恒河猴肺纤维化模型的造模方法、制剂、制剂的制备方法、恒河猴肺纤维化模型及其应用技术

本发明专利技术公开了恒河猴肺纤维化模型的造模方法、制剂、制剂的制备方法、恒河猴肺纤维化模型及其应用，造模方法，包括步骤:S1、向恒河猴皮下注射百草枯溶液，并向恒河猴气管滴注博来霉素溶液；S2、生成恒河猴肺纤维化模型。造模后，通过观察恒河猴的临床症状、自主活动、采食量、呼吸频率、血液学指标、彩超检查及肺部组织病理学结果诊断恒河猴造模是否成功以及评价治疗肺纤维化药物的药效。本发明专利技术方法所建立的动物模型，临床症状、血液学指标、彩超检查及肺部组织病理学改变与临床肺纤维化症状相似，并且百草枯联合博来霉素造模比单独注射百草枯或单独滴注博来霉素建立的模型成功率更高、稳定性更好，适用于治疗肺纤维化新药的评价。

Modeling method of Ganges RIver monkey pulmonary fibrosis model, preparation method, preparation method, Ganges RIver monkey pulmonary fibrosis model and its application

The present invention discloses Ganges RIver monkey pulmonary fibrosis model modeling method, preparation, preparation method, Ganges RIver monkey pulmonary fibrosis model and its application, the modeling method, which comprises the following steps: S1, to Ganges RIver monkey subcutaneous injection of paraquat solution, and to the Ganges RIver monkey tracheal instillation of bleomycin solution; S2, generation Ganges RIver monkey model of pulmonary fibrosis. After modeling, we observed the clinical symptoms, autonomic activities, intake, respiratory rate, hematology, color Doppler ultrasound and histopathological findings of Ganges RIver monkeys, and evaluated the success of Ganges RIver monkey models and evaluated the efficacy of pulmonary fibrosis drugs. The animal model established by the method of the invention, pathology, clinical symptoms, hematological indexes, ultrasonography and lung histological changes similar to those of the clinical symptoms of pulmonary fibrosis, and paraquat combined with bleomycin model than the model of a single injection of paraquat alone or instillation of bleomycin to establish a higher success rate and stability better evaluation for the treatment of pulmonary fibrosis drug.

