一种转抗菌肽PR39基因小鼠制造技术
A transgenic mouse with antiseptic peptide PR39
The invention discloses a cecropin PR39 gene in mice, the antibacterial peptide PR39 gene integration in mouse chromosome thirteenth, located between the GM36264 gene and GM8784 gene, and the transgenic mice can be stable inheritance of PR39 gene to the offspring, and in various body tissue specific expression of antibacterial peptide PR39 protein, a the best inhibitory effect, and can play the role of its antimicrobial resistance, for the subsequent transfer of antibacterial peptide gene of livestock have laid the foundation, and provides a feasible solution for to reduce the use of antibiotics.
【技术实现步骤摘要】
一种转抗菌肽PR39基因小鼠
本专利技术涉及基因工程领域，特别涉及一种转抗菌肽PR39基因小鼠。
技术介绍
抗菌肽(Antimicrobialpeptides，AMPs)是一类具有抗菌活性的小分子多肽，它是机体天然免疫防御系统的重要组成部分。研究表明，抗菌肽与抗生素相比，具有更广谱的抗菌能力，而且还具有抗病毒、抗真菌、抗癌等作用，其容易被蛋白酶解，不易在动物体内残留，不易使细菌产生耐药性，因而受到研究者的广泛关注。抗菌肽的分类：抗菌肽可以根据分子带电情况、结构和来源进行分类。抗菌肽根据分子带总电荷情况，可以分为阳离子抗菌肽和阴离子抗菌肽，阳离子抗菌肽占绝大部分；根据结构可以分为多种类型，其中cathelicidins和defensins为主要的两种类型；根据来源可以分为来源于昆虫、哺乳动物、两栖动物、鱼类、软体动物、甲壳类动物、植物及细菌等生物的抗菌肽。抗菌肽的分子结构：抗菌肽分子量较小，一般小于40kD，通常由20-60个氨基酸组成，它具有不同的分子结构，包括一、二、三和四级结构，其中二级结构包括线性α—螺旋结构、β一折叠结构、含伸展片层结构和环形结构等4种类型...
【技术保护点】
一种转抗菌肽PR39基因小鼠，其特征在于，所述抗菌肽PR39基因整合在所述转抗菌肽PR39基因小鼠的第13号染色体上。
【技术特征摘要】
1.一种转抗菌肽PR39基因小鼠，其特征在于，所述抗菌肽PR39基因整合在所述转抗菌肽PR39基因小鼠的第13号染色体上。2.根据权利要求1所述的转抗菌肽PR39基因小鼠，其特征在于，所述抗菌肽PR39基因位于转基因小鼠的第13染色体上的GM36264基因与GM8784基因之间。3.根据权利要求2所述的转抗菌肽PR39基因小鼠，其特征在于，所述的转抗菌肽PR39基因小鼠是通过如下步骤获得的：(1)根据PR39基因CDS序列，在基因序列两端增加酶切位点，人工合成相应的DNA序列；(2)将合成的DNA序列连接到pCMS-EGFP空载体上，获得抗菌肽PR39基因表达载体pCMS-EGFP-PR39；(3)对抗菌肽PR39基因表达载体pCMS-EGFP-PR39进行功能验证；(4)将能有效表达PR39基因的表达载体pCMS-EGFP-PR39显微注射小鼠受精卵雄原核，并将注射后的受精卵移植至代孕母鼠子宫内，经过妊娠获得F0代转基因小鼠；(5)对获得的F0代转基因小鼠进行检测，选取PR39基因表达量高，且整合位点单一的个体进行后续研究；(6)将筛选出的F0代个体与野生型小鼠配种繁殖，获得F1代转基因小鼠；(7)对获得的F1代转基因小鼠进行检测，筛选出能稳定遗传且高效表达PR39基因的个体进行整合位点分析，并用于后续研究；(8)对筛选出的F1代个体进行繁殖，获得相应的家系，并对该家系进行抗细菌实验，得到能有效抵抗细菌的转抗菌肽PR39基因小鼠。4.根据权利要求3所述的转抗菌肽PR39基因小鼠，其特征在于，所述抗菌肽PR39基因表达载体pCMS-EGFP-PR39基因序列为SEQIDNO:1。5.根据权利要求3所述的转抗菌肽PR39基因小鼠，其特征在于，所述步骤(3)包括将表达载体转染293细胞后，进行qPCR检测及抑菌效果检测。6.根据权利要求5所述的转抗菌肽PR39基因小鼠，其特征在于，所述的qPCR检测，包括如下步骤：(1)pCMS-EGFP-PR39表达载体转染293细胞，24h后在荧光显微镜下...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴珍芳，赵成成，曾芳，李紫聪，董锐，刘德武，郑恩琴，蔡更元，宋长绪，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东,44
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