一种简易微量化无细胞蛋白质快速合成的方法技术

本发明专利技术公开了一种简易微量化无细胞蛋白质快速合成的方法，步骤：将乳化剂加入到油性溶剂中配成油相乳化剂体系；将无细胞表达体系与油相乳化剂体系混合，搅拌得到油包水乳化体系；(2)将油包水乳化体系在4℃‑37℃，搅拌5min～300min，得到含有表达蛋白的乳液滴。本发明专利技术操作简便，耗时短，低成本，微量化并可及时反馈无细胞蛋白质生产情况，以乳液滴为无细胞蛋白生产模型，可明显缩短蛋白生产时间，节省时长为原体系的1/3～4/5，油包水乳液滴体系可实现微升至毫升级(5μL‑1000mL)的乳液滴内蛋白质生产；有利于精确研究无细胞乳液滴体系随时间变化的整个过程，尤其是前期生化反应过程。

A simple method for rapid synthesis of micro cell free proteins

Step method, the invention discloses a simple micro rapid synthesis of cell-free protein: emulsifier into oily solvent into the oil phase emulsifier system; the cell expression system and oil emulsifier mixture, stirring to obtain water in oil emulsion system; (2) the water in oil emulsion system in 4 C 37 DEG C, stirring 5min ~ 300min, containing protein emulsion droplet. The invention has the advantages of simple operation, short time, low cost, and timely feedback trace production of cell-free protein, with the emulsion droplet production model of cell protein, protein can significantly shorten the production time, save when the length of the original system of 1/3 ~ 4/5, drops of water in oil emulsion system can achieve slightly to upgrade (without 5 L 1000mL) emulsion drops in protein production; the whole process is conducive to precise research of cell free emulsion droplet system changes with time, especially in the early biochemical reaction process.

【技术实现步骤摘要】
一种简易微量化无细胞蛋白质快速合成的方法
本专利技术属于生物反应系统领域，具体涉及一种简易微量化无细胞蛋白质快速合成的方法。
技术介绍
无细胞蛋白表达体系(Cell-freeProteinSynthesis，CFPS)一直以来被广泛应用于基础合成生物学领域，与传统的细胞基的蛋白表达体系相比，无细胞体系摆脱细胞本身所带来的生理限制，有较强的可调控性，可用于毒性蛋白的生产及制备，使众多不能在细胞内完成的蛋白表达变成了现实，真正实现了生命系统的体外构建及高效表达(贾晓歌,邓子新,刘天罡.微生物学报,2016,56(3):530-542)。此外，无细胞体系作为一种快速、简洁的体外蛋白合成媒介，通过多种细胞抽提物的合理设计与配合，实现基因(质粒)在体外特定环境下复制、转录与翻译表达，实现蛋白质的高通量性表达。近些年来，随着研究人员对无细胞体系的不断优化及研究，无细胞体系已经实现生产效率高、成本低廉和反应体积大等特点，凭借这些特点，无细胞体系在生物制药领域、高通量药物筛选、重组蛋白药物生产及个体化定制肿瘤疫苗等领域具有极大的应用潜力(ZhuFY,ZhongXF,HuMZ,etal.Biotech本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种简易微量化无细胞蛋白质快速合成的方法，其特征是包括如下步骤：(1)油包水乳化体系的制备：将乳化剂加入到油性溶剂中配成质量分数为1％～10％的油相乳化剂体系；按体积比1：1000～5的比例，将无细胞表达体系与油相乳化剂体系混合，搅拌得到油包水乳化体系；(2)蛋白表达：将步骤(1)获得的油包水乳化体系在4℃‑37℃，转速为320rpm～1120rpm搅拌5min～300min，得到含有表达蛋白的乳液滴。

【技术特征摘要】
1.一种简易微量化无细胞蛋白质快速合成的方法，其特征是包括如下步骤：(1)油包水乳化体系的制备：将乳化剂加入到油性溶剂中配成质量分数为1％～10％的油相乳化剂体系；按体积比1：1000～5的比例，将无细胞表达体系与油相乳化剂体系混合，搅拌得到油包水乳化体系；(2)蛋白表达：将步骤(1)获得的油包水乳化体系在4℃-37℃，转速为320rpm～1120rpm搅拌5min～300min，得到含有表达蛋白的乳液滴。2.根据权利要求1所述的方法，其特征是所述乳化剂为span20，span40，pan60，span80，聚乙二醇二聚羟基硬脂酸酯，泊洛沙姆F68，泊洛沙姆L65，泊洛沙姆PE3100，泊洛沙姆PE6100，泊洛沙姆PE6200，泊洛沙姆PE6400，泊洛沙姆PE6800，泊洛沙姆PE10100，泊洛沙姆PE10500，泊洛沙姆407，泊洛沙姆188，泊洛沙姆2000，鲸蜡基聚乙二醇90，鲸蜡基聚乙二醇180中的至少一种；所述油性溶剂为矿物油，石蜡油，二氯甲烷，石油醚，乙酸乙酯，丁醇，苯，四氯化碳，甲苯，丁酮，松香树脂和达玛树脂中的至少一种。3.根据权利要求1所述的方法，其特征是所述无细胞表达体系是将组合物1、组合物2和基因按体积比为(10-20):(20-30):1比例混匀制得；所述的组合物1按比例为1g:0.01～0.1mL:1～3mL包括细胞破碎产物、缓冲溶液1和缓冲溶液2；所述的组合物2按体积比为(2-8):(20-30):(2-5):1包括氨基酸混合液、反应缓冲液、能量补充液和浓度为5-150μg/mL的核糖核酸聚合酶水溶液。4.根据权利要求3所述的方法，其特征是基因的存在形式为基因组、质粒、带有目的基因的线性双链脱氧核糖核酸、单链脱氧核糖核酸片段和核糖核酸中的至少一种。5.根据权利要求3所述的方法，其特征是细...

【专利技术属性】
技术研发人员：仰大勇，韩金鹏，刘阳，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：天津,12