一种猪组织染色质免疫沉淀处理方法技术

本发明专利技术属于家畜免疫学技术领域，具体涉及一种猪组织染色质免疫沉淀处理方法。该方法简称为ChIP。本发明专利技术专门针对猪组织进行优化设计，采用组织裂解液与Dounce研磨器相结合，开发适合猪组织匀浆的方法、步骤和流程，使组织裂解充分，组织悬液均匀，得到的chromatin量大且质量高，后续ChIP‑Seq实验的峰图质量高。本发明专利技术简单、快速、有效的制备组织悬液，能满足ChIP‑Seq实验的核心要求，为开展猪的组织表观基因组学研究提供了有效途径。

A method of chromatin immunoprecipitation for swine tissues

The present invention belongs to the field of livestock immunology technology, and specifically relates to a method of chromatin immunoprecipitation treatment for swine tissues. This method is abbreviated as ChIP. The invention specifically for pig tissue optimized by tissue lysates with Dounce grinder combination method, suitable for the development of pig tissue procedures and processes, the organization fully cracked tissue suspension uniform, chromatin amount of large and high quality, the subsequent ChIP Seq experiment peak of high quality. The invention is simple, fast and effective preparation of tissue suspension can meet the experimental requirements of core ChIP Seq, genome view provides an effective way for carrying out the study of surface pig tissue.

【技术实现步骤摘要】
一种猪组织染色质免疫沉淀处理方法
本的专利技术属于家畜免疫学
，具体涉及一种猪组织染色质免疫沉淀(ChIP)处理方法。
技术介绍
目前有关3D基因组的研究越来越火热,组蛋白修饰也成为其中的热点,其对基因表达调控起着至关重要的作用。研究3D基因组的方法有很多,如:3-C(chromosomeconformationcapture),4-C(chromosomeconformationcapture-on-chip),5-C(chromosomeconformationcapturecarboncopy),ChIP(chromatinimmunoprecipitation),ChIA-PET(chromatininteractionanalysisbypaired-endtagsequencing)等技术(BonevandCavalli2016),并且这些技术尤其ChIP在人与小鼠无论细胞还是组织上已经应用地成熟,而有关在猪上面的ChIP技术却一直没有系统的研究方法。ChIP方法,是指在活细胞状态下,通过甲醛固定蛋白质-DNA复合物,并将其打断为一定长度范围内的染色质小片段,然后通本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪组织染色质免疫沉淀(ChIP)处理方法，包括在组织的前处理和在细胞中做染色质免疫沉淀,即ChIP，其特征包括下列步骤：(1)称取1g新鲜的猪组织，置于50mL离心管中，将猪组织剪成约1‑3mm

【技术特征摘要】
1.一种猪组织染色质免疫沉淀(ChIP)处理方法，包括在组织的前处理和在细胞中做染色质免疫沉淀,即ChIP，其特征包括下列步骤：(1)称取1g新鲜的猪组织，置于50mL离心管中，将猪组织剪成约1-3mm3的小块；(2)加入23.75mL的1％甲醛溶液，在室温下处理15min，在组织被充分晃动条件下进行交联；(3)加入1.25mL的2.5M的甘氨酸至终浓度为125mM时终止交联，在室温下处理5min，继续在交联条件下使组织晃动，5min后，在2500rpm，25℃下离心5min；(4)弃上清，取沉淀，用20mL复配的磷酸盐缓冲液重悬沉淀，用电动移液枪上下吹匀，进行清洗，然后以2500rpm，25℃下离心5min；将所得的沉淀再次用20mL复配的磷酸盐缓冲液重悬，吹匀，然后在2500rpm，25℃下离心5min，最后弃上清；其中：复配的磷酸盐缓冲液是在50mL的磷酸盐缓冲液中加入两片蛋白酶抑制剂，摇晃至溶解；(5)加入10mL复配的细胞膜裂解液重悬沉淀，并将沉淀与液体全部转移至Dounce匀浆器中，将所述的Dounce匀浆器提前放在冰上，在中空把手中装上冰块，在冰上慢慢研磨，避免产生太多热量，直到组织块被磨碎且成为匀浆状态；将匀浆好的组织转移至新的50mL离心管中，在5500g，4℃下离心5min，将所得的沉淀再次用10mL复配的细胞膜裂解液重悬，吹匀，然后在2500rpm，25℃下离心5min；最后一次离心前在显微镜下观察组织的裂解状态；其中：复配的细胞膜裂解液是在50mL细胞膜裂解液中加入两片蛋白酶抑制剂，摇晃至溶解；(6)用6mL，1％...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹建华，任瑞敏，黄英，孙艳，王昇，赵书红，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42