三阴性乳腺癌特异性环状RNA的筛选方法技术

本发明专利技术公开了一种三阴性乳腺癌特异性环状RNA的筛选方法，其以乳腺癌特有的70个环状RNA为引物，通过比较三阴性乳腺癌血浆标本及正常对照组的环状基因表达，筛选出对三阴性乳腺癌具有特异性显著表达的环状RNA。其结果对于三阴性乳腺癌的诊断和治疗具有重要的意义。

Screening of specific cyclic RNA in three negative breast cancer

The invention discloses a method for screening three negative breast cancer specific cyclic RNA, with 70 circular RNA breast cancer specific primers by cyclic gene comparison of three negative breast cancer samples and normal control group expression, screened with cyclic RNA specific significant expression of three negative breast cancer. The results are of great significance for the diagnosis and treatment of three negative breast cancer.

【技术实现步骤摘要】
三阴性乳腺癌特异性环状RNA的筛选方法
本专利技术涉及一种肿瘤特异性环状RNA的筛选方法，尤其涉及一种三阴性乳腺癌特异性环状RNA的筛选方法。
技术介绍
环状RNA(circularRNA,环状)是一类不同于线性RNA的内源非编码RNA，它是通过反向剪接形成的闭合环状RNA分子，属于非编码RNA家族成员。其以保守、稳定、特异、高含量为特点，可作为microRNA海绵调控靶miRNA的活性，并参与基因转录和蛋白生成的调控，逐渐成为非编码RNA调控网络的新星。随着RNA研究技术的进一步进步，研究者们发现环状RNA在心血管系统疾病、神经系统疾病、朊蛋白疾病等多种疾病的发生发展中发挥重要作用，并且在肿瘤诊断、治疗和预后等方面具有巨大的潜能，有望成为新的肿瘤生物标志物或分子靶向治疗靶点。三阴乳腺癌(triple‐negativebreastcancer,TNBC)是指雌激素受体(estrogenreceptor，ER)、孕激素受体(progesteronereceptor，PR)及人类上皮细胞生长因子受体2(humanepidermalgrowthfactorreceptor2，Her2)均无本文档来自技高网...

【技术保护点】
三阴性乳腺癌特异性环状RNA的筛选方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：(1)选取多个三阴性乳腺癌女性患者血浆作为实验组A；选取与实验组A数量相等的正常女性血浆作为对照组B；(2)分别对实验组和对照组血浆进行处理提取RNA，并对提取的RNA进行质量检测；(3)分别对提取的RNA进行逆转录合成cDNA；(4)以乳腺癌特有的70个环状RNA为引物分别对合成的cDNA进行qPCR实验；(5)对比三阴性乳腺癌血浆标本及正常对照组的环状基因表达筛选出三阴性乳腺癌特异性环状RNA。

【技术特征摘要】
1.三阴性乳腺癌特异性环状RNA的筛选方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：(1)选取多个三阴性乳腺癌女性患者血浆作为实验组A；选取与实验组A数量相等的正常女性血浆作为对照组B；(2)分别对实验组和对照组血浆进行处理提取RNA，并对提取的RNA进行质量检测；(3)分别对提取的RNA进行逆转录合成cDNA；(4)以乳腺癌特有的70个环状RNA为引物分别对合成的cDNA进行qPCR实验；(5)对比三阴性乳腺癌血浆标本及正常对照组的环状基因表达筛选出三阴性乳腺癌特异性环状RNA。2.如权利要求1所述的三阴性乳腺癌特异性环状RNA的筛选方法，其特征在于，目标基因的表达采用2‐△△Ct法。3.如权利要求1所述的三阴性乳腺癌特异性环状RNA的筛选方法，其特征在于，步骤(2)中，RNA的提取包括如下步骤：a.EP管中分别加入血浆，0.04倍蛋白酶K，于55～60℃水浴保温5～15分钟；b.加入3倍MagZolLSReagent，震荡混匀后室温放置5～10分钟；C.加入0.02倍冰醋酸和0.8倍氯仿，用手剧烈震荡10～30秒后室温放置2～3分钟；d.4℃下，12,000xg离心10～20分钟后；e.小心转移上清液至新的EP管中，加入1～2倍无水乙醇涡旋混匀10～30秒；f.收集管中加入HiPureRNAMicroColumn，转移混合液至柱子中，8,000xg离心20～40秒；g.倒弃滤液把柱子装回收集管中，加入2.4倍BufferRW2至柱子中，8,000xg离心20～40秒；h.倒弃滤液把柱子装回收集管中，加入2.4倍BufferRW2至柱子中，8,000xg离心20～40秒；i.倒弃滤液把柱子装回收集管中，13,000xg离心空柱2～4分钟甩干柱子的基质；j.将柱子转移至1.5ml离心管中，加入0.06‐0.12倍DEPC水至柱子的膜中央，室温静置1～5分钟，13,000xg离心1～2分钟；k.丢弃RNA柱子，把RNA样品保存‐80℃；l.取1μLRNA样品在核酸蛋白检测仪上测定OD值，记录A260/280比值和RNA浓度。4.如权利要求1所述的三阴性乳腺癌特异性环状RNA的筛选方法，其特征在于，步骤(3)中RNA逆转录合成cDNA的步骤如下：a.按照如下重量份配制第一链cDNA合成反应液：b.用移液器轻轻吹打混匀反应液后25℃保温10分钟；c.42℃孵育15分钟；d.85℃孵育5分钟灭活逆转录酶。5.如权利要求1所述的三阴性乳腺癌特异性环状RNA的筛选方法，其特征在于，步骤(4)中qPCR实验步骤如下：a.样品配制：先准备好乳腺癌环状RNAqPCR芯片，将步骤(3)合成的cDNA按照1：20稀释后，加入2.5μl作为模板；其中芯片的基因列表涵盖70个乳腺癌特有的环状RNA、6个内参基因及6个对照，分别为hsa_circ_000541、hsa_circ_002024、hsa_circ_000016、h...

【专利技术属性】
技术研发人员：李丽仙，辇伟奇，林昌海，张海伟，唐超，易琳，冉静，何永鹏，唐万燕，
申请(专利权)人：重庆市肿瘤研究所，
类型：发明
国别省市：重庆,50