一种健脾温中、散寒止泻的药物组合物中有效成分的测定方法及指纹图谱建立方法技术

本发明专利技术提供了一种健脾温中、散寒止泻的药物组合物中有效成分的测定方法及指纹图谱建立方法，其中，该测定方法包括对照品溶液的制备，供试品溶液的制备，测定的步骤。其中，所述高效液相色谱仪的色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为甲醇，流动相B选自甲酸，磷酸或乙酸，进行梯度洗脱，流动相的流速为0.8-1.2ml/min，柱温25-40℃，检测波长：244～264nm。进一步地，本发明专利技术还提供了利用这种方法建立相应指纹图谱的方法。

A method for the determination of the Jianpi Wenzhong, the effective ingredients of the medicine composition in cold diarrhea and fingerprint establishment method

The present invention provides a method for determination of Jianpi Wenzhong, the effective ingredients of the medicine composition in cold diarrhea and fingerprint method, among them, the method includes preparing a reference solution, test solution preparation, determination steps. The chromatographic conditions the HPLC: chromatographic column with eighteen alkyl silane bonded silica as filler, the mobile phase A was selected from the B mobile phase methanol, formic acid, phosphoric acid or acetic acid, gradient elution, flow rate of mobile phase was 0.8-1.2ml/min, the column temperature is 25-40 DEG C, detection wavelength: 244 ~ 264nm. Furthermore, the invention also provides a method for establishing the corresponding fingerprint spectrum by using the method.

【技术实现步骤摘要】
一种健脾温中、散寒止泻的药物组合物中有效成分的测定方法及指纹图谱建立方法
本专利技术涉及药品检测领域，尤其是涉及一种中成药的高效液相色谱检测。
技术介绍
由丁香、肉桂、荜茇三味中药组成的药物组合物丁桂儿脐贴，具有温中健脾、散寒止泻的功效。《中国药典》中没有记载该品种的质量检测标准。现有的标准中存在不足为：薄层鉴别中丁香、肉桂及荜茇方法各不相同，有机溶剂消耗量大，污染环境，检测时间长，并且完全不能定量，对产品的质量可控性差。中国专利201210035570.5改进了其质量检测的方法，但是该方法侧重于对本药物组合物主要成分的定性鉴别和定量检测，缺乏对药物整体质量的控制。因此，需要提供一种新的、快速、准确并且适合工业化大生产需求的所述药物组合物的质量控制方法。
技术实现思路
为了解决上述至少一个技术问题，本专利技术提供了一种健脾温中、散寒止泻的药物组合物中有效成分的测定方法，以及利用这种方法建立相应指纹图谱的方法。根据本专利技术的一些实施例，一种健脾温中、散寒止泻的药物组合物中有效成分的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)对照品溶液的制备：称取桂皮醛对照品，加甲醇制得对照品溶液。(2)供试品溶液的制备：取所述药物组合物，粉碎，过筛，加入甲醇溶液，提取1～2小时，放至室温，加入甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液。(3)测定法：吸取对照品溶液和供试品溶液，注入高效液相色谱仪，得到色谱图，其中，高效液相色谱仪的色谱条件如下：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：流动相A为甲醇，流动相B选自甲酸，磷酸或乙酸，进行梯度洗脱，梯度程序如下表流动相的流速为0.8-1.2ml/min，柱温25-40℃，检测波长：244～264nm。本专利技术所选择的检测条件是经过实验反复比较和验证的，和现有技术比较，具有准确度高，可以实现半定量测定的特点。根据本专利技术的实施方式之一，其中，步骤(1)中对照品溶液中桂皮醛的浓度0.1mg/ml。根据本专利技术的另一实施方式，其中，步骤(1)和(2)中甲醇的浓度为70～100％。优选地，步骤(1)和(2)中甲醇的浓度分别为100％和75％。根据本专利技术的又一实施方式，其中，步骤(2)中所述药物组合物经粉碎、过筛后加入甲醇，使得每100ml提取溶剂中所含药粉为1g～5g。根据本专利技术的另一实施方式，步骤(2)中提取方法为加热回流提取。根据本专利技术，步骤(3)中流动相B的浓度为0.2％。进一步地，流动相B可以为0.2％甲酸。根据本专利技术的实施方式之一，最优选的梯度洗脱程序可以为：根据本专利技术的实施方式之一，色谱柱为AgilentZORBAXSB-C18柱。根据本专利技术的优选实施方式，色谱柱的柱温优选30℃。根据本专利技术的优选实施方式，流动相的流速优选1ml/min。根据本专利技术的优选实施方式，检测波长优选为254nm。根据本专利技术的另一方面，一种健脾温中、散寒止泻的药物组合物高效液相指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：(1)对照品溶液的制备：称取桂皮醛对照品，加入浓度为70～100％的甲醇制得对照品溶液。(2)供试品溶液的制备：取所述药物组合物，粉碎，过筛，加入浓度为70～100％的甲醇溶液，使得每100ml提取溶剂中所含药粉为1g～5g，加热回流提取1-2小时，放至室温，加入浓度为70～100％的甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液。(3)获得色谱图：以对照品溶液作为参照物，将供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图，其中，所述高效液相色谱仪的色谱条件如下：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为甲醇，流动相B选自甲酸，磷酸或乙酸，进行梯度洗脱，梯度程序如下表流动相的流速为0.8-1.2ml/min，柱温25-40℃，检测波长为244～264nm。(4)生成对照指纹图谱：选择合格的多批所述药物组合物色谱图，以桂皮醛为参比峰，得到12个共有峰的图谱，按中位数法计算生成标准对照指纹图谱，其中，指纹图谱相对保留时间为：专利技术人发现，桂皮醛色谱峰在供试品指纹图谱中峰面积所占比例相对较大，且经多个样品实测，结果显示其相对稳定，因此选定6号峰桂皮醛作为丁桂儿脐贴指纹图谱的参照物。本专利技术所得标准指纹图谱参见附图23。本专利技术第一次采取HPLC指纹图谱对该品种进行检测，经过对流动相和梯度洗脱条件等方法进行优化，使得图谱的主峰分离良好，同时对照峰的峰形也明显变好，可以全面控制本品的整体质量，同时满足工业化大生产的要求。通过本专利技术提供的方法建立的该品种标准指纹图谱，可以为本品种的国际化提供良好的质量标准。本专利技术附加的方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。附图说明本专利技术的上述和/或附加的方面和优点从下面结合附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：图1根据本专利技术提供方法所得对照品指纹图谱；图2根据本专利技术实施例所得供试品指纹图谱；图3根据本专利技术实施例210～350nm待测样品色谱图；图4根据本专利技术不同波长下待测样品色谱图；图5不同浓度和种类的提取溶剂所得供试品色谱图；图6不同提取方式所得供试品色谱图；图7不同提取时间所得供试品色谱图；图8不同品牌色谱柱所得供试品色谱图；图9不同柱温所得供试品色谱图；图10不同流速所得供试品色谱图；图11确定色谱信息采集时间所得供试品色谱图；图12采用乙腈-水流动相所得供试品色谱图；图13采用甲醇-水流动相所得供试品色谱图；图14采用甲醇-0.2％甲酸流动相所得供试品色谱图；图15采用甲醇-0.2％磷酸流动相所得供试品色谱图；图16采用甲醇-0.2％乙酸流动相所得供试品色谱图；图17系统适用性试验指纹图谱；图18重复性试验指纹图谱；图19中间精密度试验指纹图谱；图20稳定性试验指纹图谱；图21仪器耐用性试验指纹图谱；图22色谱柱耐用性试验指纹图谱；图23根据本专利技术所提供的标准指纹图谱。具体实施方式下面详细描述本专利技术的实施例。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本专利技术，而不能解释为对本专利技术的限制。实施例1指纹图谱建立1.1仪器Agilent1260高效液相色谱仪，岛津LC-20AT高效液相色谱仪，Agilent1200高效液相色谱仪，色谱柱(AgilentZORBAXSB-C18，4.6×250mm，5μm，S/N:USCL060354)，色谱柱(AgilentZORBAXSB-C18，4.6×250mm，5μm，S/N:USCL058060)，色谱柱(AgilentZORBAXSB-C18，4.6×250mm，5μm，S/N:USCL036549)，色谱柱(AgilentZORBAXSB-C18，4.6×250mm，5μm，S/N:USCL059648)，色谱柱(PhenomenexGemiriC18，4.6×250mm，5μm，S/N:695685-14)，色谱柱(ThermoODS-2HYPERSIL，4.6×250mm，5μm，S/N:0905415N4)，色谱柱(InertsilODS-3，4.6×250mm，5μm，S/N:1A7143425)，色谱柱(UnitaryC18，4.6×250mm，5μm，S/N:Z2013112901)。1.2试剂试剂：甲酸(AR，国药集团化学试本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种健脾温中、散寒止泻的药物组合物中有效成分的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)对照品溶液的制备称取桂皮醛对照品，加甲醇制得对照品溶液；(2)供试品溶液的制备取所述药物组合物，粉碎，过筛，加入甲醇溶液，提取1～2小时，放至室温，加入甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液；(3)测定法：吸取所述对照品溶液和所述供试品溶液，注入高效液相色谱仪，得到色谱图，其中，所述高效液相色谱仪的色谱条件如下：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为甲醇，流动相B选自甲酸，磷酸或乙酸，进行梯度洗脱，梯度程序如下表

