一种快速检测猫疱疹病毒I型的PCR检测试剂盒，包括有包装盒，内衬，在内衬上设有数个定位孔，通过定位孔将试剂管安装定位其内部，所述试剂管包括并列安装的：PCR扩增反应液管，阴性对照管、阳性对照管；PCR扩增反应液管包括正向引物、反向引物、dNTPs、耐热DNA聚合酶、PCR缓冲液和水，具有特异性强、灵敏度高、重复性好等优点。
PCR detection kit for rapid detection of feline herpes virus type I
A box of PCR kit for rapid detection of feline herpes virus type I, including packaging, lining is provided with a plurality of positioning holes on the lining, the reagent tube through the positioning hole mounting and positioning inside the test tube includes parallel installation: PCR amplification tube, negative control, positive control; PCR reaction liquid pipe including forward primer and reverse primers, dNTPs, thermostable DNA polymerase and PCR buffer and water, has the advantages of high specificity, high sensitivity and good repeatability.
【技术实现步骤摘要】
一种快速检测猫疱疹病毒I型的PCR检测试剂盒
本技术涉及病毒检测领域，特别涉及一种快速检测猫疱疹病毒I型的PCR检测试剂盒，适用于猫疱疹病毒I型的流行病学监测、猫疱疹病毒I型的检测及基因工程技术等领域。
技术介绍
猫疱疹病毒1型(Felineherpesvirustype1,FHV1)属于疱疹病毒科，甲型疱疹病毒亚科，由Crandell和Maurer于1958年首次分离到，是猫传染性鼻气管炎的病原。FHV1可引起猫的急性、高度接触性的上呼吸道感染，发病率很高，可达100％。虽然成年猫感染后大多痊愈，病死率很低，但幼仔猫感染后症状严重，病死率可达50％，甚至终生带毒排毒，并可垂直传播，危害很大。猫可较好的耐受麻醉和一般手术,手术时能保持正常血压。在药品的降压物质检查中,猫作为中国药典规定的实验动物,越来越多的被用于形觉波剥夺性弱视、食管病等研究。猫作为实验动物,虽然应用越来越广泛,但国内目前尚未见有开展猫的检测。虽然早在1999年,蒋虹等就建立过猫鼻气管炎病毒血清学检测方法,2010年刘宝山等、林颖等先后以猫传染性鼻气管炎疫苗为模板建立了FHV-1PCR检测方法,但均没有推广开,实验用猫到目前为止也没有标准化规定。目前,实验用猫也多是从商贩或收购型饲养场购买,其来源混杂,遗传、年龄、微生物和寄生虫等携带情况不清,实验重现性差,结果隐存着未知因素的影响。FHV-1是目前已知最重要的猫呼吸道疾病之一,其发病率和死亡率均较高,严重危害猫的健康。猫在患有几种主要疾病时的临床症状相似，并常有混合感染，给诊断造成困难。传统病毒病的诊断需要进行病毒分离，细胞培养，电镜观察以及免疫检测等方法，缺乏对病毒进行快速、准确、敏感的检测方法。PCR方法具有操作简单、特异、快速、敏感等优点，正逐步应用于病原微生物的检测与研究中。鉴于此，本试验建立了FHV1的快速PCR检测试剂盒，为临床检测提供了保障。参考文献:1、蒋虹,时建东,吴小闲.猫病毒血清学检测方法的建立及初步应用[J].中国实验动物学杂志,1999,9(1):39-41.2、刘宝山,林颖,尹荣焕,等.猫疱疹病毒1型PCR检测方法的建立[J].畜牧与兽医,2010,42(1):74-76.3、林颖,刘宝山,任会军,等.猫传染性鼻气管炎PCR检测方法的建立[J].现代畜牧兽医,2010,44(8),71-73.
