本发明专利技术涉及一种用高效液相色谱法对盐酸帕洛诺司琼及其光学异构体进行分离和含量测定的方法，其特征在于，高效液相色谱法中使用的色谱柱填料是大环糖肽替考拉宁键合硅胶，流动相由三乙胺水溶液和有机溶剂组成。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种，具体涉及用高效液相色谱法对盐酸帕洛诺司琼及它的另三个光学异构体进行分离和含量测定的方法。
技术介绍
盐酸帕洛诺司琼(化学名(3aS)-2-辛-3-基]-2， 3, 3a, 4, 5， 6_六氢-l-氧-lH-苯并异喹啉盐酸盐)是一种药物，对5-HT3受体有更强的结合力，临床上用于预防在实施中度或高度致呕吐性化疗方案时所引起的急性和迟发性呕吐。由于盐酸帕洛诺司琼含有两个手性中心，除(3aS, S型)盐酸帕洛诺司琼外，还存在其他三个光学异构体(3aR， S)、 (3aS， R)、 (3aR， R)，而此三个异构体无上述药物活性。所以，盐酸帕洛诺司琼与其他三个光学异构体的分离，对盐酸帕洛诺司琼质量的控制具有非常重要的意义。而且在制药的实践中，往往还需要测定盐酸帕洛诺司琼原料药和制剂中有效成分的含量，或者需要测定作为杂质的其它三种异构体的含量。而使用常用填料色谱柱的色谱方法不能将盐酸帕洛诺司琼与异构体(3aS， S)分离，因色谱峰完全重叠不能分离；常用填料色谱柱也不能在其它异构体间进行分离，如异构体(3aS， R)和(3aR， S)色谱峰也完全重叠，不能分离。更不可能分别测定几种异构体的含量。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种对盐酸帕洛诺司琼光学异构体进行分离的方法。本专利技术另一目的是提供对盐酸帕洛诺司琼及它的三种光学异构体含量测定的方法。本专利技术提供了一种用高效液相色谱法对盐酸帕洛诺司琼光学异构体进行分离和含量测定的方法，其特征在于高效液相色谱法中使用的色谱柱填料是大环糖肽替考拉宁(Teicoplanin)键合硅胶，流动相由三乙胺水溶液和有机溶剂组成，所述有机溶剂是低级醇、低级腈或杂环化合物，优选甲醇、乙腈、乙醇、丙醇或四氢呋喃中的一种或多种。所述的三乙胺水溶液中三乙胺的浓度为0.1%~2%，优选浓度为0.1%—0.5%。所述三乙胺水溶液和有机溶剂的比例(V/V)为20% 40% : 60% 80%。3所述三乙胺水溶液优选pH为3.5~4.5。可用稀酸调节pH，可选用的稀酸调节剂可以 是有机酸或无机酸，其中有机酸的PKa小于6.0，无机酸指中强酸。在本专利技术的一个实例中，用大环糖肽替考拉宁(Teicoplanin)键合硅胶为填充剂(色 谱柱CHIROBIOTICT4.6X250mm 5pm);以0.3%三乙胺(冰醋酸调节pH4.0)-甲醇(30: 70)为流动相；检测波长为249nm。取(3aS,S) ， GaR,S)， (3aS,R) , (3aR，R)混旋体适 量，加流动相溶解并稀释成每lml约0.2mg的溶液，按上述色谱条件进样2(Hd，记录色谱 图。按出峰顺序，峰l为(3aS,S)、峰2为(3aR，S)、峰3和峰4为(3aS,R) , (3aR,R)混旋 体的两个组分。理论板数按(3aS， S)计算不低于4000，盐酸帕洛诺司琼峰和相邻异构 体的分离度应不低于1.0。用本专利技术的方法不仅可将盐酸帕洛诺司琼与其它光学异构体进行分离，还能够定量测 定盐酸帕洛诺司琼(3aS， S)的含量，以及其它三种光学异构体(3aR， S)、 GaS， R) 和(3aR， R)的含量。实施例l给出了有效成分盐酸帕洛诺司琼(3aS， S)及三种光学异构体分离的研究， 并对这4种光学异构体进行定性。其中(3aR, S)、 (3aS， R)、 (3aR， R)三种光学异构体 杂质，作为杂质整体进行计算，即计算出盐酸帕洛诺司琼中其它光学异构体含量总和。