一种远志药材指纹图谱及指标性成分含量测定的方法技术

本发明专利技术涉及一种远志药材指纹图谱及指标性成分含量测定的方法，包括如下步骤：步骤1：采用超高效液相全波长可见紫外检测法，建立远志药材的指纹图谱；步骤2：利用液质联用技术对步骤1中指纹图谱的色谱峰进行指认，确定紫外检测共有的指纹峰及非共有峰；步骤3：采用超高效液相全波长可见紫外检测法对步骤2中指认出的10个具有神经保护、镇静安神、抗抑郁或抗老年痴呆等活性，且结构明确的指标性成分进行含量测定。

【技术实现步骤摘要】
一种远志药材指纹图谱及指标性成分含量测定的方法
本专利技术属于中药分析及中药材含量测定领域，具体涉及一种远志药材指纹图谱及指标性成分含量测定的方法。
技术介绍
远志PolygalatenuifoliaWilld.，最早记载于《神农本草经》，列为上品，并被视为养命要药。性温，味苦、辛，具有安神益智、祛痰消肿等功效。经现代研究发现，远志药材的主要有效成分包括皂苷类、糖酯类、口山酮类及生物碱类等，具有抑菌、抗炎、提高认知、改善记忆能力、抗老年痴呆、抗抑郁、抗肿瘤、抗衰老等药理作用。中药材药效的强弱与药材质量的优劣密切相关，而药材质量的优劣与药材中所含主要化学成分含量的高低紧密相关。中药材中多种已知或未知的化学成分，通过多条途径作用于多靶点发挥其药理作用。目前关于远志药材的定性分析，主要为指纹图谱分析，但之前建立的方法耗时较长，损耗试剂较多，不利于高通量分析，对于复杂成分的指认也不充分；对远志药材中化学成分的定量分析，主要集中于个别成分为指标的测定，单一指标成分难以准确、全面地体现中药材的内在质量，中药多指标质量控制和评价模式需要有各种成分的对照品，但部分中药对照品分离难度大、单体不稳定、难以供应或供应价格高等问题的存在，使其不能满足中药质量监控和新药研发等方面的需求，目前远志药材中已测定含量的化合物数量较少。故针对上述复杂成分指认不充分以及定量化学成分较少等缺陷，本专利技术提供一种远志药材指纹图谱及指标性成分含量测定的方法，该方法能够较全面地对远志药材中化合物进行定性及定量分析。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种远志药材指纹图谱及指标性成分含量测定的方法，该方法能够较全面地对远志药材中化合物进行定性及定量分析。为实现上述目的，本专利技术提供的技术方案为：一种远志药材指纹图谱及指标性成分的含量测定方法，步骤如下：步骤1：采用超高效液相(UltraPerformanceLiquidChromatography，UPLC)全波长可见紫外检测法，建立远志药材的指纹图谱；混合对照品溶液的制备：分别称取各对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，定容至lancerin、sibiricaxanthoneB、glomeratoseA、7-O-methylmangiferin、polygalaxanthoneIII终浓度为1-100μg/mL，sibiricoseA5、sibiricoseA6、tenuifolisideC终浓度为100-300μg/mL，3，6′-disinapoylsucrose、tenuifolisideA终浓度为300-500μg/mL，摇匀，即得混合对照品溶液，并置于4℃冰箱中备用；供试品溶液的制备：取远志药材粉碎并过药典三号筛，取远志药材粉末约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密移取70％甲醇溶液20mL，称定重量，超声处理30min(功率500W，频率40kHz)，放至室温，再称定重量，用70％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，过0.22μm微孔滤膜，即得；指纹图谱的测定：分别精密吸取混合对照品溶液和供试品溶液各2-10μL，注入超高效液相色谱仪，记录色谱图，采用国家药典委员会推荐的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》生成远志药材指纹图谱；其中，色谱条件如下：色谱柱：UPLCC18柱或T3柱；流动相：流动相A为乙腈，流动相B为体积浓度为0.1-1.0％的甲酸水溶液；洗脱梯度：0-3min，5-10％A；3-6min，10-12％A；6-16min，12-22％A；16-17min，22％A；17-22min，22-27％A；22-25min，27-32％A；25-27min，32-35％A；27-30min，35％A；30-36min，35-40％A；36-37min，40-100％A；37-39min，100-5％A。