一种酿酒糯高粱常规种品种或种质纯度鉴定的方法技术

本发明专利技术属于分子生物学领域，涉及一种酿酒高粱常规种品种和种质纯度鉴定的方法，该方法依据基因组简单序列重复标记(SSR，Simple Sequence Repeats)的基本原理，根据数据库提供信息合成特异性标记引物，利用提取的高粱品种DNA扩增并筛选分子标记位点，最终获得“红缨子”等酿酒高粱品种基因组特异性条带。根据高粱品种特异性条带图谱取样分析并进行统计，可以鉴定酒厂原料的种质纯度。该方法操作简便、效果明显、可行性高。

A method for purity identification of conventional varieties or germplasm of glutinous sorghum

The invention belongs to the field of molecular biology, and relates to a method for brewing sorghum varieties and conventional germplasm identification, the method based on simple sequence repeat marker genome (SSR, Simple Sequence Repeats) the basic principle, according to the database to provide information synthesis of specific marker primers, amplification and screening of molecular markers using extraction of sorghum DNA eventually won the \red tassel\ brewing sorghum genome specific bands. The germplasm purity of distillery raw material can be identified by sampling, analyzing and counting according to the specific bands of sorghum varieties. This method is easy to operate with obvious effect and high feasibility.

【技术实现步骤摘要】
一种酿酒糯高粱常规种品种或种质纯度鉴定的方法
本专利技术属分子生物学
，具体涉及一种基因组分子标记技术鉴定酿酒高粱原料的应用研究，该专利技术涉及方法可用于不同酿酒高粱品种和种质纯度的鉴定。
技术介绍
随着中国白酒酿造行业的深度调整，酿酒专用高粱发展迅速。近年来酱香酒高粱原料的需求量很大，其中贵州省的“红缨子”高粱推广面积最大。如何判断专用高粱种质的真伪是酒厂实际原料收购中需要面对的一个重要问题。以往酒厂的原料鉴定常常根据理化指标含量(如总淀粉、支链淀粉、单宁含量等)来判定种质真伪，这种鉴定方法具有工作量较大，耗时长，鉴定灵敏度不高等因素的局限。高粱是二倍体作物，基因组共10对染色体。高粱基因组上均匀分布着一类短的串联重复序列，根据这些串联重复序列两侧保守位点设计引物进行PCR扩增并电泳分析或测序，可以进行种质鉴定或遗传多样性分析，这是简单序列重复标记(SSR，SimpleSequenceRepeats)或微卫星(Microsatellite)标记的基本原理。通过分子标记技术构建不同酿酒高粱品种的DNA指纹图谱，可以发掘高粱品种基因组特异位点的多态性特征，为实际的原料品种来源的鉴定提供依据。目前高粱基因组已开发出大量的SSR分子标记(http://archive.gramene.org/cmap/)，利用这种分子标记技术可以有效地解决争议，判定高粱种质真伪。然而我国高粱常规种遗传基础比较狭窄，以红缨子为代表的高粱常规种部分基因组位点间相似性很高，大部分扩增出的SSR分子标记位点条带大小很相似，因此怎样筛选出鉴定品种所对应的特异性SSR标记，是本专利技术的一个重点，也是一个难点。目前，还没有关于酿酒高粱尤其是酱香酒用糯高粱种质分子标记技术鉴定方法的报道。综上所述，对于酿酒高粱种质的鉴定，亟待找到合适的SSR位点以及引物，鉴定尽可能多的高粱种质类别。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一组高粱的SSR分子标记位点用于高粱品种或种质纯度的鉴定。本专利技术的目的在于还提供一组引物，用于鉴定高粱品种或种质纯度。本专利技术的目的还在于提供一种高效、灵敏、应用范围广的高粱品种和种质纯度的鉴定方法。一方面，本专利技术提供了高粱的SSR分子标记位点txp36和txp287在鉴定高粱品种/种质纯度中的应用另一方面，本专利技术提供了高粱SSR分子标记位点的引物组，其包含两对SSR引物：1)txp36位点的引物，作为优选的实施方式，其由SEQ.IDNO.1所示的左引物和SEQ.IDNO.2所示的右引物组成；；2)txp287位点的引物，作为优选的实施方式，其由SEQ.IDNO.3所示的左引物和SEQ.IDNO.4所示的右引物组成；。另一方面，本专利技术还提供了上述位点以及引物组在高粱品种鉴定或者是种质纯度鉴定中的应用。作为优选的实施方式，本专利技术的引物组或者应用，其中，待鉴定的高粱品种为酿酒高粱，其中主要为酿酒糯高粱；或者，作为优选的实施方式，鉴定的高粱品种为红缨子、黔高7号、黔高8号、泸州红1号、国窖红1号、晋杂22号、晋杂23号、晋杂35号、晋杂103号、晋杂104号、晋糯3号、两糯1号、辽粘3号、辽杂15号、辽杂18号、辽杂19号和辽杂37号中的一种或多种；更优选红缨子、黔高7号、辽杂37号；尤其优选的是红缨子，因为红缨子的推广面积在贵州最大，且为主要的专用酿酒品种，其鉴定具有重要的意义。另一方面，本专利技术还提供了一种高粱品种或种质纯度的方法，其特征在于：包含以下步骤：1)提取待鉴定高粱的DNA；2)扩增txp36和txp287两个SSR分子标记位点；3)根据txp36和txp287位点的扩增条带，鉴定高粱品种或种质纯度。其中，步骤1)中，提取的DNA为高粱种子或植株叶片；种子和植株叶片中都有完整的高粱基因组。作为优选的实施方式，提取植株叶片中的DNA，因为种子中淀粉含量高，胚中DNA所占比例低。其中，步骤2)中，可以在不同的PCR反应体系中，分别扩增txp36和txp287两个SSR分子标记位点；或者是在同一反应体系中，采用多重PCR同时扩增txp36和txp287两个SSR分子标记位点。作为优选的实施方式，步骤2)中，所述的用于扩增txp36分子标记位点的引物为：SEQ.IDNO.1所示的左引物和SEQ.IDNO.2所示的右引物；txp287分子标记位点的引物为：SEQ.IDNO.3所示的左引物和SEQ.IDNO.4所示的右引物。当然，除了这两对引物，其他能够扩增出待鉴定高粱txp36和txp287位点的引物也可以用于该方法。作为优选的实施方式，该方法用于鉴定的高粱品种为酿酒高粱，其中主要为酿酒糯高粱；或者优选的高粱品种为红缨子、黔高7号、黔高8号、泸州红1号、国窖红1号、晋杂22号、晋杂23号、晋杂35号、晋杂103号、晋杂104号、晋糯3号、两糯1号、辽粘3号、辽杂15号、辽杂18号、辽杂19号和辽杂37号中的一种或几种；更优选地，所述的高粱为红缨子、黔高7号、辽杂37号；更为优选红缨子。其中，红缨子高粱其txp36位点的特应性条带为190bp和195bp，其txp287位点的特应性条带为250bp；黔高7号在txp36位点扩增出条带只有190bp，在txp287位点特异条带为250bp和240bp；黔高8号在txp36位点扩增出条带只有195bp，在txp287位点特异条带为250bp；泸州红1号在txp36位点扩增出条带只有195bp，在txp287位点特异条带为250bp和240bp；国窖红1号在txp36位点扩增出条带只有195bp，在txp287位点特异条带为250bp和240bp；晋杂22号在txp36位点扩增出条带有190bp和195bp两条，在txp287位点特异条带为250bp和280bp；晋杂23号在txp36位点扩增出条带只有195bp，在txp287位点特异条带为250bp和280bp；晋杂35号在txp36位点扩增出条带只有195bp，在txp287位点特异条带为250bp和280bp；晋杂103号在txp36位点扩增出条带有190bp和195bp两条，在txp287位点特异条带为250bp和280bp；晋杂104号在txp36位点扩增出条带只有195bp，在txp287位点特异条带为250bp和280bp；晋糯3号在txp36位点扩增出条带只有195bp，在txp287位点特异条带为250bp和280bp；两糯1号在txp36位点扩增出条带只有195bp，在txp287位点特异条带为250bp和240bp；辽粘3号在txp36位点扩增出条带只有195bp，在txp287位点特异条带为250bp和280bp；辽杂15号在txp36位点扩增出条带只有195bp，在txp287位点特异条带为250bp；辽杂18号在txp36位点扩增出条带只有195bp，在txp287位点特异条带为250bp和240bp；辽杂19号在txp36位点扩增出条带只有195bp，在txp287位点特异条带为250bp；辽杂37号在txp36位点扩增出条带只有195bp，在txp287位点特异条带为250bp和260bp。上述各个品种的扩增条带同样证实了，现有的高粱的种质遗传是很窄的，基因位点相似性很大，很多品种的SSR分子标记位点条带本文档来自技高网...