【技术特征摘要】
1.一种健脾温中、散寒止泻的药物组合物中有效成分的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)对照品溶液的制备称取桂皮醛对照品，加甲醇制得对照品溶液；(2)供试品溶液的制备取所述药物组合物，粉碎，过筛，加入甲醇溶液，提取1～2小时，放至室温，加入甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液；(3)测定法：吸取所述对照品溶液和所述供试品溶液，注入高效液相色谱仪，得到色谱图，其中，所述高效液相色谱仪的色谱条件如下：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为甲醇，流动相B选自甲酸，磷酸或乙酸，进行梯度洗脱，梯度程序如下表流动相的流速为0.8-1.2ml/min，柱温25-40℃，检测波长：244～264nm。2.根据权利要求1所述的测定方法，其中，步骤(1)中所述对照品溶液中桂皮醛的浓度0.1mg/ml。3.根据权利要求1所述的测定方法，其中步骤(1)和(2)中甲醇的浓度为70～100％。4.根据权利要求3所述的测定方法，其中步骤(1)和(2)中甲醇的浓度分别为100％和75％。5.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤(2)中所述药物组合物经粉碎、过筛后加入甲醇，使得每100ml提取溶剂中所含药粉为1g～5g。6.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤(2)中提取方法为加热回流提取。7.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤(3)中流动相B的浓度为0.2％。8.根据权利要求7所述的测定方法，其特征在于，所述步骤(3)中流动相B为0.2％甲酸。9.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，色谱柱为AgilentZORBAXSB-C18柱。10.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，柱温优选30℃。11.根据权利要求1所述的测定方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：周海燕，周丽娟，
申请(专利权)人：亚宝药业集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山西,14