一种基于散射比浊技术的红细胞渗透脆性测定方法技术

本发明专利技术公开一种基于散射比浊技术的红细胞渗透脆性测定方法，包括以下步骤：在散射比浊分析模组的比色杯中，加入低压渗透的缓冲盐溶液；往上述比色杯中加入红细胞，搅拌混匀后，测定混合液的散射值A0；在混合液发生溶血后，达到溶血平衡状态前，测定混合液的散射值A1；根据公式：溶血率%=（A0‑A1）/A0×100%，计算溶血率，输出结果。本发明专利技术方法采用散射比浊技术，一步实现红细胞渗透脆性的测定，操作简单、测量时间短，样品无需进行前处理，测试过程中无需离心，易于实现全自动化检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及血液病检测领域，主要涉及一种基于散射比浊技术的红细胞渗透脆性测定方法。
技术介绍
红细胞渗透脆性：正常的红细胞为双凹圆盘形，若将红细胞置于低渗溶液中，因细胞内外存在渗透压差，水分子进入红细胞，使其发生肿胀，乃至红细胞破裂而发生溶血。红细胞在低渗盐溶液中出现溶血的特征即为红细胞渗透脆性（尚红、王毓三、申子瑜，全国临床检验操作规程（第4版）[M].北京:人民卫生出版社,2015.66）。目前临床上对红细胞渗透脆性的测定方法主要有以下三种：1、红细胞渗透脆性试验：本法为传统的手工法，其测量方法为：配制浓度分别为2.0g/L、2.4g/L、2.8g/L、3.2g/L、3.6g/L、4.0g/L、4.4g/L、4.8g/L、5.2g/L、5.6g/L、6.0g/L、6.4g/L、6.8g/L、7.2g/L的NaCl溶液。然后往上述14个浓度的NaCl溶液中各加入1滴全血，轻轻摇匀后，静置2小时，从高浓度开始观察全部14管溶液的溶血现象。结果判定：上清液初现浅红色，底部尚有大量未溶血细胞者为开始溶血管；全管溶液皆呈透明的深红色，底部无残余的红细胞者为完全溶血管。该方法要使用14支试管，配14种不同浓度的氯化钠溶液，要等待2小时。使用肉眼判断，准确性低；2、一管法：该方法是在传统的红细胞渗透脆性试验的手工法的基础上改良的一种方法，其原理是通过测定红细胞的溶血率来判定红细胞的渗透脆性。具体测量方法如下：取两份等量的红细胞悬浮液分别置于某特定浓度的低渗盐溶液和溶血剂中，混匀后，37℃温浴5min后，分别测定两份溶液的吸光度A和C。溶血率%=（1-A/C）×100%。由于该方法只使用两管溶液，测量时间为5min，相对于传统手工法的2小时大为降低，全血经预处理后，可以使用全自动生化分析仪进行测定，精密度得到进一步的提高，该法目前已成为大多数医院接受红细胞渗透脆性的主流测定方法；3、透射比浊动态分析法：在有自动恒温和自动记录的分光光度计的比色杯中，加入一定量的低渗液，待比色杯内溶液恒定在预定的温度后，加入一定量血液样本，快速混匀后，马上开始记录在某特定波长测定下每一单位时间的吸光度值，以吸光度不再下降为反应终点，从而得到吸光度的动态变化值(A1、A2、A3...Az)。第i秒至第想秒的相对溶血率为（Ai-Ax）/Ai×100%。进而计算出反应中某一时间段里前一测定点至后一测定点的相对溶血率。以时间为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制出可反映溶血变化的动态曲线图，根据图形的编号特征可对样品的红细胞脆性进行相关分析（潘于华，一种红细胞渗透脆性的测定方法]:中国，CN 1268928C[P].2006-8-9）。上述方法中，传统手工法，使用14管低渗液进行测试，需手工加样，操作繁琐，测量时间长（2小时），而且需要通过肉眼判断，容易受人为的主观因素影响，结果的重复性和准确性差。一管法实质上使用了两管溶液，需要手工对全血进行前处理方能上机测试，操作繁琐，测量时间大于10分钟，另外，该法测得的结果只是反应了未完全溶血的吸光度与完全溶血吸光度的比率，并非真正的溶血率。透射比浊动态分析法需要将低渗液预热值预定的反应温度37℃，需要记录从反应开始至反应终点的所有吸光度值，即需要等待反应结束才能出结果，测量时间长，另外需要绘制溶血变化的动态曲线图，根据图形的变化特征对样本的红细胞脆性进行分析，分析方法繁琐。因此，现有技术还有待于改进和发展。
技术实现思路
