定量检测SAA、CRP、PCT的免疫荧光层析试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了定量检测SAA、CRP、PCT的免疫荧光层析试剂盒及其制备方法，包括荧光免疫层析试纸条、荧光物质，所述荧光免疫层析试纸条，底衬上设有硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜的一端衔接有样品垫，硝酸纤维素膜的另一端衔接有吸收垫；所述硝酸纤维素膜上平行设用于检测SAA、CRP、PCT的含量的检测线；所述荧光物质包括偶联了兔IgG多克隆抗体的荧光物质、偶联了配对SAA单克隆抗体的荧光物质、偶联了配对CRP单克隆抗体的荧光物质、偶联了配对PCT单克隆抗体的荧光物质。该试剂盒可以方便、准确且高灵敏度地同时检测SAA、CRP、PCT的含量。

Immunofluorescence chromatography kit for quantitative detection of SAA, CRP and PCT and preparation method thereof

The present invention discloses immune fluorescence tomography kit and preparation method of quantitative detection of SAA, CRP and PCT, including fluorescence immunochromatographic, fluorescent material, the fluorescence immunochromatographic test strip, the bottom lining is arranged on the nitrocellulose membrane, one end of the nitrocellulose membrane connected with the sample pad, nitrocellulose membrane and the other end connected with the absorbing pad; the nitrocellulose membrane is used to detect line parallel to determine the content of SAA, CRP, PCT; the fluorescent substance including coupling fluorescent substance and coupling of rabbit IgG polyclonal antibody of fluorescent material, coupling paired SAA monoclonal antibody fluorescent substance, the coupling paired CRP monoclonal antibody the fluorescent substance paired PCT monoclonal antibody. The kit can conveniently, accurately and sensitively detect the contents of SAA, CRP and PCT simultaneously.

【技术实现步骤摘要】
定量检测SAA、CRP、PCT的免疫荧光层析试剂盒及其制备方法
本专利技术属于生物医药
，尤其涉及一种快速、定量检测试剂，采用荧光微球、量子点等为标记物，以免疫层析方法，配合使用荧光免疫分析仪，实现同时检测人血清、血浆和全血样本中的SAA、PCT、CRP的含量，具体是定量检测SAA、CRP、PCT的免疫荧光层析试剂盒及其制备方法。
技术介绍
血清淀粉样蛋白A(SAA)是一种急性时限反应蛋白，血清淀粉样蛋白A的含量浓度是反映感染性疾病早期炎症的敏感指标，有助于诊断炎症、评估其活性、监控其活动及治疗。C反应蛋白(CRP)是指在机体受到感染或组织损伤时血浆中含量急剧上升的一种急性相蛋白。传统观点认为CRP是一种非特异的炎症标志物，但近十年的研究揭示了CRP直接参与了炎症与动脉粥样硬化等心血管疾病，并且是心血管疾病最强有力的预示因子。降钙素原(PCT)是诊断和监测细菌炎性疾病感染的一个参数。PCT是严重细菌性炎症和真菌感染的特异性指标，而且也是脓毒症和炎症活动有关的多脏器衰竭的可靠指标。研究表明在诊断炎症、感染及相关疾病中，单一的SAA、PCT及CRP项目的检测并不能有效准确的诊断疾病，诊断过程中如果将SAA、CRP及PCT等项目检测结果与临床资料结合，在感染性疾病的诊断上有重要的意义。然而，目前已上市产品中，绝大部分是SAA、CRP及PCT等3个项目的单独检测试剂盒，或者PCT和CRP同时检测试剂盒，还没有SAA、CRP及PCT3个项目同时联检的试剂盒，如果需要同时检测3个项目的结果，需要2-3次的加样及检测操作，如果检测试剂盒要求的标本类型不一样，还需要对患者重复取样，操作上较为繁琐，试剂及耗材的成本上有所浪费，对患者也造成了额外的负担。