一种基因组DNA的分析方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种基因组DNA的分析方法，以及该方法在肿瘤检测中的应用；进一步的，本发明专利技术提供了N6‑甲基脱氧腺苷的含量(6mA)作为肿瘤标志物的应用。

An analytical method of genomic DNA and its application

The present invention provides an analysis method for genomic DNA, and the application of this method in tumor detection; further, the invention provides the content of N6 methyl deoxyadenosine (6mA) used as a tumor marker.

【技术实现步骤摘要】
一种基因组DNA的分析方法及其应用
本专利技术属于基因修饰
，具体涉及一种基因组DNA的分析方法及其应用。
技术介绍
DNA甲基化是真核细胞基因组重要修饰方式之一，在哺乳动物细胞的发育、分化、基因组印迹、以及基因表达调控等方面发挥了关键的作用，具有重要的生物学意义，并与人类疾病(包括肿瘤)的发生发展过程密切相关。因此，发现和建立与疾病过程相关的基因组DNA修饰谱具有重要的应用价值和意义。第一方面，DNA甲基化通过影响染色体的构型和基因的转录，调控基因的功能。一般说来，DNA甲基化与基因表达水平呈负相关关系，这不仅表现在基因启动子区的甲基化上，基因内部的甲基化水平也与基因表达负相关；反之，基因启动子区域的低甲基化与基因的转录活性正相关。体外研究表明，将高度甲基化的序列转入细胞后，基因表达受到抑制；而用甲基化抑制剂—5-叠氮胞嘧啶处理细胞，则能激活许多内源基因的表达。第二方面，基因组DNA甲基化具有调节胚胎发育的作用。基因组的甲基化模式在分化的体细胞中通常是稳定且可遗传的，但在哺乳动物生殖细胞的发育期和前胚胎期，通过大规模的去甲基化和再甲基化过程，形成新的甲基化模式，并产生有分化潜本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基因组DNA的分析方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)获得基因组DNA；(2)将步骤(1)中获得的基因组DNA顺序与充分量的DNase I、Nuclease P1以及牛肠碱性磷酸酶(Calf Intestinal Alkaline Phosphatase)接触，使长链DNA分子充分降解为单核苷分子；其中，10×Calf Intestinal Alkaline Phosphatase缓冲液中含有1M NaCl、0.5MNH4OAc、0.1MMgCl2、及10mMDTT，使用浓氨水调节pH至8.2；(3)将高效液相色谱和三重四级杆质谱联用，对步骤(2)获得的单核苷分子进行定性和定量分析...

【技术特征摘要】
2016.04.20 CN 20161024688521.一种基因组DNA的分析方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)获得基因组DNA；(2)将步骤(1)中获得的基因组DNA顺序与充分量的DNaseI、NucleaseP1以及牛肠碱性磷酸酶(CalfIntestinalAlkalinePhosphatase)接触，使长链DNA分子充分降解为单核苷分子；其中，10×CalfIntestinalAlkalinePhosphatase缓冲液中含有1MNaCl、0.5MNH4OAc、0.1MMgCl2、及10mMDTT，使用浓氨水调节pH至8.2；(3)将高效液相色谱和三重四级杆质谱联用，对步骤(2)获得的单核苷分子进行定性和定量分析，包括未修饰的和修饰的单核苷分子。2.一种基因组DNA中6mA修饰核苷的分析方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)获得基因组DNA；(2)将步骤(1)中获得的基因组DNA顺序与充分量的DNaseI、NucleaseP1以及CalfIntestinalAlkalinePhosphatase接触，使长链DNA分子充分降解为单核苷分子；其中，10×CalfIntestinalAlkalinePhosphatase缓冲液中含有1MNaCl、0.5MNH4OAc、0.1MMgCl2、及10mMDTT，使用浓氨水调节pH至8.2；(3)将高效液相色谱和三重四级杆质谱联用，分析步骤(2)获得的单核苷分子；(4)以6mA修饰核苷的标准品为参照，确定基因组DNA中6mA修饰核苷的含量。3.权利要求1或2所述分析方法，在检测基因组DNA中6mA修饰核苷的应用。4.一种检测肿...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜权，王弘，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：北京,11