The invention discloses a two-phase method for rapid screening of denitrifying phosphorus bacteria, the method by simulating the denitrifying phosphorus removal bacteria living environment, the design of two-phase alternating anaerobic anoxic conditions in the anaerobic phase, respectively, with additional carbon source phosphorus free medium and anoxic phase without external carbon source addition of phosphorus by culture the base for screening, then culturing diluted coated screened single strains, single strains were then screened respectively at 4 containing 5 bromine chloride 3 indolyl phosphate high and low phosphorus solid medium, selected in the two kinds of culture medium blue spots appear strain in the BTB, denitrifying culture marking medium, pick up medium blue strain. The invention has the advantages of high selectivity, small workload, can greatly shorten the screening period and other advantages.
【技术实现步骤摘要】
一种两相法快速筛选反硝化聚磷菌的方法
本专利技术属于环境微生物
，具体涉及一种高效、快速的两相法筛选反硝化聚磷菌方法。
技术介绍
在我国的水体污染问题中，水体富营养化污染尤为严重，而氮、磷污染物是导致众多水体富营养化的主要因素。每年有接近600亿吨携带着大量的氮和磷的废水进入水体，造成水体富营养化，进而引起水环境藻类大量繁殖，消耗水中的溶解氧，影响水中生物的生长。所以开发高效经济的污染水体脱氮除磷技术具有重要意义。硝化菌与传统聚磷菌的菌龄不同，反硝化菌与聚磷菌存在碳源上的竞争，使得传统的生物脱氮除磷处理过程存在着很大矛盾，而反硝化聚磷菌(DenitrifyingPhosphorusAccumulatingOrganisms，DPAOs)能解决这一矛盾。它能在厌氧-缺氧交替的环境下实现厌氧释磷，缺氧条件下，以硝酸盐作为电子受体，通过DPAOs代谢同时完成反硝化与过量吸磷的过程，解决碳源利用和泥龄差异问题。该过程比传统工艺节省50％的COD和30％的耗氧量。目前国内外对DPAOs的种类、除磷机理及影响DPAOs的脱氮除磷效果的主要因素有了一定的研究，在DPAOs...
【技术保护点】
一种两相法快速筛选反硝化聚磷菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：(a)首先将活性污泥与水混合后震荡培养，离心后弃去上清液得混合物；(b)按比例向混合物中加入含外加碳源无磷培养基，进行厌氧培养；(c)将步骤(b)所得厌氧培养液离心后弃去上清液，按比例加入无外加碳源含磷培养基，进行缺氧培养；(d)将步骤(c)所得缺氧培养液离心后弃去上清液，按照步骤(b)和(c)的方法交替进行厌氧培养和缺氧培养多次；(e)依次采用5‑溴‑4‑氯‑3‑吲哚基磷酸酯固体培养基、BTB反硝化固体培养基筛选出目标菌株。
【技术特征摘要】
1.一种两相法快速筛选反硝化聚磷菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：(a)首先将活性污泥与水混合后震荡培养，离心后弃去上清液得混合物；(b)按比例向混合物中加入含外加碳源无磷培养基，进行厌氧培养；(c)将步骤(b)所得厌氧培养液离心后弃去上清液，按比例加入无外加碳源含磷培养基，进行缺氧培养；(d)将步骤(c)所得缺氧培养液离心后弃去上清液，按照步骤(b)和(c)的方法交替进行厌氧培养和缺氧培养多次；(e)依次采用5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸酯固体培养基、BTB反硝化固体培养基筛选出目标菌株。2.根据权利要求1所述的一种两相法快速筛选反硝化聚磷菌的方法，其特征在于：步骤(a)中按照1:7.5-14的体积比将活性污泥与水混合，在30℃恒温振荡培养20-24h，离心后弃去上清液。3.根据权利要求1所述的一种两相法快速筛选反硝化聚磷菌的方法，其特征在于：步骤(b)中按照活性污泥：含外加碳源无磷培养基＝1:7.5-14的体积比向混合物中加入含外加碳源无磷培养基，通氮气后密封，在30℃恒温厌氧培养20-24h。4.根据权利要求1所述的一种两相法快速筛选反硝化聚磷菌的方法，其特征在于：步骤(c)中按照活性污泥：无外加碳源含磷培养基1:7.5-14的体积比加入无外加碳源含磷培养基，在30℃恒温缺氧培养20-24h。5.根据权利要求1所述的一种两相法快速筛选反硝化聚磷菌的方法，其特征在于：步骤(d)中按照步骤(b)和(c)的方法交替进行厌氧培养和缺氧培养各5-7次，步骤(e)中将驯化培养液稀释后涂布筛选出单株菌，分别点种在5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸酯低磷固体培养基和5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸酯高磷固体培养基中，挑选出在两种5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸酯固体培养基中同时出现蓝斑的菌株，所得菌株在BTB反硝化培养基中划线培养，挑选出使BTB反硝化培养基变蓝的菌株。6.根据权利要求1所述的一种两相法快速筛选反硝化聚磷菌的方法，其特征在于，所述含外加碳源无磷培养基成分包括：1-2g/LCH3COONa，0.1-0.15g/LNH4Cl，0.18-0.2g/LMgSO4，0.01-0.015g/LCaCl2，0.1-0.15g/LNaCl，1-1.5ml/L微量元素溶液，pH值为7.0-8.0，1.0-1.5MPa灭菌10-15min；所述无外加碳源含磷培养基成分包括：0.02-0.04g/LKH2PO4，0.15-0.2g/LKNO3，0.18-0.2g/LMgSO4，0.01-0.015g/LCaCl2，0.1-0.15g/LNaCl，1-1.5ml/L微量元素溶液，pH值为7.0-8.0，1.0-1.5MPa灭菌10-15min。7.根据权利要求1所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：王继勇，江英杰，陈加立，肖挺，
申请(专利权)人：武汉理工大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42
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