【技术实现步骤摘要】
恒河猴肺纤维化模型的造模方法、制剂、制剂的制备方法、恒河猴肺纤维化模型及其应用
本专利技术涉及恒河猴肺纤维化模型的造模方法、制剂、制剂的制备方法、恒河猴肺纤维化模型及其应用，属于生物医药领域。
技术介绍
肺纤维化一般指在毒物、自发免疫反应、药物副反应、感染、严重外伤等不同因素刺激下引起肺部炎症反应，以肺泡表面上皮细胞损伤，炎性细胞累积，成纤维细胞增生，细胞外基质沉积和疤痕形成为主要特征，最终导致正常肺组织结构改变、功能丧失的一类疾病，是间质性肺疾病的终末结局。该病发病原因不明，目前没有有效的药物治疗，其预后不良，严重影响人类的健康和生活质量。目前肺纤维化动物模型常采用小鼠、大鼠、兔等动物造模，以上动物体型小、体重轻、价格便宜、操作简单，但仍存在以下几种问题：(1)以上动物因其体型太小不适用于影像学检查(彩超检查或X光检查)，只能通过解剖摘取肺部进行组织病理学检查的方法判断造模是否成功。(2)以上动物因其基因、种属、血液学参数、肺部生理结构与人类相差较大，因此造模后所取得的试验数据无法与临床肺纤维化病人的数据进行直接比较。当然使用这些动物模型所评价的治疗肺纤维化新药的药效结果或毒理结果也无法直接外推至人。(3)治疗肺纤维化是一个漫长的过程，而小鼠、大鼠的寿命一般都比较短，因此可能无法在大、小鼠有效的生命期内看到治疗肺纤维化新药的药效结果。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述缺陷，提供恒河猴肺纤维化模型的造模方法、制剂、制剂的制备方法、恒河猴肺纤维化模型及其应用。恒河猴基因组与人类基因序列相似度为92％～95％，是目前已知的除黑猩猩外，基因组序列与人最接近的灵长类动物，恒河猴的组织器官、内分泌系统、血液学参数等与人类相当接近，使用恒河猴进行实验研究，所得结果很容易外推于人类。为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：恒河猴肺纤维化模型的造模方法，包括如下步骤:S1、向恒河猴皮下注射百草枯溶液，并向恒河猴气管滴注博来霉素溶液；S2、生成恒河猴肺纤维化模型。使用恒河猴建立肺纤维化模型具有以下优势或创新点：(1)对恒河猴皮下注射百草枯后，动物会出现精神萎靡、活动减少、呼吸频率明显加快、咳嗽等临床症状，与临床病人疾病特征相似，以上症状在小动物身上无法全面显现。(2)恒河猴体型大，血含量高，造模后可每周静脉采集足够血液进行血液学检查而且恒河猴血液学参数与人类相似，造模后可看到红细胞数和血红蛋白含量明显增加，红细胞分布宽度明显变大。以上血液学参数变化与临床肺纤维化病人的相似，目前尚未发现其它动物肺纤维化模型中检测以上参数。(3)恒河猴体型大，心脏和肺部组织结构与人类相似，可以通过彩超检查心尖四腔切面三尖瓣口是否具有三尖瓣返流，从而判断恒河猴肺部是否已形成肺纤维化。以上彩超判断方法仅发现在临床上使用，目前尚未发现在其它肺纤维化动物模型中使用，可以不用将动物剖杀后制成肺部病理切片才能确诊动物是否具有肺纤维化。由于该方法是无创的，因此也可以动态的观察动物的造模情况以及监测给予肺纤维化药物治疗后的效果。具体地，所述百草枯注射剂量为10mg/kg/次，每周1次，共注射2次；所述博来霉素的使用剂量为1mg/kg/次，每周1次，共使用2次。在步骤S2之前还包括判断是否成功生成恒河猴肺纤维化模型的步骤：观察恒河猴临床症状、自主活动、采食量、呼吸频率、体重、血液学指标、彩超检查及肺部组织病理学结果。当出现以下症状时，表示成功生成恒河猴肺纤维化模型：a、临床症状：精神萎靡、毛发凌乱，对外界反应降低；b、自主活动：攀爬、张望及理毛行为的发生率降低；c、采食量：采食量降低；d、呼吸频率：明显增加；e、血常规：红细胞数和血红蛋白含量明显增加，红细胞分布宽度明显变大；f、体重：体重降低；g、彩色超声：出现三尖瓣反流；h、肺部组织病理学结果：动物肺脏出现纤维化，肺部整体萎缩，肺泡隔增厚，炎性细胞浸润，肺泡数量显著减少，纤维增生明显。在所述步骤S1之前，还包括对待建模的恒河猴进行检疫的步骤，检疫内容包括体检、结核杆菌、寄生虫、沙门氏菌和志贺氏菌试验。恒河猴肺纤维化模型的造模方法中所使用的制剂，包括百草枯溶液、博来霉素溶液；所述百草枯溶液的浓度为8mg/ml—12mg/ml，所述博来霉素溶液的浓度为8mg/ml—12mg/ml；所述百草枯溶液、博来霉素溶液的溶剂均为生理盐水。具体地，恒河猴肺纤维化模型的造模方法中所使用的制剂，所述百草枯溶液的浓度为10mg/ml，所述博来霉素溶液的浓度为10mg/ml。恒河猴肺纤维化模型的造模方法中所使用的制剂的制备方法，包括如下步骤：L1、称取百草枯粉末，加入生理盐水中，摇匀得到浓度为8mg/ml—12mg/ml的百草枯溶液；L2、称取博来霉素，加入生理盐水中，溶解后形成浓度为8mg/ml—12mg/ml的博来霉素溶液。本专利技术还保护恒河猴肺纤维化模型，包括恒河猴肺纤维化模型的造模方法生成的恒河猴肺纤维化模型。本专利技术还保护采用恒河猴肺纤维化模型在评价肺纤维化治疗药物中的应用。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：1、本专利技术首次使用百草枯联合博来霉素建立恒河猴肺纤维化模型，该方法比其它造模方法需要的造模时间更短，模型更稳定，造模成功率更高。2、本专利技术恒河猴肺纤维化模型的建立方法，选择与人类生理结构、功能及相关疾病诊治指标的相似的恒河猴作为模型动物，能够快速获得稳定、可靠的肺纤维化模型，造模方法更合理，与人类的发病机制更接近，适合于评价、筛选治疗肺纤维化疾病的药物。3、本专利技术恒河猴肺纤维化模型造模是否成功方法，选择临床症状、血液学参数、彩超检查这几种指标进行诊断，结果与临床肺纤维化病人相似，以上指标难以在其它动物肺纤维化模型中检测，特别是彩超检查，该方法不仅可以避免将动物剖杀后制成肺部病理切片才能确诊动物是否具有肺纤维化而且还可以动态的观察动物的造模情况以及监测给予肺纤维化药物治疗后的效果。附图说明图1为本专利技术的实施例中三尖瓣返流血流频谱图，箭头所指为三尖瓣返流波图。图2为本专利技术的实施例中肺部病理切片图，HE×200。具体实施方式下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步说明，本专利技术的实施方式包括但不限于下列实施例。实施例恒河猴肺纤维化模型的造模方法，包括如下步骤:S1、向恒河猴皮下注射百草枯溶液，并向恒河猴气管滴注博来霉素溶液，百草枯注射剂量为10mg/kg/次，每周1次，共注射2次；所述博来霉素的使用剂量为1mg/kg/次，每周1次，共使用2次；S2、生成恒河猴肺纤维化模型。实验1、试验动物恒河猴4只，体重3-5kg，年龄3-4岁，雌雄各半。试验前检疫合格，内容包括体检、结核杆菌试验、寄生虫、沙门氏菌和志贺氏菌。动物经兽医检疫确认健康。2、试验试剂(1)百草枯，生产厂家：SHANGHAIZIQIBIOCO.,LTD。(2)博来霉素，生产厂家：日本化药株式会社。(2)生理盐水，生产厂家：四川科伦药业股份有限公司。3、试验仪器彩色超声仪器：GEVividS5彩色超声诊断仪。4、造模方法(1)制剂：浓度为10mg/ml的百草枯溶液，浓度为10mg/ml的博来霉素溶液，溶剂均为生理盐水。百草枯溶液的配制方法：称取200mg百草枯粉末，加入20ml生理盐水，摇匀后形成10mg/ml百草枯溶液。博来霉素的配制方法：取称1本文档来自技高网...

