一种免疫磁珠法分离胎盘滋养层细胞的方法技术

本发明专利技术公开了一种免疫磁珠法分离胎盘滋养层细胞的方法，包括以下步骤：(1)免疫磁珠偶联特异性抗体的制备，向免疫磁珠中加偶联剂和能够特异性捕获胎盘滋养层细胞的抗体进行孵育；(2)洗涤(1)中偶联抗体的免疫磁珠2次，后保存在保存液中备用；(3)收集胎盘滋养层样本，采用酶解法制备为样本细胞悬液；(4)把(3)中的样本细胞悬液洗涤2次；(5)加入(2)中的偶联抗体的免疫磁珠进行孵育；(6)洗涤孵育完成的(5)中的免疫磁珠2次，弃上清，即可得到纯化的胎盘滋养层细胞，采用免疫磁珠法细胞分选技术，利用抗体偶联磁珠实现对胎盘滋养层细胞的特异性捕获，简单几步便能轻松、快速的实现滋养层细胞的分离，且易于实现自动化。

A method for separation of trophoblast cells immunomagnetic beads

The invention discloses a method of immunomagnetic beads separation of trophoblast cells, which comprises the following steps: (1) immunomagnetic coupling specific antibody preparation, to add coupling agent and immunomagnetic beads can capture specific antibody of trophoblast cells were incubated with washing; (2) (1) in coupling antibody the immunomagnetic beads 2 times, after stored in preservation solution for standby; (3) collecting the trophoblast using enzyme samples, prepared samples of cell suspension; (4) to (3) in the sample cell suspension was washed 2 times; (5) to (2) in the coupled antibody immunomagnetic beads incubated; (6) washing incubation completed (5) of immunomagnetic beads 2 times, the supernatant was removed and obtained purified placental trophoblast cells by immunomagnetic bead cell sorting technique, realize the specificity for placental trophoblast cells capture by antibody conjugated beads, a few simple It is easy to realize the separation of trophoblast cells, and is easy to automate.

【技术实现步骤摘要】
一种免疫磁珠法分离胎盘滋养层细胞的方法
本专利技术涉及免疫磁珠法的细胞分选技术，具体涉及一种免疫磁珠法分离胎盘滋养层细胞的方法。
技术介绍
滋养层细胞是在胚胎发育成桑椹胚后，桑椹胚进一步发育，细胞开始出现分化并沿透明带内壁扩展和排列的较小个体细胞，将来发育成胎膜和胎盘。早期就有研究表明，孕妇宫颈脱落细胞中存在胎盘滋养层细胞，贯穿整个孕期。因此，对滋养层细胞实现有效分离并获取胎儿DNA，对于最早期的产前筛查和诊断具有重大意义。许多研究表明，在早孕期包蜕膜和真蜕膜尚未融合时，一定比例的滋养细胞会穿过包蜕膜到达子宫腔，部分脱落到子宫下段，或者通过绒毛退化并脱落至子宫下段或宫颈处，并逐渐积聚，所以若使用一种微创或无创的方法采集宫颈处细胞，就可以精确地进行胎儿的产前诊断，这无疑是一种极具吸引力的方法。免疫磁珠法细胞分选技术是基于细胞表面抗原能与连接有磁珠的特异性单抗相结合，在外加磁场中，通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中，无该种表面抗原的细胞由于不能与连接着磁珠的特异性单抗结合而没有磁性，不在磁场中停留，从而使细胞得以分离。细胞分选的方法包括直接法和间接法，直接法即抗体直接与细胞表面本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种免疫磁珠法分离胎盘滋养层细胞的方法，其特征在于，所述方法通过以下步骤实现：(1)免疫磁珠偶联特异性抗体的制备，向免疫磁珠中加偶联剂和能够特异性捕获胎盘滋养层细胞的抗体并37℃偶联16‑24h；(2)洗涤(1)步骤中孵育完成的偶联抗体的免疫磁珠，将偶联抗体的免疫磁珠保存在保存液中备用；(3)收集胎盘滋养层样本，将该样本制备为样本细胞悬液；(4)把(3)步骤中的样本细胞悬液洗涤；(5)向(4)步骤洗涤后的样本细胞悬液中加入(2)步骤中的偶联有特异性抗体的免疫磁珠进行孵育，孵育条件为4℃‑42℃，30min‑24h；(6)洗涤孵育完成的(5)步骤中的免疫磁珠，弃上清，即可得到纯化的胎盘滋养层细胞...

【技术特征摘要】
1.一种免疫磁珠法分离胎盘滋养层细胞的方法，其特征在于，所述方法通过以下步骤实现：(1)免疫磁珠偶联特异性抗体的制备，向免疫磁珠中加偶联剂和能够特异性捕获胎盘滋养层细胞的抗体并37℃偶联16-24h；(2)洗涤(1)步骤中孵育完成的偶联抗体的免疫磁珠，将偶联抗体的免疫磁珠保存在保存液中备用；(3)收集胎盘滋养层样本，将该样本制备为样本细胞悬液；(4)把(3)步骤中的样本细胞悬液洗涤；(5)向(4)步骤洗涤后的样本细胞悬液中加入(2)步骤中的偶联有特异性抗体的免疫磁珠进行孵育，孵育条件为4℃-42℃，30min-24h；(6)洗涤孵育完成的(5)步骤中的免疫磁珠，弃上清，即可得到纯化的胎盘滋养层细胞；所述免疫磁珠为羧基磁珠、环氧基磁珠、甲苯磺酰基磁珠或甲苯磺酰基磁珠，能够特异性捕获胎盘滋养层细胞的抗体为HLA-G抗体，所述步骤(3)的胎盘滋养层样本为5-8周孕妇宫颈脱落细胞，且样本为25-500μl，其中包含胎儿滋养层细胞和母体细胞，所述洗涤液均为细胞培养用PBS，PB...

【专利技术属性】
技术研发人员：王臣，罗海贝，吴烈华，
申请(专利权)人：华东医药杭州基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33