一种盐酸帕洛诺司琼光学异构体的拆分试剂及分离检测方法技术

本发明专利技术公开了一种盐酸帕洛诺司琼光学异构体的拆分试剂及分离检测方法，光学异构体包括盐酸帕洛诺司琼及其RS异构体、RR异构体、SR异构体，采用液相色谱法，液相色谱法的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇‑水，其中添加有有效浓度的异戊醇和草酸。流动相中异丙醇的体积百分浓度为0.4‑0.8％，草酸的质量体积浓度0.4‑0.6g/L，添加在甲醇或水中，或甲醇‑水的混合溶剂中。使用本发明专利技术提供的方法在普通C18色谱柱上即可实现盐酸帕洛诺司琼光学异构体的有效分离，应用成本显著降低，可以节省大量色谱柱耗材费用。

【技术实现步骤摘要】
一种盐酸帕洛诺司琼光学异构体的拆分试剂及分离检测方法
本专利技术属于药物分析领域，涉及手性异构体分离检测，具体涉及一种盐酸帕洛诺司琼光学异构体的拆分试剂及分离检测方法。
技术介绍
盐酸帕洛诺司琼是由瑞士MGIPharma及HelsinnHealthcare公司研制开发的高效、高选择性的5-HT3受体拮抗剂，于2003年7月首先在美国获准上市，临床上用于放、化疗所致的急性和延迟性恶心、呕吐。因其具有疗效高、毒副作用小、半衰期长、用药剂量小等特点而备受关注(Palonosetronforthepreventionofchemotherapy-inducednauseaandvomiting:approvalandefficacy,CancerManagRes,2009)。盐酸帕洛诺司琼结构中存在2个手性碳，可产生4个异构体(如下式所示)。盐酸帕洛诺司琼与受体的亲和力几乎是其他5-HT拮抗剂的100倍，在药品测定过程中检测并控制其他3个异构体的含量非常有意义(Recentprogressinstudiesonchromatographicmethodforanalysisoftherelatedimpuritiesindrugs,ProgrPharmSci,2009)。已有文献报道采用Kromosil手性柱进行盐酸帕洛诺司琼与异构体的分离，但没有包括所有异构体，也未指明异构体归属(校正因子法测定盐酸帕洛诺司琼异构体的含量，中国药业，2008)。于晓蓉等采用ChiralAD-H手性色谱柱法进行本产品异构体的分离测定，但无法将RR异构体与RS异构体分离(盐酸帕洛诺司琼光学异构体的手性HPLC检查，中国新药杂志，2008)。潘红娟等采用正相高效液相色谱法测定盐酸帕洛诺司琼注射液中RS异构体的含量，只能将4个对映体两两分离(盐酸帕洛诺司琼注射液中异构体含量的NP-HPLC测定，中国医药工业杂志，2009)。使用β-环糊精型手性分离色谱的区带电泳法也可以应用于本产品的异构体分析，但是电泳法存在灵敏度低、载样量有限的缺点(Enantioseparationofpalonosetronhydrochloridebycapillaryzoneelectrophoresiswithhigh-concentrationbeta-CDaschiralselector,AnalSci,2009)。Tian等以胆酸钠作为手性选择剂用毛细管电泳的胶束电动色谱法对盐酸帕洛诺司琼光学异构体进行了拆分，但是由于灵敏度低、载样量有限，未能用于光学异构体杂质的限度检查(Enantioseparationofpalonosetronhydrochloridebymicellarelectrokineticchromatographywithsodiumcholateaschiralselector,JChromatogrA,2006)。目前，公开的文献中，对上述四个光学异构体分离效果最好的应属于齐鲁制药有限公司药物研究院赵慧英等的研究(盐酸帕洛诺司琼3个光学异构体的分离与测定，药物分析杂志，2012)，作者采用ASTECCHIROBIOTICT手性液相色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，以甲醇-冰醋酸-三乙胺(100：0.5：0.3)为流动相，方法专属性好、精密度高，适用于盐酸帕洛诺司琼异构体的测定。但是，该方法至少存在以下两点不足：第一，分离度有待提高：盐酸帕洛诺司琼与RS异构体的分离度为2.6，RS异构体与SR异构体分离度为1.2，SR异构体与RR异构体分离度为1.0，RS异构体与SR异构体分离度、SR异构体与RR异构体分离度均小于1.5，不理想；第二，成本高：上述手性色谱柱一根至少万元，且手性色谱柱使用寿命短，一个项目做下来，光色谱柱消耗的费用就要十几二十万，增加了研发成本。上述文献作者指出，普通色谱柱可以有效地检测盐酸帕洛诺司的含量和非异构体有关物质，但对于结构类似异构体的检测尚缺乏有效的分析手段。但是，普通色谱柱的成本非常低，国产普通反相高效液相色谱柱一根仅需一两千元，一个项目按消耗20根色谱柱计，色谱柱的成本也就3-4万。因此，开发一种基于普通色谱柱的分离检测方法非常有价值。