附图说明图1是(3aS， S)构型的高效液相色谱图图2是(3aS， S)， (3aR， S)混旋体的高效液相色谱图图3是(3aS， R)， (3aR， R)混旋体的高效液相色谱图图4是(3aS， S)， (3aR, S)， (3aS， R)， (3aR， R)混合的高效液相色谱图图5是收集组分一的高效液相色谱图图6是收集组分二的高效液相色谱图图7是组分一 MS图图8是组分二 MS图图9是组分一 MS2图图10是组分二 MS2图图11是该色谱系统对本品检测限的高效液相色谱图 具体实施例方式下面以示例进一步解释本专利技术，但是本专利技术的保护范围并不限于这些实施例中所使用 的色谱分离的流动相、流动相的组成和使用的色谱分离柱及色谱分离柱的填料。实施例1四种光学异构体的色谱、质谱和检测限基础研究 实验仪器和条件a、 HPLC (高效液相色谱)条件仪器SHIMADZULC-2010AHT (日本岛津)检测器UV流动相0.3%三乙胺(冰醋酸调节pH4.0)-甲醇(30: 70) 色谱柱CHIROBIOTIC T 4.6X250mm 5um 流速1,0ml/min 检测波长249nm 色谱工作站LCsolutionb、 MS (质谱)条件MS仪器API3000 (美国生物应用工程公司)Ion Source: Turbo SprayIon Source Gasl(GSl): 4.0Curtain gas :10.0Ion Source Gas2(GS2): 0.0DP: 60.0EP: 12.0IS: 5500.00方法研究 a、 LC定性取已经过结构确证的(3aS,S)适量，加流动相溶解并稀释成每lml约含0.1mg的溶液， 按上述色谱条件进样20yl，记录色谱图(图l)。取(3aS，S) , (3aR,S)混旋体适量，加流动相溶解并稀释成每lml约0.2mg的溶液，按 上述色谱条件进样20ul，记录色谱图(图2)。取(3aS,R) , GaR,R)混旋体适量，加流动相溶解并稀释成每lml约0.2mg的溶液，按 上述色谱条件进样20ul，记录色谱图(图3)。另取(3aS,S) , (3aR,S)， (3aS，R) , (3aR,R)混旋体适量，加流动相溶解并稀释成每 lml约0.2mg的溶液，按上述色谱条件进样20ul，记录色谱图(图4)。由上述色谱图可知，在该色谱系统中(3aS,S)盐酸帕洛诺司琼和其他三个异构体分离 良好。出峰位置分别是峰l为(3aS,S)峰、峰2为(3aR,S)峰、峰3和峰4为(3aS，R) , (3aR,R) 混旋体的两个组分峰。b、 MS定性用质谱对(3aS,R)和(3aR,R)异构体进行定性。取(3aS,R) , (3aR,R)混旋体适量，加流动相溶解并稀释成每lml约含本品0.5mg的 溶液，按上述HPLC条件进样50ul，分别收集两组分峰，将两组分峰溶液分别浓縮后按 上述相同的HPLC条件进样50ul，记录色谱图(图5， 6)。与图3比较可知，收集到的 溶液在该色谱系统中出峰位置与(3aS,R)、 (3aR,R)混旋体的两个出峰位置一致。与图谱4 比较可知收集的溶液在该色谱系统中出峰位置与图中峰3、峰4位置一致。分别取收集的两组分溶液按上述质谱条件进行MS分析(图7、 8)，两图中均有与 (3aS,S)盐酸帕洛诺司琼相同的峰。为了使专一性更强，取该两组分的溶液作了 MS2分析(图9、 10)， MS2图均与(3aS,S)盐酸帕洛诺司琼MS2图相同。说明该两组分 均有与(3aS，S)盐酸帕洛诺司琼相同分子量的物质，可确定该两组分为(3aS，R)和(3aR，R) 两个光学异构体。c、 检测限取盐酸帕洛诺司琼对照品适量，精密称定，加流动相溶解并本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用高效液相色谱法对盐酸帕洛诺司琼及其光学异构体进行分离和含量测定的方法，其特征在于，色谱柱使用的填料是大环糖肽替考拉宁键合硅胶，流动相由三乙胺水溶液和有机溶剂组成；所述有机溶剂是低级醇、低级腈或杂环化合物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨平，
申请(专利权)人：重庆华邦制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：85[中国|重庆]
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