免疫印迹系统和方法技术方案

提供了免疫印迹系统和方法。在一个实施方案中，可通过以下来实现该方法：将抗体溶液施加到具有转移到其上的光学可检测蛋白质和靶蛋白质的膜的表面，其中抗体溶液的施用由从光学可检测蛋白质发射的信号引导；并检测靶蛋白质。也描述并显示了系统和其他方法。

Immunoblot system and method

Immunoblotting systems and methods are provided. In one embodiment, can be achieved by this method: the antibody solution applied to have transferred to the optical surface on the detection of protein and target protein film, the application of antibody solution by signal from the optical detection of protein emission guide; and detect the target protein. Systems and other methods are also described and shown.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉参考本申请要求于2015年1月23日提交的美国临时申请号62/107,131的优先权，其通过引用纳入本文用于所有目的。专利技术背景印迹是用于将大分子从电泳基质转移到膜进行进一步分析的过程。Southern印迹用于DNA分析，Northern印迹用于RNA分析，并且Western印迹用于蛋白质分析。在Western印迹(或免疫印迹)中，通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离样品中的蛋白质，然后通过毛细管作用或电印迹转移到膜(例如，硝酸纤维素或聚偏乙烯)上。蛋白质固定在膜的表面之后，使蛋白质与特异性结合靶蛋白质的一抗接触。然后，例如，通过使一抗与偶联到可检测标记(如荧光标记)的二抗接触来检测结合的一抗。然后通过光学技术(即，测量发射光的技术)使可检测标记物显像。虽然免疫印迹提供了有用的信息，但是该技术是耗时的、需要高水平的技术技能，是试剂密集型，通量有限，并且不太适用于多重化。
技术实现思路
本文公开了免疫印迹系统和使用这种系统的方法。在一个实施方式中，免疫印迹的方法包括将抗体溶液施加到具有转移到其上的光学可检测蛋白质和靶蛋白质的膜的表面，其中抗体溶液的施加由从光学可检测蛋白质发射的信号引导；并检测靶蛋白质。在一些实施方式中，该方法还包括洗涤步骤，其中未结合的材料从膜上除去。在一些实施方式中，抗体溶液施加步骤与洗涤步骤同时进行。在一些实施方式中，将抗体溶液的微流体或亚微流体体积分配到膜的表面上。抗体溶液的施加可以用选自下组的技术进行：流体动力学流动约束(hydrodynamicflowconfinement)，喷墨印刷，喷雾沉积，微点滴定和微接触印刷。在一些实施方式中，用微流体探针分配抗体溶液。在一个实施方式中，微流体探针具有多个微通道。在另一个实施方式中，微流体探针是探针阵列。在一些实施方式中，将抗体溶液分配在膜表面上的至少一个离散路径(discreetpath)中。在一个实施方式中，路径跨越一个或多个蛋白质条带的泳道的长度。在一些实施方式中，路径为25纳米至500微米宽。在某些实施方式中，将抗体溶液分配到至少一个离散斑点(discreetspot)中。在一些实施方式中，施加抗体溶液步骤包括分配一抗溶液和二抗溶液。在一些实施方式中，转移到膜上的光学标记的蛋白质用选自下组的物质标记：荧光染料，比色染料和卤代烷烃。在一个实施方式中，该方法还包括在施加抗体溶液之前将封闭溶液施加到膜的表面。在一些实施方式中，用于免疫印迹的系统包括其上转移有可光学检测的蛋白质的膜；分配器，用于分配抗体溶液；被配置为照亮所述膜的光源；检测器，其被配置为检测所述光学可检测蛋白质；处理器；以及存储器，其包括用于存储指令的数据存储单元，所述指令可由所述处理器执行，并且配置所述系统以根据由所述检测器检测到的光学可检测蛋白质来分配所述抗体溶液。