一种透性化细胞制备茶氨酸的方法技术

本发明专利技术公开了一种透性化细胞制备茶氨酸的方法，包括（1）制备透性化细胞：首先将含胞内谷氨酰胺酶的菌株进行培养，培养好后离心，收集菌体；用pH9.0‑10.0的0.1 M硼砂缓冲液清洗菌体后，将菌体加入到处理试剂中进行处理，然后离心收集菌体；再用pH9.0‑10.0的0.1 M硼砂缓冲液清洗菌体，收集菌体，即得到透性化细胞；（2）透性化细胞转化法制备天然茶氨酸。本发明专利技术的有益效果：方法简便，透性化细胞表观酶活力提高，表现出比游离酶更高的催化合成茶氨酸的活性。所得透性化细胞的酶活达可达到未渗透细胞的5‑10倍。透性化细胞可以重复使用，可显著降低生产成本。

【技术实现步骤摘要】
一种透性化细胞制备茶氨酸的方法
本专利技术涉及一种利用产胞内谷氨酰胺酶的菌体透性化细胞制备茶氨酸的方法。
技术介绍
茶氨酸(L-theanine)天然存在，是茶叶特有的一种氨基酸。由于其具有降血压、抗肿瘤、保护神经、放松、抗抑郁、抗疲劳、提高免疫力、减轻体脂等多种生理功能，在食品、保健品方面有着广泛的需求和应用，因此研究者们致力于研究一种可大规模生产，不受资源限制的生产方法。微生物酶法具有环境污染小、生产周期短、不受资源限制、可大规模生产等优点。目前报道了微生物来源的谷氨酰胺酶酶法生产茶氨酸的方法，如来自硝基还原假单胞菌、假单孢菌属、以及2005年公开的来自香茅醇假单孢菌GEA和2007年公开的来自芽孢杆菌属、霉菌或酵母菌中的1种或2种以上的谷氨酰胺酶，还有2008年公开了一种利用来自枯草芽孢杆菌的谷氨酰转肽酶生产茶氨酸的方法，在实际生产过程中，发现利用产胞内酶的菌体细胞进行细胞转化来制备茶氨酸不需要对酶液进行提纯与浓缩处理、不存在发酵液成分带入导致后处理工艺复杂的问题，但是仍旧存在成本高的问题，致使产品价格居高不下，限制了产品的应用。细胞透性化技术可以不造成细胞裂解以及不破坏细胞内本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种透性化细胞制备茶氨酸的方法，其特征是：（1）制备透性化细胞：首先将含胞内谷氨酰胺酶的菌株进行培养，培养好后离心，收集菌体；用pH9.0‑10.0的0.1 M硼砂缓冲液清洗菌体后，将菌体加入到处理试剂中进行处理，然后离心收集菌体；再用pH9.0‑10.0的0.1 M硼砂缓冲液清洗菌体，收集菌体，即得到透性化细胞；（2）透性化细胞转化法制备天然茶氨酸：将步骤（1）得到的透性化细胞置于含0. 2～0. 4M谷氨酰胺和1.5～ 2.5M乙胺盐酸盐的pH 为9～10的50～100mM硼酸缓冲液中，在35～40℃下进行2～8小时的酶反应，制备得到茶氨酸。

【技术特征摘要】
1.一种透性化细胞制备茶氨酸的方法，其特征是：（1）制备透性化细胞：首先将含胞内谷氨酰胺酶的菌株进行培养，培养好后离心，收集菌体；用pH9.0-10.0的0.1M硼砂缓冲液清洗菌体后，将菌体加入到处理试剂中进行处理，然后离心收集菌体；再用pH9.0-10.0的0.1M硼砂缓冲液清洗菌体，收集菌体，即得到透性化细胞；（2）透性化细胞转化法制备天然茶氨酸：将步骤（1）得到的透性化细胞置于含0.2～0.4M谷氨酰胺和1.5～2.5M乙胺盐酸盐的pH为9～10的50～100mM硼酸缓冲液中，在35～40℃下进行2～8小时的酶反应，制备得到茶氨酸。2.根据权利要求1所述的一种透性化细胞制备茶氨酸的方法，其特征是：将菌体加入到处理试剂中进行处理，是将菌体加入...

【专利技术属性】
技术研发人员：帅玉英，夏道宗，华颖，
申请(专利权)人：浙江中医药大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33