进样量：2-10μL；柱温：20-40℃；流速：0.2-0.5mL/min；检测波长：290-330nm；步骤2：利用液质联用技术对步骤1中指纹图谱的色谱峰进行指认，确定紫外检测共有的指纹峰及非共有峰，其中液相色谱条件同步骤1，质谱条件如下：离子源：电喷雾离子源(ESI)；扫描方式：正负离子同时扫描；喷雾电压：3.5kV；鞘气流速：35psi(1psi≈6.9kPa)；辅助气流速：10psi；毛细管温度：320℃；探头加温器温度：300℃；最大喷雾电流：100A；S-Lens分辨率：55；扫描范围：m/z100-2000；质量分辨率：70000；步骤3：从步骤2中指认出的23个共有峰中筛选出8个指标性成分(sibiricoseA5、sibiricoseA6、sibiricaxanthoneB、glomeratoseA、polygalaxanthoneIII、3，6′-disinapoylsucrose、tenuifolisideA、tenuifolisideC)，从15个非共有峰中筛选出2个指标性成分(lancerin、7-O-methylmangiferin)，采用超高效液相全波长可见紫外检测法对上述10个指标性成分进行含量测定；测定方法为：分别精密吸取上述混合对照品溶液和供试品溶液各2-10μL，注入超高效液相色谱仪，确定各待测成分的色谱峰，并将混合对照品溶液逐级稀释，建立10个指标性成分的线性回归方程，分别计算供试品溶液中如上所述10个化合物的含量；其中，色谱条件同步骤1。进一步，步骤1和3中流动相B为体积浓度为0.1％的甲酸水溶液；进样量：2μL；柱温：40℃；流速：0.4mL/min；检测波长：320nm。相比于现有技术，本专利技术通过UPLC“指纹图谱定性+指标性成分定量”的方式，从整体和关键组分两方面共同实现质控标准的提升，不仅全面而特定定量的确定了产品的质量可控性，而且由于UPLC技术的引入，大大缩短了现有的普遍采用HPLC技术的测定时间，使得远志药材指纹图谱的复杂性表征得以实现。附图说明图1为本专利技术提供的7批远志药材指纹图谱及标准指纹图谱；其中样品1-7编号见表1，R为对照指纹图谱；图2为远志样品的液质色谱图；图中：A：紫外色谱图；B：正离子模式下总离子流色谱图；C：负离子模式下总离子流色谱图；图3为混合对照品溶液的UPLC色谱图；图4为远志药材供试品溶液的UPLC色谱图；图3、图4中：1为sibiricoseA5，2为sibiricoseA6，3为lancerin，4为sibiricaxanthoneB，5为glomeratoseA，6为7-O-methylmangiferin，7为polygalaxanthoneIII，8为3，6′-disinapoylsucrose，9为tenuifolisideA，10为tenuifolisideC)具体实施方式以下实施例用于说明本方法，但不用来限制本专利技术的范围。为了更好地理解本
技术实现思路
，下面结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步说明。实施例1步骤1：采用超高效液相全波长可见紫外检测法，建立远志药材的指纹图谱；1.试验材料、仪器与试剂试验材料：所用远志药材样本是从山西省不同产地收集到的7批远志药材全根，用手揉搓，抽去木心，得到远志筒，粉碎，过药典三号筛，备用。试验材料具体信息见表1。表1远志样品信息表仪器：超高效液相本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种远志药材指纹图谱及指标性成分含量测定的方法，其特征在于，步骤如下：步骤1：采用超高效液相全波长可见紫外检测法，建立远志药材的指纹图谱；混合对照品溶液的制备：分别称取各对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，定容至lancerin、sibiricaxanthone B、glomeratose A、7‑O‑methyl mangiferin、polygalaxanthone III终浓度为1‑100μg/mL，sibiricose A5、sibiricose A6、tenuifoliside C终浓度为100‑300μg/mL，3，6′‑disinapoyl sucrose、tenuifoliside A终浓度为300‑500μg/mL，摇匀，即得混合对照品溶液，并置于4℃冰箱中备用；供试品溶液的制备：取远志药材粉碎并过药典三号筛，取远志药材粉末约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密移取70％甲醇溶液20mL，称定重量，超声处理30min(功率500W，频率40kHz)，放至室温，再称定重量，用70％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，过0.22μm微孔滤膜，即得；指纹图谱的测定：分别精密吸取供试品溶液各2‑10μL，注入超高效液相色谱仪，记录色谱图，采用国家药典委员会推荐的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》生成远志药材指纹图谱；其中，色谱条件如下：色谱柱：UPLC