一种从蓝靛果中快速高效提取纯化花色苷的方法技术

本发明专利技术涉及一种从蓝靛果中快速高效提取纯化矢车菊素‑3‑O‑葡萄糖苷的方法，所采取的技术方案是：以蓝靛果提取物为原料，采取高速匀质破碎酶解技术、负压空化强化提取技术、低温絮凝沉降技术、中压快闪反相柱层析技术及重结晶技术等得到精制的矢车菊素‑3‑O‑葡萄糖苷，纯度可达95％以上。本发明专利技术方法绿色环保，步骤少，耗时短，目标化合物的损失少，产品得率和纯度都很高，适合于规模化生产，具有较高的经济价值。

From a EELC rapid and efficient method for extracting and purifying anthocyanins

The invention relates to a method for the rapid and efficient extraction and purification of EELC cyanidin 3 O glucoside, which adopts the technical proposal that: the extract of Lonicera edulis as raw material, adopt high-speed homogeneous crushing enzyme technology, vacuum cavitation extraction technology, enhanced flocculation technology, low temperature medium voltage flash by reversed-phase column chromatography technology and recrystallization technology refined cyanidin 3 O glucoside, reached a purity of more than 95%. The method has the advantages of green environment protection, less steps, short time consumption, less loss of the target compound, high yield and purity of the product, and is suitable for large-scale production, and has high economic value.