【技术保护点】
高粱的SSR分子标记位点txp36和txp287在鉴定高粱品种/种质纯度中的应用。

【技术特征摘要】
1.高粱的SSR分子标记位点txp36和txp287在鉴定高粱品种/种质纯度中的应用。2.高粱SSR分子标记位点的引物组，其特征在于，包含两对SSR引物：1)txp36位点的引物；2)txp287位点的引物；优选地，txp36位点的引物由SEQ.IDNO.1所示的左引物和SEQ.IDNO.2所示的右引物组成；txp287位点的引物由SEQ.IDNO.3所示的左引物和SEQ.IDNO.4所示的右引物组成。3.权利要求2所述的引物组在高粱品种/种质纯度鉴定中的应用。4.根据权利要求1、2或3所述的应用/引物组，其特征在于，所述的高粱为酿酒高粱；或者优选地，所述的高粱为红缨子、黔高7号、黔高8号、泸州红1号、国窖红1号、晋杂22号、晋杂23号、晋杂35号、晋杂103号、晋杂104号、晋糯3号、两糯1号、辽粘3号、辽杂15号、辽杂18号、辽杂19号和辽杂37号中的一种或几种；更优选地，所述的高粱为红缨子、黔高7号、辽杂37号。5.根据权利要求1、2或3所述的应用/引物组，其特征在于，所述的高粱为红缨子。6.一种鉴定高粱品种/种质纯度的方法，其特征在于，包含以下步骤：1)提取待鉴定高粱的DNA；2)扩增txp36和txp287两个SSR分子标记位点；3)根据txp36和txp287位点的扩增条带，鉴定高粱品种或种质纯度。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤1)中，提取的DNA为...

【专利技术属性】
技术研发人员：闫松显，王莉，涂佑能，汪地强，王和玉，赵亮，
申请(专利权)人：贵州茅台酒股份有限公司，
类型：发明
国别省市：贵州,52