在一些实施方式中，检测器还配置成检测靶蛋白质。在一些实施方式中，系统还包括被配置为检测靶蛋白质的第二检测器。在其它实施方式中，可以使用配置来探测核酸印迹。附图的简要说明图1显示了根据本专利技术的实施方式的免疫印迹系统的示意图。图2显示了具有转移至其上的光学可检测蛋白质和靶蛋白质的膜的俯视图，其中根据本专利技术的实施方式使用微流体探针施加抗体溶液。图3A和3B显示了现有技术的微流体探针。图4显示了具有多个处理液体微通道的微流体探针，其可以连接到单个抗体溶液或根据本专利技术的实施方式的多个抗体溶液。图5显示根据本专利技术的一个实施方式平行连接到单个或多个抗体溶液的多个微流体探针。图6是显示根据本专利技术的实施方式的使用图1的系统将抗体溶液施加到具有光学可检测转移蛋白质的膜的表面的方法的流程图。图7是显示根据本专利技术的实施方式的将核酸探针溶液施加到具有荧光标记的核酸片段的膜的表面的方法的流程图。图8显示了可用于根据本专利技术的实施方式的系统和方法的示例性计算机系统的框图。图9A-9C显示了使用微流体探针和模型靶抗原(例如，人血清抗原，hSA)的免疫印迹结果。图9A显示了在施加一抗之前叠加在印迹照片上的微流体探针的路径。对于hSA条带的通过微流体探针进行的一抗(例如，抗hSA)的施加由与含有hSA的泳道相邻的泳道中预染色分子量标记物引导。图9B显示了将抗hSA施加到hSA条带后的印迹图像。图9C是在微流体探针的路径上的信号强度分布。图10A和10B显示了使用微流体探针和模型靶抗原(例如，hSA)的更多的免疫印迹结果。图10A显示了在施加抗-hSA之后叠加在印迹图像上的微流体探针的路径。对于hSA条带的通过微流体探针进行的抗-hSA的施加由与hSA相同的泳道中的预染分子量标记物引导。图10B是在微流体探针的路径上的信号强度分布。定义术语“可光学检测的蛋白质”是指用发光(例如，荧光，比色，磷光或化学发光)物质标记的蛋白质，当用光照射时，其发射光信号。专利技术详述本文描述了用于免疫印迹的系统和方法。系统和方法有助于免疫印迹的自动化。已经发现免疫印迹的自动化高通量系统和方法可以一次测试多个样品，使用较少量的试剂，并且可以提供快速的测试结果。本文描述的系统和方法的优点包括但不限于：(1)提供自动化或“免手动(hands-free)”的系统；(2)提供使反应化学局部化从而减少反应时间的系统；(3)提供能够进行多重化测试的系统(例如，一次测试多个蛋白质样品或测试多个靶蛋白的单个蛋白质样品)；(4)提供能够实时检测靶蛋白质的系统；(5)提供能够沉积较小体积的试剂(例如，抗体溶液)的系统；(6)提供能够使用转移到膜表面上的光学可检测蛋白质引导向膜表面施加抗体溶液的系统，和/或(7)提供其中抗体溶液的施加和未结合的抗体的去除可同时进行的系统。在本说明书和权利要求书中所用的单数形式“一个”、“一种”和“该”包括多个指示物，除非上下文中有明显的表示。因此，例如，参考包含“抗体溶液”的系统包括包含一种或多种抗体溶液的系统。类似地，参考“光学可检测蛋白质”包括一种或多种光学可检测蛋白质。系统参考图1，显示了用于免疫印迹的系统100。在一个实施方式中，系统100用于将抗体溶液施用于转移有光学可检测蛋白质和靶蛋白质的免疫印迹膜。系统100包括膜102、分配器104、光源106和检测器108。如图2所示，膜102包括从聚丙烯酰胺电泳凝胶转移的一种或多种可光学检测的蛋白质120和靶蛋白质122。在一些实施方式中，膜102安装在可在X-Y和/或Z方向上移动的平台上。在一些实施方式中，膜102是湿的。需要湿或潮湿的膜以在检测靶蛋白质122期间降低背景。用于水合膜102的示例性流体包括但不限于缓冲液，封闭溶液，水和/或盐水。示例性膜材料包括聚偏二氟乙烯、尼龙、聚砜和硝酸纤维素。在一些实施方式中，可光学检测的蛋白质120可以是用荧光染料、比色染料或卤代烷烃(即，卤素取代的有机化合物)标记的蛋白质。一些实施方式使用如美国专利号8,007,646中所述的卤代烷烃，其全部内容通过引用并入本文。