用于选择结合配偶体的基于邻近度的方法技术

本发明专利技术提供用于鉴定结合到靶蛋白(例如，细胞受体)的结合配偶体(例如，肽配体)的方法。所述方法包括靶蛋白和候选结合配偶体的共定位表达，以及基于结合配偶体在质膜中的邻近度来选择所述结合配偶体。

Proximity based method for selecting combinations of mates

The present invention provides methods for identification of binding partners (e.g., peptide ligands) that bind to target proteins (e.g., cell receptors). The method comprises the co localization of target proteins and candidate binding partners, and selection of the binding partner based on proximity of the binding partner in the plasma membrane.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于选择结合配偶体的基于邻近度的方法相关申请的交叉引用本专利申请要求美国临时专利申请号62/066,105(2014年10月20日提交)的优先权。在先申请的完整公开内容以引用方式全文并入本文并用于全部目的。
技术介绍
细胞内组合库提供了产生扰乱细胞生理学的新型激动剂和其它分子的巨大前景。然而，需要在大动态范围内定量的通用读出机制。例如，用于鉴定溶液中激动剂的当前选择方法一般根据它们与受体的相互作用来改变其物理状态，使得其激活连接到恶化报告系统的细胞内信号转导结构域。因此，每个报告系统需要独立的构建体，所述构建体的性质取决于关于研究中的系统的细胞和分子生物学的具体信息。此类选择方案不能导致可报告结合事件的系统，尤其是当信号转导的机制未知时。本领域中需要用于基于结合事件选择配体的更加动态和通用的方法。本专利技术解决本领域中的这种和其它未满足的需要。
技术实现思路
本专利技术提供了用于鉴定结合天然细胞环境中的靶多肽的结合配偶体的方法。在一些方法中，靶多肽在细胞中与使用慢病毒载体的候选结合配偶体的组合库共表达。在一些方法中，候选结合配偶体包含切割信号分子的酶，所述信号分子融合到靶多肽，允许向细胞中的合本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于鉴定结合到靶多肽的结合配偶体的方法，所述方法包括：(a)生成表达包含含有第一跨膜结构域(TM)的靶多肽的第一融合分子的第一构建体，和表达各自包含连接至第二跨膜结构域(TM)的候选结合配偶体的第二融合分子的组合库的第二构建体，其中融合分子中的一个还包括酶，并且另一个融合分子还包括酶的底物序列和人工信号通路的活化体，(b)在宿主细胞中表达第一构建体和第二构建体以产生细胞群，其中每个细胞具有共定位于质膜的第一融合分子和第二融合分子，(c)从细胞群中选择其中人工信号通路被激活的细胞，和(d)鉴定所选细胞中的第二融合分子；从而鉴定所述靶多肽的结合配偶体。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.10.20 US 62/066,1051.一种用于鉴定结合到靶多肽的结合配偶体的方法，所述方法包括：(a)生成表达包含含有第一跨膜结构域(TM)的靶多肽的第一融合分子的第一构建体，和表达各自包含连接至第二跨膜结构域(TM)的候选结合配偶体的第二融合分子的组合库的第二构建体，其中融合分子中的一个还包括酶，并且另一个融合分子还包括酶的底物序列和人工信号通路的活化体，(b)在宿主细胞中表达第一构建体和第二构建体以产生细胞群，其中每个细胞具有共定位于质膜的第一融合分子和第二融合分子，(c)从细胞群中选择其中人工信号通路被激活的细胞，和(d)鉴定所选细胞中的第二融合分子；从而鉴定所述靶多肽的结合配偶体。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一跨膜结构域(TM)为所述靶多肽的天然结构域。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一跨膜结构域(TM)与所述靶多肽重组融合。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述酶在其N端连接至所述第二跨膜结构域，并且所述底物序列在其N端连接至所述第一跨膜结构域，并且其C端连接至所述活化体。5.根据权利要求1所述的方法，其中所述底物序列由所述酶切割导致所述活化体从所述第二融合分子释放。6.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶多肽为细胞受体，并且所述结合配偶体为所述受体的配体。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述细胞受体为细胞表面受体，并且所述第二跨膜结构域为PDGFR跨膜结构域。8.根据权利要求6所述的方法，其中所述细胞受体为G-蛋白偶联受体(GPCR)。9.根据权利要求6所述的方法，其中所述细胞受体为TpoR或GLP1R。10.根据权利要求1所述的方法，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：理查德·A·勒纳，张洪凯，谢佳，
申请(专利权)人：斯克利普斯研究院，
类型：发明
国别省市：美国,US