【技术实现步骤摘要】
一种从蓝靛果中快速高效提取纯化花色苷的方法
本专利技术涉及一种从蓝靛果中提取纯化功能性有效成分花色苷的方法，具体是从蓝靛果中快速高效提取纯化矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的方法。
技术介绍
蓝靛果(LoniceracaeruleaL.)为忍冬科忍冬属，多年生落叶小灌木。具有清热解毒、稳定血压、改善肝脏的解毒功能、抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗疲劳、调节免疫、保护视力、促进身体良好发育等功效。蓝靛果果实中富含花色苷类化合物，花色苷是一种广泛存在于植物中的水溶性天然色素，是花青素与糖以糖苷键结合而成的一类化合物，结构母核是3,5,7-三羟基-2-苯基苯并吡喃阳离子。其安全、无毒、营养价值高、并且还具有清除自由基、改善视力、预防和治疗心血管疾病等一系列的药理作用，在食品、保健品、化妆品、医药等领域具有很大的开发应用潜力。近年来，人工合成花色苷的途径比较复杂，且存在成本高、安全性低等特点，因此，从植物中提取、纯化花色苷已经成为当今研究的热点，富含花色苷的蓝靛果也成为学者们研究天然花色苷的重要原料之一。我国一般用有机溶剂提取法，超声波提取法和超临界流体萃取技术等。传统的有机溶剂提取法提取时间长，得率低；而超临界流体萃取花色苷，又存在投资大，能耗大等缺点。本专利技术的不同之处在于探究了一条经济、有效、绿色的提取和纯化蓝靛果花色苷的技术，不仅得率高,而且纯度高，促进了我国蓝靛果的资源深度开发和高效利用。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种简单、绿色、快速、高效、低成本、高收率，从蓝靛果中提取分离纯化矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的熟化路线。为实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案如下：一种从蓝靛果中快速高效提取纯化花色苷的方法，其特征在于按如下工艺步骤进行：A.高速匀质破碎酶解蓝靛果原料：新鲜的蓝靛果按质量体积比加入3～8倍原料质量的水进行高速匀质破碎5～10min，用冰醋酸或柠檬酸调节浆液pH为3.5～5.5，加入纤维素酶、果胶酶或两者组成的复合酶使酶浓度为300～700U/mL，然后在35～50℃条件下酶解2～5h，过滤，收集滤液、滤渣；B.负压空化强化提取蓝靛果滤渣：上述滤渣按质量体积比加入10～20倍滤渣质量的乙醇或醇水混合溶液进行负压空化强化提取，提取温度为25～40℃，提取压力为-0.04～-0.08MPa，提取2～4次，每次30～60min，合并提取液与步骤A所得滤液，减压除去2/3溶液。C.低温絮凝沉降蓝靛果浓缩滤液：上述浓缩滤液中加入50％～70％的乙醇配置饱和溶液后搅拌均匀，置于0～8℃下放置24～48h，分离得到上清液和沉淀，再将沉淀在35～50℃下减压干燥，得富集物。D.中压快闪反相柱层析分离矢车菊素-3-O-葡萄糖苷：上述低温絮凝沉降富集物加入20％甲醇至刚好溶解后进行中压快闪反相色谱柱层析。其中柱填料为ODS-C18反相硅胶：上样体积为柱体积的1/12～1/5；等度洗脱选用的洗脱剂为20％甲醇，洗脱流速为20～35mL/min，然后在检测波长520nm下进行HPLC的检测，合并相同流份，减压浓缩至干，得到矢车菊素-3-O-葡萄糖苷单体。E.矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的结晶：矢车菊素-3-O-葡萄糖苷单体用50％～70％的乙醇反复重结晶得到纯度可达95％的矢车菊素-3-O-葡萄糖苷。本专利技术具有如下优点：1.本专利技术对蓝靛果资源进行高效合理的利用，产品的附加值高。2.采用高速匀质破碎酶解技术、负压空化强化提取技术、低温絮凝沉降技术、中压快闪反相柱层析技术及重结晶技术等用于矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的提取分离，所得产品得率高、纯度高。3.该方法绿色环保，步骤少，耗时短，耗能低，成本低，操作简便，适合大规模化生产。附图说明图1为矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的结构图2为花色苷的HPLC色谱图(A)矢车菊素-3-O-葡萄糖苷标准品HPLC色谱图(B)蓝靛果粗提物HPLC色谱图(C)纯化后HPLC色谱图图3为矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的二级质谱图具体实施方式：实例1一种从蓝靛果中快速高效提取纯化花色苷的方法，按如下工艺步骤进行：A.高速匀质破碎酶解蓝靛果原料：1kg新鲜的蓝靛果5L的水进行高速匀质破碎6min，用柠檬酸调节浆液pH为4.0，加入纤维素酶使酶浓度为450U/mL，然后在40℃条件下酶解3h,过滤，收集滤液、滤渣；B.负压空化强化提取蓝靛果滤渣：上述滤渣按质量体积比加入15L乙醇溶液进行负压空化强化提取，提取温度为40℃，提取压力为-0.05MPa，提取2次，每次50min，合并提取液与步骤A所得滤液，减压除去2/3溶液。