示例性荧光染料包括但不限于，表雄酮，2-甲氧基-2，4-二苯基-3(2H)-呋喃酮，钌基染料(例如，红宝石蛋白凝胶染色剂)、花青类染料、基于香豆素的花青染料(例如Bio-RadFlamingoTM)和Bio-RadOrioleTM。示例性比色染料包括本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种免疫印迹的方法，包括：将抗体溶液施加到具有转移到其上的光学可检测蛋白质和靶蛋白质的膜的表面，其中所述抗体溶液的施加由从所述光学可检测蛋白质发射的信号引导；并且检测所述靶蛋白质。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.01.23 US 62/107,1311.一种免疫印迹的方法，包括：将抗体溶液施加到具有转移到其上的光学可检测蛋白质和靶蛋白质的膜的表面，其中所述抗体溶液的施加由从所述光学可检测蛋白质发射的信号引导；并且检测所述靶蛋白质。2.如权利要求1所述的方法，还包括洗涤步骤，其中未结合的材料从膜上除去。3.如权利要求2所述的方法，其中所述抗体溶液的施加步骤与所述洗涤步骤同时进行。4.如权利要求1所述的方法，其中，所述抗体溶液的施加步骤包括分配所述抗体溶液的微流体体积。5.如权利要求1所述的方法，其中，所述抗体溶液的施加步骤包括分配所述抗体溶液的亚微流体体积。6.如权利要求1所述的方法，其中，所述抗体溶液的施加步骤包括用选自下组的技术分配所述抗体溶液：流体动力学流动约束、喷墨印刷、喷雾沉积、微点滴定和微接触印刷。7.如权利要求1所述的方法，其中，所述抗体溶液的施加步骤包括用微流体探针分配所述抗体溶液。8.如权利要求7所述的方法，其中，所述微流体探针包括多个微通道。9.如权利要求7所述的方法，其中所述微流体探针是微流体探针的阵列。10.如权利要求1所述的方法，其中所述抗体溶液的施加步骤包括将抗体溶液分配到所述膜的表面上的至少一个离散路径中。11.如权利要求10所述的方法，其中所述路径跨越一个或多个蛋白质条带的泳道长度。12.如权利要求10所述的方法，其中所述路径为25纳米至500微米宽。13.如权利要求1所述的方法，其中所述抗体溶液的施加步骤包括将2种抗体溶液各自分配到所述膜的表面上的泳道上的离散路径中。14.如权利要求1所述的方法，其中所述抗体溶液的施加步骤包括将抗体溶液分配到至少一个离散斑点中。15.如权利要求1所述的方法，其中所述抗体溶液的施加步骤包括分配一抗溶液和二抗溶液。16.如权利要求1所述的方法，其中所述膜包含选自下组的材料：聚偏二氟乙烯、硝酸纤维素、尼龙和聚砜。17.如权利要求1所述的方法，其中转移到膜上的光学标记的蛋白质用选自下组的物质标记：荧光染料，比色染料和卤代烷烃。18.如权利要求1所述的方法，还包括在施加抗体溶液之前将封闭溶液施加到膜的表面。19.一种免疫印迹系统，其包括：具有转移到其上的光学可检测的蛋白质的膜；配置为分配抗体溶液的分配器；配置为照射所述膜的光源；配置为检测所述光学可检测的蛋白质的检测器；处理器；和存储器，其包括用于存储指令的数据存储单元，所述指令可由所述处理器执行，并且配置所述系统以根据由所述检测器检测到的光学可检测蛋白质来分配所述抗体溶液。20.如权利要求19所述的免疫印迹系统，其中所述检测器还配置成检测靶蛋白质。21.如权利要求19所述的免疫印迹系统，还包括配置成检测靶蛋白质的第二检测器。22.如权利要求19所述的免疫印迹系统，其中所述分配器选自下组：流体动力学流动约束分配器、喷墨打印机、喷雾沉积分配器、微型点阵器和微接触式打印机。23.如权利要求19所述的免疫印迹系统，其中所述分配器是微流体探针。24.如权利要求23所述的免疫印迹系统，其中，所述微流体探针包括多个微通道。25.如权利要求23所述的免疫印迹系统，其中所述微流体探针是微流体探针的阵列。26.一种免疫印迹的方法，包括：将抗体溶液施加到具有转移到其上的含卤代烷基化色氨酸的蛋白质和靶蛋白质的膜的表面，其中所述抗体溶液的施加由所述含卤代烷基化色氨酸的蛋白质的荧光引导；并且检...

【专利技术属性】
技术研发人员：L·宁，
申请(专利权)人：生物辐射实验室股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US