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种盐酸帕洛诺司琼光学异构体的拆分试剂及分离检测方法，以在普通C18色谱柱上实现盐酸帕洛诺司琼光学异构体的有效分离。本专利技术通过下面的技术方案得以实现：一种盐酸帕洛诺司琼光学异构体的分离检测方法，光学异构体包括盐酸帕洛诺司琼及其RS异构体、RR异构体、SR异构体，采用液相色谱法，液相色谱法的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇-水，其中添加有有效浓度的异戊醇和草酸。优选地，流动相中异丙醇的体积百分浓度为0.4-0.8％，草酸的质量体积浓度0.4-0.6g/L，添加在甲醇或水中，或甲醇-水的混合溶剂中。优选地，所述流动相包括甲醇有机相和水相，两相分别添加异丙醇和草酸后经液相色谱仪的泵按比例混合洗脱。优选地，所述的分离检测方法包括如下色谱参数：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶(C18)色谱柱；流动相：A相为含有异丙醇和草酸的水，异丙醇体积百分浓度为0.6％，草酸浓度为0.5g/L；B相为含有异丙醇和草酸的甲醇，异丙醇体积百分浓度为0.6％，草酸浓度为0.5g/L；洗脱程序：0-5min，5％B相；5-10min，5％→25％B相；10-12min，25％→38％B相；12-25min，38％B相；流速为0.8mL/min；柱温：18-22℃；检测波长：238-242nm。优选地，柱温为20℃。优选地，检测波长为240nm。优选地，所述色谱柱的规格为长250mm，内径4.6mm，填料粒径5μm。优选地，色谱柱为ZORBAXSB-C18柱。异戊醇和草酸联合用于反相高效液相色谱分离盐酸帕洛诺司琼光学异构体中的应用，光学异构体包括盐酸帕洛诺司琼及其RS异构体、RR异构体、SR异构体。本专利技术的优点：使用本专利技术提供的方法在普通C18色谱柱上即可实现盐酸帕洛诺司琼光学异构体的有效分离，应用成本显著降低，可以节省大量色谱柱耗材费用。附图说明图1为盐酸帕洛诺司琼与RS异构体、SR异构体、RR异构体的化学结构式比较；图2为分离度测定溶液的液相色谱图，配制盐酸帕洛诺司琼与RS异构体、SR异构体、RR异构体的混合溶液，盐酸帕洛诺司琼浓度约为1mg/mL，异构体浓度约为20μg/mL；图3为RS异构体、SR异构体和RR异构体回归曲线和回归方程，该浓度范围线性良好；图4为RS异构体、SR异构体、RR异构体混合对照品的液相色谱图，浓度约为10μg/mL；图5为盐酸帕洛诺司琼原料药供试品溶液的液相色谱图，检出RS异构体，其他异构体均未检出，分离度良好；图6为常规甲醇-水流动相对分离度测定溶液的分离效果图。具体实施方式下面结合具体实施例进一步介绍本专利技术的技术方案。实施例1盐酸帕洛诺司琼中光学异构体的测定一、实验材料岛津LC-20A高效液相色谱仪；CPA225D电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；色谱柱：ZORBAXSB-C18柱(安捷伦)；盐酸帕洛诺司琼原料药购于齐鲁制药有限公司，盐酸帕洛诺司琼、RR、SR、RS对照品购于昆明积本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种盐酸帕洛诺司琼光学异构体的分离检测方法，光学异构体包括盐酸帕洛诺司琼及其RS异构体、RR异构体、SR异构体，采用液相色谱法，液相色谱法的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，其特征在于：流动相为甲醇‑水，其中添加有有效浓度的异戊醇和草酸。

【技术特征摘要】
1.一种盐酸帕洛诺司琼光学异构体的分离检测方法，光学异构体包括盐酸帕洛诺司琼及其RS异构体、RR异构体、SR异构体，采用液相色谱法，液相色谱法的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，其特征在于：流动相为甲醇-水，其中添加有有效浓度的异戊醇和草酸。2.根据权利要求1所述的分离检测方法，其特征在于：流动相中异丙醇的体积百分浓度为0.4-0.8％，草酸的质量体积浓度0.4-0.6g/L，添加在甲醇或水中，或甲醇-水的混合溶剂中。3.根据权利要求2所述的分离检测方法，其特征在于：所述流动相包括甲醇有机相和水相，两相分别添加异丙醇和草酸后经液相色谱仪的泵按比例混合洗脱。4.根据权利要求3所述的分离检测方法，其特征在于，包括如下色谱参数：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶(C18)色谱柱；流动相：A相为含有异丙醇和草酸的水，异丙醇体积百分浓度为0.6％，草酸浓度为0.5g/L；B相为含...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈云，陈昊，王斌，
申请(专利权)人：南京普氟生物检测技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32