技术实现思路
为了解决现有技术中存在的问题，本技术的目的是提供一种省时省力，特异性和敏感性优异，猫疱疹病毒I型的PCR检测试剂盒，可用于疱疹病毒I型的早期诊断。该试剂盒的建立和应用对今后开展实验用猫的检测工作及实验用猫标准化研究具有积极的促进作用，同时通过对猫疱疹病毒携带情况的检测，为猫质量控制标准的制定提供参考依据。为实现上述目的，本技术采取的技术方案为：一种快速检测猫疱疹病毒I型的PCR检测试剂盒，包括有包装盒，内衬，在内衬上设有数个定位孔，通过定位孔将试剂管安装定位其内部，所述试剂管包括并列安装的：PCR扩增反应液管，阴性对照管、阳性对照管；优选的，所述的PCR扩增反应液管中包括正向引物、反向引物、dNTPs、耐热DNA聚合酶、PCR缓冲液和水。优选的，所述的阴性对照管中阴性对照为无菌ddH2O；优选的，所述阴性对照管为红色，阳性对照管为蓝色。所述的核苷酸序列为：上游引物为5’-GCGAAGTACCTGGTCAGAGCG-3’；下游引物为5’-TTGCGTAGTGCGTGAATTAGC-3’其中，所述的阳性对照为：分离辉瑞妙三多疫苗605株构建的质粒。所述的阴性对照是蒸馏水。PCR反应程序为：95℃3min；95℃30s,58℃30s,72℃40s,35Cycle；72℃10min；4℃∞。判定结果：如果从待检测的样品中扩增到了518bp片段，则该检测样品含有猫疱疹病毒I型。本技术所述对可能存在于生物样品中的传染病病原体进行检测的试剂盒，对比现有技术的优点在于：(1)检测速度快，效率高，可根据需要检测病原体；(2)以本技术所设计的试剂盒采用PCR检测方法对FHV1进行检测，检测结果均为阳性，而对其他常见猫源性病毒检测结果均为阴性，具有特异性强、灵敏度高、重复性好等优点。(3)操作简单，结果稳定；(4)适用于早期诊断，适用于不明原因发热引起的重大传染疾病的早期快速检测、多种病原体的随机组合检测以及大量样品的检验。本技术所设计的试剂盒在发病猫早期检测和快速诊断中具有重要意义。附图说明图1是本技术的立体示意图，其中，1、包装盒；2、内衬；3、PCR扩增反应液管；4、阴性对照管；5、阳性对照管；图2技术实施例2中的检测结果，其中M代表DNA2000Marker,1代表605株，2代表阴性对照。图3技术敏感性检测的检测结果，M代表DNA2000Marker,1代表00、2代表10-1、3代表10-2、4代表10-3、5代表10-4、6代表10-5、7代表10-6、8代表10-7、9代表10-8、10代表阴性对照。图4技术特异性检测的检测结果，M代表DNA2000Marker，分别是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10样，11代表阴性对照。图5技术重复性检测结果，M代表DNA2000Marker，1、2、3代表一个样的重复具体实施方式以下结合实施例对本技术的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本技术，并非用于限定本技术的范围。实施例1：一种快速检测猫疱疹病毒I型的PCR检测试剂盒，包括有包装盒1，内衬2，在内衬2上设有数个定位孔，通过定位孔将试剂管安装定位其内部，所述试剂管包括并列安装的：PCR扩增反应液管3，阴性对照管4、阳性对照管5；其中，所述的PCR扩增反应液管3中包括正向引物、反向引物、dNTPs、耐热DNA聚合酶、PCR缓冲液和水；所述的阴性对照管4中阴性对照为无菌ddH2O；所述阴性对照管4为红色，阳性对照管5为蓝色；其中，所述的阳性对照为：分离辉瑞妙三多疫苗605株构建的质粒；上游引物为5’-GCGAAGTACCTGGTCAGAGCG-3’；下游引物为5’-TTGCGTAGTGCGTGAATTAGC-3’所述的阴性对照是蒸馏水。PCR反应程序为：95℃3min；95℃30s,58℃30s,72℃40s,35Cycle；72℃10min；4℃∞实施例2：一种快速检测猫疱疹病毒I型的PCR检测试剂盒的使用方法，包括以下步骤：1、核酸的提取选用猫疱疹病毒I型605株为研究对象，用DNAMinikit试剂盒提取DNA。提取流程如下：1.5ml离心管中加入20ul蛋白酶K,再加入200ul分泌物(分泌物+PBS)；加入200ul的AL液，混匀56℃，10min；加入200ul的无水乙醇，混匀；将700ul的液转入2ml的离心柱中，离心，倒掉废液；加入750ulAW1，离心，倒掉废液，加入750ulAW2，离心，倒掉废液，重复此步骤一次，空离2分钟，打开柱子凉分钟；加入50TEbuffer，-80保存。2、PCR检测PCR反应提系30ul,10xbuffer3ul,2.5mMdNTP2ul,上下游引物各1ul，DNA聚合酶0.3ul,提取DNA5ul，ddH2O17.7ul95℃3min；95℃本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种快速检测猫疱疹病毒I型的PCR检测试剂盒，包括有包装盒(1)，内衬(2)，在内衬(2)上设有数个定位孔，通过定位孔将试剂管安装定位其内部，所述试剂管包括并列安装的：PCR扩增反应液管(3)，阴性对照管(4)、阳性对照管(5)；所述的PCR扩增反应液管(3)中包括正向引物、反向引物、dNTPs、耐热DNA聚合酶、PCR缓冲液和水；所述的阴性对照管(4)中阴性对照为无菌ddH2O；所述阴性对照管(4)为红色，阳性对照管(5)为蓝色。
【技术特征摘要】
1.一种快速检测猫疱疹病毒I型的PCR检测试剂盒，包括有包装盒(1)，内衬(2)，在内衬(2)上设有数个定位孔，通过定位孔将试剂管安装定位其内部，所述试剂管包括并列安装的：PCR扩增反应液管(3)，阴性对照管(4)、阳性...
【专利技术属性】
技术研发人员：曹振，赵化芬，王彦兵，高振刚，杨雪松，
申请(专利权)人：中瑞动检北京生物技术有限公司，
类型：新型
国别省市：北京,11
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