The invention discloses a method for detecting folate metabolism related genes, the specific steps are as follows: DNA extraction of oral mucosal cells on the detection; respectively with SEQ 1 and SEQ NO NO 2 gene was amplified by MTHFR C677T, SEQ NO and SEQ 3 NO 4 MTHFR gene was amplified by A1298C. SEQ 5 and SEQ NO NO 6 MTRR gene was amplified by A66G, oral mucosa cells from DNA as the template for PCR reaction, the 3 pairs of agarose gel electrophoresis of amplification products of 1% PCR; the 1% agarose gel electrophoresis bands by agarose gel extraction kit band; PCR the product with 1% agarose gel electrophoresis by agarose gel extraction kit; sequencing reaction; sequencing reaction products were purified, denaturation, 3730 sequencing; the sequencing results were analyzed with Chromas software 3 SNP genotype can be. The invention has the advantages of high detection accuracy and convenient use.
【技术实现步骤摘要】
一种叶酸代谢相关基因的检测方法
本专利技术涉及生物检测领域,具体来说是一种叶酸代谢相关基因的检测方法。
技术介绍
叶酸又称蝶酰谷氨酸,由喋啶核、对氨苯甲酸及谷氨酸3个部分组成。人和哺乳动物都只能通过肠道吸收外源的叶酸而不能自身合成叶酸。叶酸主要被小肠上段吸收,在十二指肠和空肠上皮黏膜细胞内含叶酸还原酶,在该酶的作用下叶酸甲基化生成二氢叶酸,再甲基化后生成四氢叶酸。甲基四氢叶酸为一碳单位的载体,参与组成DNA和RNA的嘌呤和嘧啶等重要物质的生物合成。叶酸代谢还具有很高的个体差异,而且受到生物体内多种因素的影响,尤其是受叶酸代谢过程中重要的酶如亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)和甲硫氨酸合成酶多态性的影响。叶酸在细胞内需要代谢转化才能发挥其生物学作用,亚甲基四氢叶酸还原酶是叶酸代谢通路中的关键酶,MTHFR基因核苷酸多态(677C→T和1298A→C)使其编码的酶功能活性降低,从而影响叶酸的生物转化和功能。叶酸是指具有相关生物活性的一类通效维生素,有蝶啶、对氨基苯甲酸和一个或多个谷氨酸结合而成,即由α-氨基-4-羟基蝶啶与对氨基苯甲酸相连接,在以-NH-CO-键与谷氨酸链接组成,其不同的辅酶形成可以作为一碳单位的供体或载体而发挥作用,主要参与以下几类反应:①蛋氨酸合成;②嘌呤和嘧啶的合成;③丝氨酸和甘氨酸的相互转化和组氨酸的降解。大量研究表明,叶酸摄入绝对或相对的缺乏,是引起高同型半胱氨酸血症的直接原因。高同型半胱氨酸血症可能导致新生儿神经管缺陷(NTDs)、唐氏综合征(DS)、先天性心脏病(CHD)、唇腭裂;孕妇妊娠高血压、早产、自发性流产。目前了解到涉及叶 ...
【技术保护点】
一种叶酸代谢相关基因的检测方法,其特征在于:具体步骤如下:(1)、对检测者的口腔黏膜细胞提取DNA;(2)、分别用SEQ NO 1和SEQ NO 2扩增MTHFR基因C677T,用SEQ NO 3和SEQ NO 4扩增MTHFR基因A1298C,用SEQ NO 5和SEQ NO 6扩增MTRR基因A66G,以口腔黏膜细胞提取DNA为模板进行PCR反应,取25uL体系,其包括:模板:2uL、SEQ NO 1:1uL、SEQ NO 2:1uL、10×MSP buffer:2.5uL、20mM dNTP:2ul、Hot start taq:0.3ul、去离子水:16.2uL;模板:2uL、SEQ NO 3:1uL、SEQ NO4:1uL、10×MSP buffer:2.5uL、20mM dNTP:2ul、Hot start taq:0.3ul、去离子水:16.2uL;模板:2uL、SEQ NO 5:1uL、SEQ NO 6:1uL、10×MSP buffer:2.5uL、20mM dNTP:2ul、Hot start taq:0.3ul、去离子水:16.2uL;(3)、将上述3对引物进行普通 ...
【技术特征摘要】
1.一种叶酸代谢相关基因的检测方法,其特征在于:具体步骤如下:(1)、对检测者的口腔黏膜细胞提取DNA;(2)、分别用SEQNO1和SEQNO2扩增MTHFR基因C677T,用SEQNO3和SEQNO4扩增MTHFR基因A1298C,用SEQNO5和SEQNO6扩增MTRR基因A66G,以口腔黏膜细胞提取DNA为模板进行PCR反应,取25uL体系,其包括:模板:2uL、SEQNO1:1uL、SEQNO2:1uL、10×MSPbuffer:2.5uL、20mMdNTP:2ul、Hotstarttaq:0.3ul、去离子水:16.2uL;模板:2uL、SEQNO3:1uL、SEQNO4:1uL、10×MSPbuffer:2.5uL、20mMdNTP:2ul、Hotstarttaq:0.3ul、去离子水:16.2uL;模板:2uL、SEQNO5:1uL、SEQNO6:1uL、10×MSPbuffer:2.5uL、20mMdNTP:2ul、Hotstarttaq:0.3ul、去离子水:16.2uL;(3)、将上述3对引物进行普通PCR扩增产物1%的琼脂糖凝胶电泳;(4)、将1%的琼脂糖凝胶电泳条带用琼脂糖凝胶回收试剂盒回收目的条带;(5)、测序反应:测序反应5ul体系:引物1uL,胶回收产物为模板和水共3ul,bigdye1ul,测序反应条件如下:95℃预变性5min,接着进入循环,95℃变性30s,57℃退火30s,72℃延伸45s,共25个循环,之后,继续...
【专利技术属性】
技术研发人员:韦玉军,李航,崔俊生,苏军,吴远航,
申请(专利权)人:安徽安龙基因医学检验所有限公司,
类型:发明
国别省市:安徽,34
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