一种底物特异性提高的角蛋白酶突变体及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种底物特异性提高的角蛋白酶突变体及其制备方法，属于酶工程领域。本发明专利技术通过分析得出最佳突变点进行定点突变，获得角蛋白酶酶活和底物专一性提高的优秀突变体。该角蛋白酶及其突变体能够有效水解羽毛，羊毛等非水溶性角蛋白底物，可用于皮革纺织工业和饲料工业。

【技术实现步骤摘要】
一种底物特异性提高的角蛋白酶突变体及其制备方法本申请是申请号为：201510119684.1，申请日为：2015年3月18日，申请名称为：一种底物特异性提高的角蛋白酶突变体及其制备方法的分案申请。
本专利技术涉及一种底物特异性提高的角蛋白酶突变体及其制备方法，属于酶工程领域。
技术介绍
角蛋白酶(Keratinase)为一种可以特异性降解角蛋白的酶类，由真菌、放线菌和细菌等多种微生物产生。角蛋白酶在食品、医药、饲料、精化和制革等工业中广泛应用，具有嫩化肉类、生产高级营养品、免疫制剂和饲料添加剂以及美容、软化皮革等作用，并可导致疯牛病和人类克雅氏症的阮蛋白(Prion)的降解。虽然角蛋白酶有着巨大的应用和研究价值，但是从野生菌中筛选出的角蛋白酶热稳定性差，底物专一性不高，大大降低了角蛋白酶的开发和运用。目前已经报道的角蛋白酶基因主要来自国外的一株地衣芽胞杆菌的kerA基因。本专利技术将来自嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonasmaltophilia)BBE11-1的角蛋白酶KerSMD进行分子改造，提高角蛋白酶对酪蛋白或羽毛的底物专一性，对角蛋白酶的规模化生产及推广具有深远本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种角蛋白酶突变体，其特征在于，是将来源于嗜麦芽窄食单胞菌的角蛋白酶的第215位的酪氨酸替换成甘氨酸。

【技术特征摘要】
1.一种角蛋白酶突变体，其特征在于，是将来源于嗜麦芽窄食单胞菌的角蛋白酶的第215位的酪氨酸替换成甘氨酸。2.根据权利要求1所述的角蛋白酶突变体，其特征在于，所述来源于嗜麦芽窄食单胞菌的角蛋白酶的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。3.编码权利要求1所述角蛋白酶突变体的基因。4.携带权利要求3所述基因的载体或重组细胞。5.一种获得权利要求1所述角蛋白酶突变体的方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)将从嗜麦芽窄食单胞菌BBE11-1中获得的编码角蛋白酶的基因，克隆到pET22b(+)中，构建重组质粒pET22b+kerSMD；(2)采用滚环PCR的方法，设计含有代表突变氨基酸的密码子碱基的互补引物，PCR扩增质粒pET22b+kerSMD得到含有编码角蛋白酶突变体的基因序列的开环重组载体；(3)将含有编码正确突变体的基因的PCR反应液经过DpnI内切酶消化，除去未突变的原质粒，反...

【专利技术属性】
技术研发人员：张娟，方真，堵国成，陈坚，刘柏宏，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32