶柱，先以甲醇-水梯度洗脱，再配合SephadexLH-20凝胶柱和反相C18硅胶柱，以甲醇-水梯度洗脱，并通过液相色谱进行检测监控，收集合并相同流份，纯化得到甘草酸单铵盐、甘草苷、灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙、异绿原酸A、绿原酸。在其中一个实施例中，所述纯化步骤中：将组份3上样至反相C18硅胶柱，先以甲醇-水梯度洗脱，再配合SephadexLH-20凝胶柱和反相C18硅胶柱，以甲醇-水梯度洗脱、氯仿甲醇等度洗脱，并通过液相色谱进行检测监控，收集合并相同流份，纯化得到木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、水仙苷、芦丁、原儿茶酸、和儿茶醛。在其中一个实施例中，所述纯化步骤中：将组份4上样至反相C18硅胶柱，先以甲醇-水梯度洗脱，再配合SephadexLH-20凝胶柱和反相C18硅胶柱，以甲醇-水梯度洗脱，并通过液相色谱进行检测监控，收集合并相同流份，纯化得到咖啡酸、迷迭香酸、三叶豆苷、和山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-α-L-鼠李糖。在其中一个实施例中，所述纯化步骤中：将组份5上样至SephadexLH-20凝胶柱，先以氯仿-甲醇梯度洗脱，再配合反相C18硅胶柱和SephadexLH-20凝胶柱，以甲醇-水梯度洗脱，并通过液相色谱进行检测监控，收集合并相同流份，纯化得到迷迭香酸甲酯、β-香树脂醇。在其中一个实施例中，所述纯化步骤中，所述液相色谱进行检测监控的条件为：固定相：碳十八烷基硅烷基键合硅胶为填料的色谱柱；流动相：乙腈或甲醇为流动相A，体积百分比浓度为0.1％的甲酸水溶液为流动相B，流动相A与B的体积比为16:84-70:30；或以乙腈为流动相；流速：0.8-1.2mL/min。采用上述液相色谱条件，能够很好的表征分离纯化中各组份，为分离和纯化提供指引和依据。在其中一个实施例中，所述纯化步骤中，所述固定相为Kromasil100-5C18(4.6×250mm)色谱柱或AgilentZorbaxSB-C18(4.6×150mm)色谱柱。在其中一个实施例中，所述AB-8型大孔树脂分离步骤中，将王老吉凉茶浸膏以水稀释至相对密度在1.15-1.2之间，再上样至AB-8型大孔吸附树脂柱。以上述浓度上样，具有较好的吸附效果。在其中一个实施例中，所述HP20型大孔树脂分离步骤中，将所述稠膏以水溶解后离心，取离心上清液上样至HP20型大孔树脂柱。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术的一种王老吉凉茶指标性成分的分离纯化方法，以AB-8型大孔树脂进行粗分以HP20型大孔树脂进行细分在液相色谱进行检测监控的条件下，以SephadexLH-20凝胶与反相C18硅胶柱为固定相，对各组份进行色谱分离纯化，最终得到能够作为王老吉凉茶指标性成分的单体化合物，可用做对照品，辅助检测其中各成分，为王老吉凉茶的质量检测提供先决条件和保障。并且，该方法对具体分离纯化工艺条件进行了优化，得到提高得到的指标性成分单体的纯度和产量。附图说明图1为实施例中粗分工艺流程示意图；图2为实施例中细分工艺流程示意图。具体实施方式为了便于理解本专利技术，下面将对本专利技术进行更全面的描述。以下给出了本专利技术的较佳实施例。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种王老吉凉茶指标性成分的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：粗分：取王老吉凉茶浸膏，上样至AB‑8型大孔吸附树脂柱；以3‑5个柱体积的水洗脱，弃去水液；再以2‑4个柱体积的体积百分数为70‑80％的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液；蒸干得稠膏，备用；细分：取上述稠膏，上样至HP20型大孔树脂柱；以3‑5个柱体积的水洗脱，弃去水液；再以8‑12个柱体积的体积百分数为15‑25％的甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液，回收溶剂得到组份2；以8‑12个柱体积的体积百分数为35‑45％的甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液，将相同流份合并，依次得到组份3和组份4；以15‑25个柱体积的体积百分数为60‑80％的甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，得到组份5；纯化：将上述得到的各组份经Sephadex LH‑20凝胶与反相硅胶柱分离纯化，并以液相色谱进行检测监控，得到单体化合物，即为王老吉凉茶指标性成分。

【技术特征摘要】
1.一种王老吉凉茶指标性成分的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：粗分：取王老吉凉茶浸膏，上样至AB-8型大孔吸附树脂柱；以3-5个柱体积的水洗脱，弃去水液；再以2-4个柱体积的体积百分数为70-80％的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液；蒸干得稠膏，备用；细分：取上述稠膏，上样至HP20型大孔树脂柱；以3-5个柱体积的水洗脱，弃去水液；再以8-12个柱体积的体积百分数为15-25％的甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液，回收溶剂得到组份2；以8-12个柱体积的体积百分数为35-45％的甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液，将相同流份合并，依次得到组份3和组份4；以15-25个柱体积的体积百分数为60-80％的甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，得到组份5；纯化：将上述得到的各组份经SephadexLH-20凝胶与反相硅胶柱分离纯化，并以液相色谱进行检测监控，得到单体化合物，即为王老吉凉茶指标性成分。2.根据权利要求1所述的王老吉凉茶指标性成分的分离纯化方法，其特征在于，所述粗分步骤中：取王老吉凉茶浸膏，上样至AB-8型大孔吸附树脂柱；以4个柱体积的水洗脱，弃去水液；再以3个柱体积的体积百分数为75％的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液；蒸干得稠膏，备用；所述细分步骤中：取上述稠膏，上样至HP20型大孔树脂柱；以3-5个柱体积的水洗脱，弃去水液；再以10个柱体积的体积百分数为20％的甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液，回收溶剂得到组份2；以10个柱体积的体积百分数为40％的甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液，将相同流份合并，依次得到组份3和组份4；以20个柱体积的体积百分数为75％的甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，得到组份5。3.根据权利要求1所述的王老吉凉茶指标性成分的分离纯化方法，其特征在于，所述纯化步骤中：将组份2上样至反相C18硅胶柱，先以甲醇-水梯度洗脱，再配合SephadexLH-20凝胶柱和反相C18硅胶柱，以甲醇-水梯度洗脱，并通过液相色谱进行检测监控，收集合并相同流份，纯化得到甘草酸单铵盐、甘草苷、灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙、异绿原酸A、绿原酸。4.根据权利要求1所述的王老吉凉茶指标性成分的分离纯化方法，其特征在于，所述纯化步骤中：将组份3上样至反相C18硅胶柱，先...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑荣波，祝晨蔯，黄晓丹，伍柏坚，林朝展，和海龙，林德晖，刘主洁，方广宏，
申请(专利权)人：广州王老吉药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44