通过对现有文献的检索发现，天津中新科炬生物制药有限公司申请了3个相关专利技术专利：《一种同时定量检测SAA/PCT/CRP的方法》(申请号为201511018503.2)、《一种同时定量检测SAA/PCT/CRP的检测装置的制备方法》(申请号为201511018504.7)、《一种同时定量检测SAA/PCT/CRP的检测装置》(申请号为201511030398.4)。以上3个专利申请为相似技术，利用互相独立的人血清淀粉样蛋白A(SAA)、人降钙素原(PCT)和C反应蛋白(CRP)检测试纸，三联卡壳和附带了相应判定方法和标准曲线的免疫层析判读结果记录仪，同时快速定量检测SAA/PCT/CRP。但其检测方法为三联卡，需要分别加3次样品，加样量和方法也各不一样，并不能减少试剂及耗材的成本，不能实现真正意义上的联检。且其使用的是胶体金免疫层析法，其SAA、PCT、CRP定量的检测范围分别为5-100mg/L，0.5-20mg/L和1-200mg/L，灵敏度较差，难以满足临床需求。另外，现有技术中还公开了一种定量联合检测PCT/CRP/SAA胶体金试纸条及其应用的检测装置(申请号为201420797771.3)，本专利技术提供的试纸条，其为在底板上依次相互交错地粘贴的样品垫、涂覆有金标抗体的聚酯膜、包被膜及吸水纸，包被膜上设有一条包被兔抗鼠IgG抗体的控制线，包被膜上还设有与所述控制线平行的三条检测线，分别包被能与待检抗原PCT特异性结合的抗体、与待检抗原CRP特异结合的抗体以及与待检抗原SAA特异结合的抗体；所述金标抗体有三种，分别为胶体金标记的能与待检抗原PCT特异性结合的抗体、与待检抗原CRP特异结合的抗体以及与待检抗原SAA特异结合的抗体。该技术在一条试纸条上同时设置三条检测线和一条检测线，同步检测三个指标，经配套免疫荧光分析仪判断结果，灵敏度较差，准确度较低，难以达到临床要求的定量检测要求。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术提供定量检测SAA、CRP、PCT的免疫荧光层析试剂盒及其制备方法。该试剂盒通过荧光免疫层析法，配合使用荧光免疫分析仪，可以方便、准确且高灵敏度地同时检测SAA、CRP、PCT的含量。为实现上述目的，在本专利技术中采取了以下技术方案：一种定量检测SAA、CRP、PCT的免疫荧光层析试剂盒，其特征在于，包括荧光免疫层析试纸条、荧光物质，所述荧光免疫层析试纸条，底衬上设有硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜的一端衔接有样品垫，硝酸纤维素膜的另一端衔接有吸收垫；所述硝酸纤维素膜上平行设有包被了羊抗兔IgG多克隆抗体的质控线、包被了SAA单克隆抗体的检测线、包被了CRP单克隆抗体的检测线和包被了PCT单克隆抗体的检测线；所述荧光物质包括偶联了兔IgG多克隆抗体的荧光物质、偶联了配对SAA单克隆抗体的荧光物质、偶联了配对CRP单克隆抗体的荧光物质和偶联了配对PCT单克隆抗体的荧光物质。进一步的，本专利技术提供一种定量检测SAA、CRP、PCT的免疫荧光层析试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)荧光免疫层析试纸条的制备：在硝酸纤维素膜的靠近吸收垫的一端划上包被了羊抗兔IgG多克隆抗体的质控线、包被了SAA单克隆抗体的检测线、包被了CRP单克隆抗体的检测线和包被了PCT单克隆抗体的检测线，在试纸底衬上粘贴硝酸纤维素膜，在硝酸纤维素膜一端贴上吸收垫，在另一端贴上样品垫，制备成试纸板，然后用切条机将试纸板纵向切成4mm宽的试纸条；2)荧光物质应用溶液的制备：分别将兔IgG多克隆抗体、配对SAA单克隆抗体的荧光物质、配对CRP单克隆抗体和配对PCT单克隆抗体偶联荧光物质得到抗体修饰的荧光物质，再将上述抗体修饰的荧光物质一起稀释至稳定缓冲液中得到荧光物质应用溶液。进一步的，本专利技术提供另一种定量检测SAA、CRP、PCT的免疫荧光层析试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)固相结合荧光物质的样品垫的制备：分别将兔IgG多克隆抗体、配对SAA单克隆抗体的荧光物质、配对CRP单克隆抗体和配对PCT单克隆抗体偶联荧光物质得到抗体修饰的荧光物质，再将上述抗体修饰的荧光物质一起固相结合至样品垫中得到荧光物质样品垫。2)荧光免疫层析试纸条的制备：在硝酸纤维素膜的靠近吸收垫的一端划上包被了羊抗兔IgG多克隆抗体的质控线、包被了SAA单克隆抗体的检测线、包被了CRP单克隆抗体的检测线和包被了PCT单克隆抗体的检测线，在试纸底衬上粘贴硝酸纤维素膜，在硝酸纤维素膜一端贴上吸收垫，然后组合上固相结合荧光物质的样品垫，制备成试纸板，最后用切条机将试纸板纵向切成4mm宽的试纸条。与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：1、本专利技术的定量检测SAA、CRP、PCT的免疫荧光层析试剂盒在试纸条上设有SAA、CRP跟PCT的检测线，能够通过一次加样同步检测SAA、CRP和PCT3个指标，操作简单，能减少试剂及耗材的成本。