C.低温絮凝沉降蓝靛果浓缩滤液：上述浓缩滤液中加入60％的乙醇配置饱和溶液后搅拌均匀，置于4℃下放置24h，分离得到上清液和沉淀，再将沉淀在40℃下减压干燥，得富集物。D.中压快闪反相柱层析分离矢车菊素-3-O-葡萄糖苷：上述低温絮凝沉降富集物加入20％甲醇至刚好溶解后进行中压快闪反相色谱柱层析。其中柱填料为ODS-C18反相硅胶：上样体积为柱体积的1/7；等度洗脱选用的洗脱剂为20％甲醇，洗脱流速为30mL/min，然后在检测波长520nm下进行HPLC的检测，合并相同流份，减压浓缩至干，得到矢车菊素-3-O-葡萄糖苷单体。E.矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的结晶：矢车菊素-3-O-葡萄糖苷单体用甲醇反复重结晶得到纯度为95.5％的矢车菊素-3-O-葡萄糖苷1.48g。实例2一种从蓝靛果中快速高效提取纯化花色苷的方法，按如下工艺步骤进行：A.高速匀质破碎酶解蓝靛果原料：1kg新鲜的蓝靛果7L的水进行高速匀质破碎8min，用冰醋酸调节浆液pH为5.0，加入纤维素酶和果胶酶的复合酶使纤维素酶浓度为300U/mL、果胶酶浓度为200U/mL，然后在45℃条件下酶解4h，过滤，收集滤液、滤渣；B.负压空化强化提取蓝靛果滤渣：上述滤渣按质量体积比加入10L乙醇溶液进行负压空化强化提取，提取温度为35℃，提取压力为-0.07MPa，提取3次，每次30min，合并提取液与步骤A所得滤液，减压除去2/3溶液。C.低温絮凝沉降蓝靛果浓缩滤液：上述浓缩滤液中加入55％的乙醇配置饱和溶液后搅拌均匀，置于6℃下放置32h，分离得到上清液和沉淀，再将沉淀在45℃下减压干燥，得富集物。D.中压快闪反相柱层析分离矢车菊素-3-O-葡萄糖苷：上述低温絮凝沉降富集物加入20％甲醇至刚好溶解后进行中压快闪反相色谱柱层析。其中柱填料为ODS-C18反相硅胶：上样体积为柱体积的1/10；等度洗脱选用的洗脱剂为20％甲醇，洗脱流速为25mL/min，得到矢车菊素-3-O-葡萄糖苷流份，然后减压浓缩至干，得到矢车菊素-3-O-葡萄糖苷单体。E.矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的结晶：矢车菊素-3-O-葡萄糖苷单体用甲醇反复重结晶得到纯度为96.3％的矢车菊素-3-O-葡萄糖苷1.56g。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从蓝靛果中快速高效提取纯化花色苷的方法，其特征在于按如下工艺步骤进行：A.高速匀质破碎酶解蓝靛果原料：新鲜的蓝靛果按质量体积比加入3～8倍原料质量的水进行高速匀质破碎5～10min，用柠檬酸、冰醋酸调节浆液pH为3.5～5.5，加入纤维素酶、果胶酶或两者组成的复合酶使酶浓度为300～700U/mL，然后在35～50℃条件下酶解2～5h，过滤，收集滤液、滤渣；B.负压空化强化提取蓝靛果滤渣：上述滤渣按质量体积比加入10～20倍滤渣质量的乙醇或醇水混合溶液进行负压空化强化提取，提取温度为25～40℃，提取压力为‑0.04～‑0.08MPa，提取2～4次，每次30～60min，合并提取液与步骤A所得滤液，减压除去2/3溶液。C.低温絮凝沉降蓝靛果浓缩滤液：上述浓缩滤液中加入50％～70％的乙醇配置饱和溶液后搅拌均匀，置于0～8℃下放置24～48h，分离得到上清液和沉淀，再将沉淀在35～50℃下减压干燥，得富集物。D.中压快闪反相柱层析分离矢车菊素‑3‑O‑葡萄糖苷：上述低温絮凝沉降富集物加入20％甲醇至刚好溶解后进行中压快闪反相色谱柱层析。其中柱填料为ODS‑C18反相硅胶：上样体积为柱体积的1/12～1/5；等度洗脱选用的洗脱剂为20％甲醇，洗脱流速为20～35mL/min，然后在检测波长520nm下进行HPLC的检测，合并相同流份，减压浓缩至干，得到矢车菊素‑3‑O‑葡萄糖苷单体。E.矢车菊素‑3‑O‑葡萄糖苷的结晶：矢车菊素‑3‑O‑葡萄糖苷单体用50％～70％的乙醇反复重结晶得到纯度可达95％的矢车菊素‑3‑O‑葡萄糖苷。...

【技术特征摘要】
1.一种从蓝靛果中快速高效提取纯化花色苷的方法，其特征在于按如下工艺步骤进行：A.高速匀质破碎酶解蓝靛果原料：新鲜的蓝靛果按质量体积比加入3～8倍原料质量的水进行高速匀质破碎5～10min，用柠檬酸、冰醋酸调节浆液pH为3.5～5.5，加入纤维素酶、果胶酶或两者组成的复合酶使酶浓度为300～700U/mL，然后在35～50℃条件下酶解2～5h，过滤，收集滤液、滤渣；B.负压空化强化提取蓝靛果滤渣：上述滤渣按质量体积比加入10～20倍滤渣质量的乙醇或醇水混合溶液进行负压空化强化提取，提取温度为25～40℃，提取压力为-0.04～-0.08MPa，提取2～4次，每次30～60min，合并提取液与步骤A所得滤液，减压除去2/3溶液。C.低温絮凝沉降蓝靛果浓缩滤液：上述浓缩滤...

【专利技术属性】
技术研发人员：付玉杰，焦骄，李璐，盖庆岩，王微，王鹏，王希清，
申请(专利权)人：东北林业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23