一种三萜类成分和制备方法以及在缺血性心脏病治疗的应用技术

本发明专利技术公开了一种三萜类成分和制备方法以及在缺血性心脏病治疗的应用，三萜类成分为：3‑O‑α‑L‑吡喃阿拉伯糖基‑28‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖基坡摸酸酯；其制备方法为：取阔叶黄檀心材粉碎，用50%~70%乙醇加热回流提取多次，合并提取液，回收溶剂，浓缩至无醇味，得浸膏；加适量水于浸膏中分散，得到混悬液，用石油醚萃取，回收溶剂，分别得到石油醚萃取部位；石油醚萃取部位经硅胶柱色谱，用石油醚–乙酸乙酯梯度洗脱，得到12个流分，即Frs.1‑12；Fr.9经凝胶柱色谱，二氯甲烷‑甲醇洗脱，得到5个流分，即Fr.9.A‑E；将Fr.9.B流分经凝胶柱色谱纯化即得该成分。本发明专利技术具有成分富集效率高、节约药材、方法明晰简单等特点；同时该成分具有良好抗缺血性心脏病作用。

【技术实现步骤摘要】
一种三萜类成分和制备方法以及在缺血性心脏病治疗的应用
本专利技术涉及医药
，具体涉及一种三萜类成分和制备方法以及在缺血性心脏病治疗的应用。
技术介绍
随着我国人口老龄化速度与工作节奏加快，冠心病、心绞痛、急性心肌梗死及心律失常等缺血性心脏病已成为严重危害老年人群与亚健康工作人群的一类高发病。在这些缺血性心脏病发展过程中多伴有心肌细胞损伤，进而发生细胞凋亡、钙超载等，引起心血管功能紊乱。本专利技术前期从阔叶黄檀(Dalbergialatifolia)中首次分离得到三萜类化学成分3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖基-28-O-β-D-吡喃葡萄糖基坡摸酸酯的基础上，证明其可通过减少自由基对细胞损伤从而保护心肌，达到治疗缺血性心脏病的目的。然而，到目前为止，该植物三萜类化学成分研究，仅有β-谷甾醇和乙酰齐墩果酸两个成分报道，加之，该类成分在抗缺血性心脏病相关药理学研究方面尚未见报道。本专利技术可为今后开发抗缺血性心脏病药物及阔叶黄檀植物资源的综合利用提供依据。
技术实现思路
针对上述技术现状和存在问题，本专利技术的目的是提供一种三萜类成分和制备方法以及在缺血性心脏病治疗的应用以及在缺血性心脏病治疗的应用，为阔叶黄檀植物资源高效利用与该成分抗缺血性心脏病的应用提供支持。为达到上述专利技术目的，本专利技术的技术方案是：一种三萜类成分，其特征是，其成分为：3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖基-28-O-β-D-吡喃葡萄糖基坡摸酸酯；其化学式为：上述的三萜类成分的制备方法，其特征是，其制备方法及步骤为：(1)取阔叶黄檀心材，粉碎，用50％～70％乙醇加热回流提取1～5次，每次1～5h，合并提取液，回收溶剂，浓缩至无醇味，得浸膏；(2)加适量水于浸膏中分散，得到混悬液，用石油醚萃取，回收溶剂，分别得到石油醚萃取部位；(3)石油醚萃取部位经硅胶柱色谱，用石油醚–乙酸乙酯梯度洗脱，得到12个流分，即Frs.1-12；(4)Fr.9经凝胶柱色谱，二氯甲烷-甲醇洗脱，得到5个流分，即Fr.9.A-E；(5)将Fr.9.B流分经凝胶柱色谱纯化得到化合物:3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖基-28-O-β-D-吡喃葡萄糖基坡摸酸酯。其核磁数据如下：化合物黄色粉末，ESI-MSm/z:734.20[M+H]+。1H-NMR(600MHz，CDCl3)δ3.13(1H，dd，J＝11.5，4.1Hz，H-3)，1.98(2H，m，H-11)，5.30(1H，t，J＝5.9Hz，H-12)，2.58(1H，dd，J＝13.3，9.3Hz，H-16A)，0.97(3H，s，H-23)，0.77(3H，s，H-24)，1.03(3H，s，H-25)，0.83(3Hs，H-26)，1.31(3H，s，H-27)，1.19(3H，s，H-29)，0.93(3H，d，J＝5.3Hz，H-31)，4.27(1H，d，J＝6.7Hz，H-Arabinose-1')，3.52(1H，dd，J＝9.4，4.4Hz，H-Arabinose-3')，3.81(1H，dd，J＝19.2，6.9Hz，H-Arabinose-5'A)，3.52(1H，dd，J＝9.4，4.4Hz，H-Arabinose-5'B)，5.33(1H，d，J＝8.1Hz，H-Glucose-1')，3.33(1H，ddd，J＝11.8，5.2，4.4Hz，H-Glucose-5')，3.81(1H，dd，J＝19.2，6.9Hz，H-Glucose-6'A)，3.66(1H，dd，J＝12.0，3.8Hz，H-Glucose-6'B)；13C-NMR(151MHz，CDCl3)δ38.76(C-1)，5.64(C-2)，89.40(C-3)，39.82(C-4)，55.57(C-5)，18.03(C-6)，32.70(C-7)，41.17(C-8)，36.42(C-10)，23.25(C-11)，128.31(C-12)，138.10(C-13)，41.49(C-14)，28.24(C-15)，25.62(C-16)，53.50(C-18)，71.37(C-19)，41.49(C-20)，25.64(C-21)，38.42(C-22)，27.15(C-23)，15.57(C-24)，14.57(C-25)，16.17(C-26)，23.29(C-27)，177.21(C-28)，25.77(C-29)，15.20(C-30)，105.72(3-Arabinose，C-1')，72.25(C-2`)，72.87(C-3')，68.11(C-4')，65.00(C-5')，94.33(28-Glucose，C-1')，72.39(C-2')，76.79(C-3')，69.63(C-4')，77.13(C-5')，60.94(C-6')。进一步地，本专利技术还特别对上述的三萜类成分在治疗缺血性心脏病的应用进行了研究和实验验证，主要通过该成分对结扎左冠状动脉所致心肌缺血大鼠的影响的实验验证，证明该成分对心肌缺血损伤心肌具有显著的保护作用，治疗缺血性心脏病应用效果明显。具体药效试验如下：(一)对大鼠H9c2心肌细胞缺氧损伤的影响1.实验方法1.1细胞培养体外培养H9c2心肌细胞，培养液为DMEM(高糖)+10％FBS+0.1％双抗。取对数生长期的细胞置于96孔细胞培养板上，恒温培养36h后，分组处理。1.2缺氧模型制备取培养72h的H9c2心肌细胞去掉原培养基，换用无糖无血清DMEM培养基后放入缺氧箱，充入混合气体(5％CO2+95％N2)，调节氧浓度为0以达到缺氧，将缺氧箱放入37℃培养箱中培养。1.3分组处理①正常组:培养板用PBS冲洗2次后换用高糖无胎牛血清的DMEM培养液，置于37℃5％CO2培养箱中持续培养16h。②缺氧模型组：用PBS冲洗2次后换用无糖无胎牛血清的DMEM培养液，放入缺氧箱中充入混合气体(5％CO2+95％N2)，调节氧浓度为0以达到缺氧，将缺氧箱放入37℃培养箱中密闭培养16h。③给药组：将含该成分的培养基(终浓度为50、10、2g·ml-1)作用2h，用PBS冲洗2次后换用无糖无胎牛血清的DMEM培养液配制的不同浓度的药物及阳性药N-乙酰半胱氨酸(0.08g·ml-1)，放入缺氧箱中充入混合气体(5％CO2+95％N2)，调节氧浓度为0以达到缺氧，将缺氧箱放入37℃培养箱中密闭培养16h。1.4指标测定①采用MTS法测定细胞活力②乳酸脱氢酶(LDH)活力测定：取各组样本细胞培养液上清液，按照试剂盒操作说明书，在490nm处测定乳酸脱氢酶(LDH)的活性。2.实验结果如表1-1，1-2所示，细胞缺氧16h后，与正常组比较，缺氧模型组存活率明显降低，LDH漏出量明显升高；药物的2、10、50g·ml-1提高了细胞存活率，有显著差异，其余浓度没有统计学意义。以上结果提示该药物对细胞缺氧损伤具有保护作用。表1-1对缺氧导致H9c2心肌细胞存活率的影响表1-2对缺氧导致H9c2心肌细胞LDH活性的影响注：与模型组比较，**P<0.01,***P<0.001(二)对结扎左冠状动脉所致心肌缺血大鼠的影响1.实验方法1.1分组SD大鼠随机分为空白组、模型组、药物低剂量(10mg·kg-1)组、中剂本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种三萜类成分，其特征是，其成分为：3‑O‑α‑L‑吡喃阿拉伯糖基‑28‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖基坡摸酸酯；其化学式为：

【技术特征摘要】
1.一种三萜类成分，其特征是，其成分为：3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖基-28-O-β-D-吡喃葡萄糖基坡摸酸酯；其化学式为：2.基于权利要求1所述的三萜类成分的制备方法，其特征是，其制备方法及步骤为：(1)取阔叶黄檀心材，粉碎，用50％～70％乙醇加热回流提取1～5次，每次1～5h，合并提取液，回收溶剂，浓缩至无醇味，得浸膏；(2)加适量水于浸膏中分散，得到混悬液，用石油醚萃取，回收溶剂，分别得到石油...

【专利技术属性】
技术研发人员：邵峰，权赫秀，刘荣华，陈兰英，张普照，王定清，梅丹仪，唐芳瑞，黄慧莲，孟晓伟，
申请(专利权)人：江西中医药大学，
类型：发明
国别省市：江西,36