一种检测转录因子NF-κBp50的荧光化学传感器及其检测方法技术

本发明专利技术公开了一种检测转录因子NF‑κBp50的荧光化学传感器及其检测方法，该传感器以2‑氨基嘌呤(2‑AP)为荧光基，采用目标驱动的自发的等温扩增、核酸外切酶辅助荧光信放大策略，且没有任何额外的引物和模板的参与的情况下实现对转录因子的超灵敏检测，操作简便、快速，试验结果准确、可靠。经试验验证，本发明专利技术技术方案检测极限达到4.04×10

Fluorescent chemical sensor for detecting NF transcription factor kappa Bp50 and its detection method

The invention discloses a fluorescent chemical sensor for detecting NF transcription factor kappa Bp50 and its detection method, the sensor with 2 aminopurine (2 AP) as a fluorescence based amplification, exonuclease assisted fluorescence signal amplification strategy using goal-driven spontaneous isothermal, and no implementation of ultra sensitive detection of transcription factor any additional primers and templates involved in the case, the operation is simple and rapid, accurate and reliable test result. The test limit is up to 4.04 x 10 by test

【技术实现步骤摘要】
一种检测转录因子NF-κBp50的荧光化学传感器及其检测方法
本专利技术属于生物分析
，具体涉及一种检测转录因子NF-κBp50的荧光化学传感器及其检测方法。
技术介绍
DNA结合蛋白在基因组复制，基因转录，细胞分裂和DNA修复过程中起着至关重要的作用。而大部分的DNA结合蛋白都扮演着转录因子的角色，调节着细胞的发育，分化和增殖，由此转录因子也已经成为临床诊断和药物筛选中的靶点。因此，开展对DNA结合蛋白的超灵敏检测不仅对基础生物化学的深入研究有很大帮助，同时对发展人类疾病的新的治疗方法和策略具有重大意义。迄今为止，在DNA结合蛋白检测方法中，传统的电泳迁移法(EMSA)和DNA酶足迹法检测灵敏度偏低，而且同位素标记探针会引起放射性污染。而酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫印迹法(WesternBlotting)需要与蛋白结合的特异性抗体，操作步骤繁琐。基于荧光能量共振转移(FRET)的方法需要有双荧光标记的DNA探针，大大增加了实验的成本。为了提高检测的灵敏度，各种转录因子检测方法中引入了核酸扩增策略，如实时聚合酶链反应(PCR)，指数扩增反应(EXPAR)，解旋酶依赖性扩增本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测细胞内转录因子NF‑κBp50的荧光化学传感器，其特征在于，所述荧光化学传感器包括：转录因子NF‑κBp50结合探针和辅助探针；其中，转录因子NF‑κBp50结合探针由一个p50‑s探针与p50‑anti反探针杂化组成，p50‑s探针与p50‑anti反探针序列上有两个不相邻的转录因子识别位点，所述p50‑s探针转录因子识别位点序列为5'‑GGG ACT TTC C‑3'，两个转录因子识别位点之间的存在磷酸二酯键为硫代修饰；所述p50‑s探针与p50‑anti反探针上均设计有2‑氨基嘌呤(2‑AP)荧光基；所述p50‑s探针与p50‑anti反探针5'端的磷酸二酯键均为硫代修饰；所述辅...

【技术特征摘要】
1.一种检测细胞内转录因子NF-κBp50的荧光化学传感器，其特征在于，所述荧光化学传感器包括：转录因子NF-κBp50结合探针和辅助探针；其中，转录因子NF-κBp50结合探针由一个p50-s探针与p50-anti反探针杂化组成，p50-s探针与p50-anti反探针序列上有两个不相邻的转录因子识别位点，所述p50-s探针转录因子识别位点序列为5'-GGGACTTTCC-3'，两个转录因子识别位点之间的存在磷酸二酯键为硫代修饰；所述p50-s探针与p50-anti反探针上均设计有2-氨基嘌呤(2-AP)荧光基；所述p50-s探针与p50-anti反探针5'端的磷酸二酯键均为硫代修饰；所述辅助探针为与p50-s探针、p50-anti反探针近5'端的部分碱基序列互补。2.如权利要求1所述的一种检测细胞内转录因子NF-κBp50的荧光化学传感器，其特征在于，所述荧光化学传感器还包括核酸外切酶III，Nb.BtsI内切酶，λ核酸外切酶和KF聚合酶。3.如权利要求1所述的一种检测细胞内转录因子NF-κBp50的荧光化学传感器，其特征在于，所述p50-s探针长度为66nt，所述p50-s探针的碱基序列为：5'-A*A*AACTCACTGCACTCGATCGGACAGATGGGACTTTCCTTGATA*G*GACCTGGGGGACTTTCCAATA-3'，其中，*代表硫代修饰，A代表2-氨基嘌呤取代碱基。4.如权利要求1所述的一种检测细胞内转录因子NF-κBp50的荧光化学传感器，其特征在于，所述p50-anti反探针长度为66nt，所述p50-anti反探针的碱基序列为：5'-A*A*AACTCACTGCACTCGATCGGACTATTGGAAAGTCCCCCAGGT*C*CTATCAAGGAAAGTCCCATCT-3'，其中，*代表硫代修饰，A代表2-氨基嘌呤取代碱基。5.如权利要求1所述的一种检测细胞内转录因子NF-κBp50的荧光化学传感器，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：张春阳，唐波，张艳，相东雪，
申请(专利权)人：山东师范大学，
类型：发明
国别省市：山东,37