C18柱或T3柱；流动相：流动相A为乙腈，流动相B为体积浓度为0.1‑1.0％的甲酸水溶液；洗脱梯度：0‑3min，5‑10％A；3‑6min，10‑12％A；6‑16min，12‑22％A；16‑17min，22％A；17‑22min，22‑27％A；22‑25min，27‑32％A；25‑27min，32‑35％A；27‑30min，35％A；30‑36min，35‑40％A；36‑37min，40‑100％A；37‑39min，100‑5％A。进样量：2‑10μL；柱温：20‑40℃；流速：0.2‑0.5mL/min；检测波长：290‑330nm；步骤2：利用液质联用技术对步骤1中指纹图谱的色谱峰进行指认，确定紫外检测共有的指纹峰及非共有峰，其中液相色谱条件同步骤1，质谱条件如下：离子源：电喷雾离子源(ESI)；扫描方式：正负离子同时扫描；喷雾电压：3.5kV；鞘气流速：35psi(1psi≈6.9kPa)；辅助气流速：10psi；毛细管温度：320℃；探头加温器温度：300℃；最大喷雾电流：100A；S‑Lens分辨率：55；扫描范围：m/z 100‑2000；质量分辨率：70000；步骤3：从步骤2中指认出的23个共有峰中筛选出8个指标性成分(sibiricose A5、sibiricose A6、sibiricaxanthone B、glomeratose A、polygalaxanthone III、3，6′‑disinapoyl sucrose、tenuifoliside A、tenuifoliside C)，从15个非共有峰中筛选出2个指标性成分(lancerin、7‑O‑methyl mangiferin)，采用超高效液相全波长可见紫外检测法对上述10个指标性成分进行含量测定；测定方法为：分别精密吸取上述混合对照品溶液和供试品溶液各2‑10μL，注入超高效液相色谱仪，确定各待测成分的色谱峰，并将混合对照品溶液逐级稀释，建立10个指标性成分的线性回归方程，分别计算供试品溶液中如上所述10个化合物的含量；其中，色谱条件同步骤1。...

【技术特征摘要】
1.一种远志药材指纹图谱及指标性成分含量测定的方法，其特征在于，步骤如下：步骤1：采用超高效液相全波长可见紫外检测法，建立远志药材的指纹图谱；混合对照品溶液的制备：分别称取各对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，定容至lancerin、sibiricaxanthoneB、glomeratoseA、7-O-methylmangiferin、polygalaxanthoneIII终浓度为1-100μg/mL，sibiricoseA5、sibiricoseA6、tenuifolisideC终浓度为100-300μg/mL，3，6′-disinapoylsucrose、tenuifolisideA终浓度为300-500μg/mL，摇匀，即得混合对照品溶液，并置于4℃冰箱中备用；供试品溶液的制备：取远志药材粉碎并过药典三号筛，取远志药材粉末约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密移取70％甲醇溶液20mL，称定重量，超声处理30min(功率500W，频率40kHz)，放至室温，再称定重量，用70％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，过0.22μm微孔滤膜，即得；指纹图谱的测定：分别精密吸取供试品溶液各2-10μL，注入超高效液相色谱仪，记录色谱图，采用国家药典委员会推荐的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》生成远志药材指纹图谱；其中，色谱条件如下：色谱柱：UPLCC18柱或T3柱；流动相：流动相A为乙腈，流动相B为体积浓度为0.1-1.0％的甲酸水溶液；洗脱梯度：0-3min，5-10％A；3-6min，10-12％A；6-16min，12-22％A；16-17min，22％A；17-22min，22-27％A；22-25min，27-32％A；25-27min，32-35％A；27-30min，35％A；30-36min，35-40％A；36-37m...

【专利技术属性】
技术研发人员：张福生，王丹丹，闫艳，秦雪梅，张丽增，
申请(专利权)人：山西大学，
类型：发明
国别省市：山西,14