检测白血病二氢叶酸还原酶融合基因的方法、引物及试剂盒技术

本发明专利技术提供了引物对和探针组合，本发明专利技术还提供了所述的引物对和探针组合在筛选治疗白血病的药物中的应用；本发明专利技术同时还提供了含有该引物对和探针组合的试剂盒及应用，以及基于引物对和探针组合或试剂盒的筛选治疗白血病的药物的方法和系统。经实验证明，本发明专利技术的引物对和探针组合特异性好、灵敏度高、检测效率高，且基于该引物对和探针组合建立的二氢叶酸还原酶融合基因和GAPDH内参基因的双重荧光PCR方法重复性好、高通量、灵敏、准确和快速，为白血病的用药筛选及预后判定提供了更有效的方法。

Methods, fusion leukemia dihydrofolate reductase gene detection primer and kit

The present invention provides a primer and probe combination, the invention also provides the application of the primer and probe combinations in the treatment of leukemia in drug screening; the invention also provides a primer and probe containing the combination of kit and application, and based on the method and system for drug screening and primers for treatment of leukemia a probe or a combination of the kit. The experiment proved that the invention of the primer and probe combination has good specificity and high sensitivity, high detection efficiency, and based on the dual fluorescence PCR method of dihydrofolate reductase which primer and probe set fusion gene and GAPDH gene of repeatability, high-throughput, sensitive, accurate and rapid, the more effective method the decision to provide drug screening and prognosis of leukemia.

【技术实现步骤摘要】
检测白血病二氢叶酸还原酶融合基因的方法、引物及试剂盒
本专利技术涉及生物检测领域，特别涉及检测白血病二氢叶酸还原酶融合基因的方法、引物及试剂盒。
技术介绍
白血病是一类造血干细胞恶性克隆性疾病，由于克隆的白血病细胞在骨髓和其它造血组织中大量增殖累积，使正常造血功能受到抑制，同时浸润其它组织和器官。白血病主要表现有白血病细胞的增生与浸润。非特异性病变则为出血及组织营养不良和坏死、继发感染等。白血病细胞的增生和浸润主要发生在骨髓及其他造血组织中，也可出现在全身其它组织中，致使正常的红系细胞、巨核系细胞显著减少。骨髓中可因某些白血病细胞增生明显活跃或极度活跃，而呈灰红色或黄绿色。淋巴组织也可被白血病细胞浸润，后期则淋巴结肿大，部分白血病患者有明显中枢神经系统白血病改变，或者为血管内白细胞郁滞、血管周围白细胞增生。最易发生白血病浸润的脏器是肾、肺、心脏及胸腺、睾丸等，临床表现为贫血、出血、感染以及肝、脾、淋巴结肿大和骨骼疼痛。既往细胞形态学分型的诊断符合率及正确率受检测者主观成分影响较大，近两年白血病分子特征的研究取得了明显进展，尤其是对染色体易位形成融合基因，有一些已作为诊断不同类型白血病本文档来自技高网...

【技术保护点】
引物对和探针组合，其特征在于，包括两组引物对和两条探针；所述两组引物对包括第一引物对和第二引物对；所述两条探针包括第一探针和第二探针，所述第一探针与第一引物对相对应，所述第二探针与第二引物对相对应；所述第一引物对包含SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列，所述第一探针包含SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列；所述第二引物对包含SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5所示的核苷酸序列，所述第二探针包含SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列。

【技术特征摘要】
1.引物对和探针组合，其特征在于，包括两组引物对和两条探针；所述两组引物对包括第一引物对和第二引物对；所述两条探针包括第一探针和第二探针，所述第一探针与第一引物对相对应，所述第二探针与第二引物对相对应；所述第一引物对包含SEQIDNO：1和SEQIDNO：2所示的核苷酸序列，所述第一探针包含SEQIDNO：3所示的核苷酸序列；所述第二引物对包含SEQIDNO：4和SEQIDNO：5所示的核苷酸序列，所述第二探针包含SEQIDNO：6所示的核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的引物对和探针组合在筛选治疗白血病的药物中的应用。3.一种试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物对和探针组合。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包括荧光定量PCR扩增试剂；任选的，所述荧光定量PCR扩增试剂包括来自Roche公司的货号为#6402682001的FastStartEssentialProbesMaster试剂盒中的试剂FastStartEssentialProbesMasterMix(2×)。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，还包括总RNA提取试剂；任选的，所述总RNA提取试剂包括红细胞裂解液、TRIZOL、氯仿、异丙醇和乙醇中的至少一种；任选的，还包括逆转录试剂；任选的，所述逆转录试剂包括来自北京全式金生物技术有限公司的货号为AU311-03的TransScript-UniOne-StepgDNARemovalandcDNASynthesisSuperMixKit中所包含的试剂。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，还包括阳性对照、阴性对照和空白对照；任选的，所述阳性对照为含有二氢叶酸还原酶融合基因和GAPDH内参基因的溶液；所述阴性对照为不含二氢叶酸还原酶融合基因但含有GAPDH内参基因的溶液；所述空白对照为生理盐水或去离子水。7.权利要求3至6中任一项所述的试剂盒在筛选治疗白血病的药物中的应用。8.一种筛选治疗白血病的药物的方法，其特征在于，包括：提取从白血病患者分离出的生物样品中的核酸样本；采用权利要求1所述的引物对和探针组合对所述核酸样本进行荧光定量PCR反应；以及基于荧光定量PCR反应的结果，判断所述白血病患者对应的药物治疗是否适用；任选的，所述提取所述生物样品中的核酸样本是从生物样品中提取RNA样本，然后对所述RNA样本进行逆转录反应，以便获得cDN...

【专利技术属性】
技术研发人员：马东礼，刘孝荣，麦惠容，蔡德丰，肖伟伟，曹科，姜含芳，
申请(专利权)人：深圳市儿童医院，
类型：发明
国别省市：广东,44