【技术保护点】
恒河猴肺纤维化模型的造模方法，其特征在于，包括如下步骤:S1、向恒河猴皮下注射百草枯溶液，并向恒河猴气管滴注博来霉素溶液；S2、生成恒河猴肺纤维化模型。

【技术特征摘要】
1.恒河猴肺纤维化模型的造模方法，其特征在于，包括如下步骤:S1、向恒河猴皮下注射百草枯溶液，并向恒河猴气管滴注博来霉素溶液；S2、生成恒河猴肺纤维化模型。2.根据权利要求1所述的恒河猴肺纤维化模型的造模方法，其特征在于，所述百草枯注射剂量为10mg/kg/次，每周1次，共注射2次；所述博来霉素的使用剂量为1mg/kg/次，每周1次，共使用2次。3.根据权利要求1所述的恒河猴肺纤维化模型的造模方法，其特征在于，在步骤S2之前还包括判断是否成功生成恒河猴肺纤维化模型的步骤：观察恒河猴临床症状、自主活动、采食量、呼吸频率、体重、血液学指标、彩超检查及肺部组织病理学结果。4.根据权利要求3所述的恒河猴肺纤维化模型的造模方法，其特征在于，当出现以下症状时，表示成功生成恒河猴肺纤维化模型：a、临床症状：精神萎靡、毛发凌乱，对外界反应降低；b、自主活动：攀爬、张望及理毛行为的发生率降低；c、采食量：采食量降低；d、呼吸频率：明显增加；e、血常规：红细胞数和血红蛋白含量明显增加，红细胞分布宽度明显变大；f、体重：体重降低；g、彩色超声：出现三尖瓣反流；h、肺部组织病理学结果：动物肺脏出现纤维化，肺部整体萎缩，肺泡隔增厚，炎性细胞浸润，肺泡数量显著减少，纤维增生明显。5.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾文，龚立，潘玲珍，
申请(专利权)人：四川普莱美生物科技集团有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51