2、本专利技术的定量检测SAA、CRP、PCT的免疫荧光层析试剂盒基于荧光免疫层析技术，荧光物质上偶联的抗体与样本中的抗原相结合然后再与试纸条上面的抗体相互作用，然后通过荧光分析仪将荧光物质的不同光信号转化为电信号得到不同的样本检测浓度，结果精准，能明显改善传统胶体金法肉眼判读结果导致的准确性差、重复性差和效率低的问题。3、本专利技术的定量检测SAA、CRP、PCT的免疫荧光层析试剂盒采用的荧光免疫法比传统胶体金法灵敏度更高；SAA的检测范围达到0.5～200mg/L，CRP的检测范围达到0本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种定量检测SAA、CRP、PCT的免疫荧光层析试剂盒，其特征在于，包括荧光免疫层析试纸条、荧光物质，所述荧光免疫层析试纸条，其底衬上设有硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜的一端衔接有样品垫，硝酸纤维素膜的另一端衔接有吸收垫；所述硝酸纤维素膜上平行设有包被了羊抗兔IgG多克隆抗体的质控线、包被了SAA单克隆抗体的检测线、包被了CRP单克隆抗体的检测线和包被了PCT单克隆抗体的检测线；所述荧光物质包括偶联了兔IgG多克隆抗体的荧光物质、偶联了配对SAA单克隆抗体的荧光物质、偶联了配对CRP单克隆抗体的荧光物质、偶联了配对PCT单克隆抗体的荧光物质。

【技术特征摘要】
1.一种定量检测SAA、CRP、PCT的免疫荧光层析试剂盒，其特征在于，包括荧光免疫层析试纸条、荧光物质，所述荧光免疫层析试纸条，其底衬上设有硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜的一端衔接有样品垫，硝酸纤维素膜的另一端衔接有吸收垫；所述硝酸纤维素膜上平行设有包被了羊抗兔IgG多克隆抗体的质控线、包被了SAA单克隆抗体的检测线、包被了CRP单克隆抗体的检测线和包被了PCT单克隆抗体的检测线；所述荧光物质包括偶联了兔IgG多克隆抗体的荧光物质、偶联了配对SAA单克隆抗体的荧光物质、偶联了配对CRP单克隆抗体的荧光物质、偶联了配对PCT单克隆抗体的荧光物质。2.根据权利要求1所述的一种定量检测SAA、CRP、PCT的免疫荧光层析试剂盒，其特征在于，所述荧光物质为荧光物质应用溶液或者为固相结合到所述样品垫上的荧光物质。3.根据权利要求2所述的一种定量检测SAA、CRP、PCT的免疫荧光层析试剂盒，其特征在于，所述荧光物质应用溶液包括偶联了兔IgG多克隆抗体的荧光物质、偶联了配对SAA单克隆抗体的荧光物质、偶联了配对CRP单克隆抗体的荧光物质、偶联了配对PCT单克隆抗体的荧光物质和稳定缓冲液。4.根据权利要求3所述的一种定量检测SAA、CRP、PCT的免疫荧光层析试剂盒，其特征在于，所述稳定缓冲液为包含0.5％～5％酪蛋白、1％～10％海藻糖、0.1％～1％吐温-20、0.5％～5％BSA、0.1％～0.5％PVA、0.03％～0.1％NaN3，余量为0.05～0.1mol/L、pH7.4的MES缓冲液。5.根据权利要求4任所述的一种定量检测SAA、CRP、PCT的免疫荧光层析试剂盒，其特征在于，所述稳定缓冲液为3％酪蛋白、5％海藻糖、0.5％吐温-20、3％BSA、0.1％NaN3、0.3％PVA，余量为0.05mol/L、pH7.4的PBS缓冲液。6.根据权利要求2所述的一种定量检测SAA、CRP、PCT的免疫荧光层析试剂盒，其特征在于，所述固相结合到样品垫上的荧光物质为偶联了兔IgG多克隆抗体的荧光物质、偶联了配对SAA单克隆抗体的荧光物质、偶联了配对CRP单克隆抗体的荧光物质和偶联了配对PCT单克隆抗体的荧光物质。7.根据权利要求6所述的一种定量检测SAA、CRP、PCT的免疫荧光层析试剂盒，其特征在于，所述荧光物质固相结合到样品垫上的方法为喷涂。8.根据权利要求1所述的一种定量检测SAA、CRP、PCT的免疫荧光层析试剂盒，其特征在于，所述包被了羊抗兔IgG多克隆抗体的质控线、包被了SAA单克隆抗体的检测线、包被了CRP单克隆抗体的检测线和包被了PCT单克隆抗体的检测线相互间隔为3mm。9.根据权利要求3或6所述的一种定量检测SAA、CRP、PCT的免疫荧光层析试剂盒，其特征在于，所述荧光物质为普通荧光微球或时间分辨荧光微球或量子点。10.根据权利要求9所述的一种定量检测SAA、CRP、PCT的免疫荧光层析试剂盒，其特征在于，所述普通荧光微球为激发波长470nm～490mm、发射波长为525～560nm的荧光微球，系包裹了荧光染料的聚苯乙烯微球。11.根据权利要求9所述的一种定量检测SAA、CRP、PCT的免疫荧光层析试剂盒，其特征在于，所述时间分辨荧光微球为激发波长360nm-420nm、发射波长为615nm的时间分辨荧光微球，系包裹了稀土铕元素的荧光染料聚苯乙烯微球。12.根据权利要求9所...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁培华，梁巍腾，刘云青，高翔，陈志兴，
申请(专利权)人：深圳市惠安生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44