POU结构域改造蛋白对多能干细胞的高效诱导制造技术

本发明专利技术提出了一种分离的多肽，本发明专利技术提出了一种分离的多肽。该多肽的氨基酸序列具有下列特征的至少之一：与SEQ ID NO：1相比，所述多肽的第152位氨基酸由T突变为R(在申请中，该突变位点命名为T22R)；(2)与SEQ ID NO：1相比，所述多肽的第208位氨基酸由E突变为P(在本申请中，该突变位点命名为E78P)；(3)与SEQ ID NO：1相比，所述多肽的第230～256位氨基酸被替换为SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列。根据本发明专利技术的实施例，体细胞中过表达上述多肽，体细胞发生去分化、重编程的效率显著提高。

Highly efficient induction of pluripotent stem cells by POU domain modification protein

The present invention proposes a separate polypeptide, and the present invention proposes a separate polypeptide. At least one of the amino acid sequence of the polypeptide has the following characteristics: compared with the SEQ ID NO:1, the polypeptide of 152nd amino acid from T to R mutation (in the application, the mutation site named T22R); (2) compared with the SEQ ID NO:1, the polypeptide of 208th amino acid from P (E mutation in this application, the mutation site named E78P); (3) compared with the SEQ ID NO:1, polypeptides 230th ~ 256 amino acid was substituted for the amino acid sequence of SEQ ID NO:14 shown. According to the embodiment of the present invention, the efficiency of dedifferentiation and reprogramming of somatic cells is significantly improved by overexpression of the polypeptides in somatic cells.

【技术实现步骤摘要】
POU结构域改造蛋白对多能干细胞的高效诱导
本专利技术涉及生物领域，具体地，本专利技术涉及多肽、核酸、构建体、改变细胞命运的方法和获得诱导多能干细胞的方法。
技术介绍
Oct4/3，从1989首次发现它(Scholer,1989)之后，至今已进行了27年的研究。它由人类第六号染色体上POUF51基因编码，是为维持细胞全能性中的关键转录因子，它的表达变化调节着生命体的发育(2014)。Oct4具有保守的POU结构域，这个结构域由POU-specific(POUs)和POU-homeo(POUh)亚结构域，中间由一段linker连接，分别结合ATGC和(A/T)AAT，同样它们能一起结合在八聚体的保守DNA序列(ATGCAAAT)上。Oct4不仅可以和自己相互组合后结合在POREmotif和MOREmotif上，也能同别的蛋白组成复合体，如与Sox2。在重编程的四个因子Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc中Oct4不同于其它因子，它不能被同家族的成员完全替换完成同等效率的重编程。体细胞重编程是诱导成熟的体细胞变成多能诱导干细胞(iPSC)的过程。首次发现是体细胞在干细胞培养基的环境下本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列具有下列特征的至少之一：(1)与SEQ ID NO：1相比，所述多肽的第152位氨基酸由T突变为R；(2)与SEQ ID NO：1相比，所述多肽的第208位氨基酸由E突变为P；(3)与SEQ ID NO：1相比，所述多肽的第230～256位氨基酸被替换为SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种分离的多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列具有下列特征的至少之一：(1)与SEQIDNO：1相比，所述多肽的第152位氨基酸由T突变为R；(2)与SEQIDNO：1相比，所述多肽的第208位氨基酸由E突变为P；(3)与SEQIDNO：1相比，所述多肽的第230～256位氨基酸被替换为SEQIDNO：14所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述多肽具有SEQIDNO：2～7所示的氨基酸序列。3.一种获得权利要求1～2任一项所述多肽的方法，其特征在于，包括：(1)选取Oct4的POU结构域的第7、21、18、22、78、151位的氨基酸，通过突变处理构建6个饱和突变文库多肽；(2)将Oct1、Oct6、Brn2、Oct4的POU结构域的POUh、Linker、POUs进行第一排列组合处理，构建嵌合体突变文库多肽；(3)保持C末端和N末端为Oct4相应序列；(4)将所述突变文库多肽和所述嵌合体突变文库多肽分别同Sox2、c-Myc、Klf4一同诱导体细胞，观察诱导多能干细胞的诱导效率，其中，所述多能干细胞的诱导效率大于1倍的野生型Oct4的诱导效率是待筛选目标多肽的指标；(5)将所述目标多肽进行第二排列组合处理，构建待筛选文库多肽；(6)将所述待筛选文库多肽分别同Sox2、c-Myc、Klf4一同诱导体细胞，观察诱导多能干细胞的诱导效率，其中，所述多能干细胞的诱导效率大于2倍的野生型Oct4的诱导效率是目的多肽的指标。4.一种分离的核酸，其特征在于，具有SEQIDNO：8～13所示的核苷酸序列。5.一种构建体，其特征在于，携带权利要求4所述的核酸。6.一种改变细胞命运的方法，其特征在于，包括：所述细胞过表达权利要求1～2所述的多肽。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述细胞是体...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈焱埔，乔治·拉夫，
申请(专利权)人：中国科学院广州生物医药与健康研究院，
类型：发明
国别省市：广东,44