一种用于促进植物生长和病虫害防治的生物制剂制造技术
【技术实现步骤摘要】
一种用于促进植物生长和病虫害防治的生物制剂
本专利技术属于生物医药领域，具体而言，涉及一种用于促进植物生长和病虫害防治的生物制剂。
技术介绍
化肥和农药是提高作物产量和防治病虫害的主选产品，但同时产生了环境、能源以及成本等方面的问题，成为现在困扰世界各国的经济与社会发展的重大，严重制约着农业的可持续性发展。而利用来自微生物或真菌的蛋白质制备的生物制品(包括生物肥料和生物农药)是当代作物优质、高效和无公害生产的主要措施。近年来，国内外在此方面已开展了大量的科学研究。早期的微生物蛋白主要是来自苏云金芽孢杆菌的杀虫晶体蛋白(ICP),新型微生物蛋白主要是蛋白激发子类物质，目前研究报道的具有代表性的新型微生物蛋白主要有过敏蛋白(Harpin)、隐地蛋白(Cryptogein)和激活蛋白(Activator)，这些蛋白质不直接杀灭害虫和病原物，也不直接提供营养物质，而是在促进植物生长发育和对营养物质的吸收、增强植物的广谱抗病性(包括对多种细菌、真菌和病毒的抗性)、增强植物的驱虫性、增强植物的抗逆性(植物对干旱、严寒、盐碱等不良环境的耐受性)、延长作物产品的储存时间、对盆花和...
【技术保护点】
一种制备含有过敏蛋白(Harpin)的生物制剂的制备方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤，(1)菌种复苏及扩增；(2)发酵罐发酵；(3)发酵液处理；其中，步骤(1)所述的菌种复苏及扩增步骤为：取转化了过敏蛋白(Harpin)工作种子库菌种，待融化后扩增培养；步骤(2)所述的发酵罐发酵包括：1)菌种驯化；2)菌体扩增；3)诱导表达；步骤(3)所述的发酵液处理为：缓慢加入尿素至发酵液中，至尿素终浓度为8mol/L，调节溶液pH值至6～8，继续搅拌15～45分钟，冷却该液体组合物至2～8℃并保存。
【技术特征摘要】
1.一种制备含有过敏蛋白(Harpin)的生物制剂的制备方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤，(1)菌种复苏及扩增；(2)发酵罐发酵；(3)发酵液处理；其中，步骤(1)所述的菌种复苏及扩增步骤为：取转化了过敏蛋白(Harpin)工作种子库菌种，待融化后扩增培养；步骤(2)所述的发酵罐发酵包括：1)菌种驯化；2)菌体扩增；3)诱导表达；步骤(3)所述的发酵液处理为：缓慢加入尿素至发酵液中，至尿素终浓度为8mol/L，调节溶液pH值至6～8，继续搅拌15～45分钟，冷却该液体组合物至2～8℃并保存。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)的发酵过程的发酵参数为：基础培养基：蛋白胨1000份、酵母提取物500份、无水磷酸钠820份、磷酸二氢钠1080份、硫酸铵260份、氯化铵40份、甘油600份，硅油200份，纯化水200000份，卡那霉素终浓度为34μg/ml；补料培养基：蛋白胨4500份，酵母提取物2250份，甘油1500份，纯化水30000份；所述的菌种驯化的步骤为取扩增后的菌液，按接种浓度为5％接种于基础培养基中，加入灭菌后的硫酸镁溶液至硫酸镁的终浓度为0.4～0.6克/升(优选的，硫酸镁的终浓度为.55克/升)，37℃搅拌培养，控制溶氧为40-50％，pH7.0～7.4；发酵培养2-3h，溶氧曲线陡然上升至80％以上即为菌种驯化培养终点；所述的菌体扩增的步骤为：溶氧曲线陡然上升时开始添加补料培养基，37℃培养，控制溶氧40-50％，pH7.0～7.4，培养3-4小时，调节通气、搅拌和补料速度，培养过程中需不断增加通气量和搅拌速度，溶氧上升趋势趋于稳定时，即为菌种扩增终点，此时菌的浓度为25～40OD600；所述的诱导表达的步骤为：向培养物中加入乳糖溶液至乳糖终浓度为1g/L，继续添加含同样浓度乳糖的补料培养基，继续发酵，37℃培养，调节通气、搅拌和补料速度，控制溶氧40～50％，pH7.0～7.4，培养3～5小时，即为诱导表达终点。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述的菌种为通过基因工程的方法构建的含有表达过敏蛋白(Harpin)的质粒的大肠杆菌，所述的过敏蛋白包括但不限于，harpin...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘欣，胡业勤，刘军鹏，刘胜，朱德武，
申请(专利权)人：湖北胜苗生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42
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