鉴于上述现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种基于散射比浊技术的红细胞渗透脆性测定方法，旨在解决现有红细胞渗透脆性的测定方法存在操作繁琐、时间长或准确性低的问题。本专利技术的技术方案如下：一种基于散射比浊技术的红细胞渗透脆性测定方法，其中，包括以下步骤：在散射比浊分析模组的比色杯中，加入低压渗透的缓冲盐溶液；往上述比色杯中加入红细胞，搅拌混匀后，测定混合液的散射值A0；在混合液发生溶血后，达到溶血平衡状态前，测定混合液的散射值A1；根据公式：溶血率%=（A0-A1）/A0×100%，计算溶血率，输出结果。所述的基于散射比浊技术的红细胞渗透脆性测定方法，其中，所述低渗透压的缓冲盐溶液是电导率为6.5～7.0mS/cm、pH值为7.0-7.4的NaCl或其他盐的缓冲盐溶液。所述的基于散射比浊技术的红细胞渗透脆性测定方法，其中，血细胞与低渗透压缓冲盐溶液的混合体积比例为1:100～500。所述的基于散射比浊技术的红细胞渗透脆性测定方法，其中，搅拌混匀的方式为磁力搅拌混匀方式或搅拌棒混匀方式。所述的基于散射比浊技术的红细胞渗透脆性测定方法，其中，散射比浊分析模组的光源为激光，激光的波长为600nm～800nm。所述的基于散射比浊技术的红细胞渗透脆性测定方法，其中，测定方法的步骤如下：在散射比浊分析模组的比色杯中，加入1.0mL含有0.35%NaCl的缓冲盐溶液；往上述比色杯中加入3uL红细胞，搅拌混匀后，测定混合液的散射值A0；等待30S后，测定混合液的散射值A1；根据公式：溶血率%=（A0-A1）/A0×100%，计算溶血率，输出结果。有益效果：本专利技术的基于散射比浊技术的红细胞渗透脆性测定方法，具有以下优点：一步实现红细胞渗透脆性的测定，操作简单测量时间短；反应的是在溶血过程中的某一段时间内，混合液散射值下降的速率，反应的是真正意义的溶血率；样品无需进行前处理，测试过程中无需离心，易于实现全自动化检测。附图说明图1为红细胞溶血过程中混合液的散射值变化曲线。具体实施方式本专利技术提供一种基于散射比浊技术的红细胞渗透脆性测定方法，为使本专利技术的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本专利技术进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。散射比浊技术是指光沿水平轴照射时，碰到小颗粒的免疫复合物可导致光散射，散射光的强度与复合物的含量成正比。在体外诊断领域，目前散射比浊法只应用于免疫分析，即：将抗体吸附在大小合适（100-200nm）、均匀一致的胶乳微球颗粒上，当遇到相应的抗原时，则使胶乳颗粒发生凝集，单个胶乳颗粒在入射光波之内不阻碍光线透过，散射光比较少，两个或两个以上胶乳颗粒凝集时则使散射光增加，散射光增加的程度与胶乳颗粒凝集的程度成正比，也即与待测抗原量呈正比。（唐秋艳、王云龙、陈兴业免疫诊断试剂实用技术[M].北京:海洋出版社,2009.226）。本专利技术所提供的基于散射比浊技术的红细胞渗透脆性测定方法中，所述散射比浊技术是指：将全血样本与特定低渗透压的盐溶液混合后，由于红细胞内外存在渗透压差，水分子进入红细胞内部，使其发生膨胀，散射光先升高，并会达到最大值；当膨胀到一定程度，红细胞膜会发生破裂而溶血，散射光随着红细胞的破裂程度而下降。混合液散射光下降的速率与红细胞渗透脆性成正比。利用该原理，可以测定红细胞渗透脆性。具体地，本专利技术所提供的基于散射比浊技术的红细胞渗透脆性测定方法，包括以下步骤：1、在散射比浊分析模组的比色杯中，加入低压渗透的缓冲盐溶液；2、往上述比色杯中加入红细胞，搅拌混匀后，测定混合液的散射值A0；3、在混合液发生溶血后，达到溶血平衡状态前，测定混合液的散射值A1；4、根据公式：溶血率%=（A0-本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于散射比浊技术的红细胞渗透脆性测定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)在散射比浊分析模组的比色杯中，加入低压渗透的缓冲盐溶液；(2)往上述比色杯中加入红细胞，搅拌混匀后，测定混合液的散射值A0；(3)在混合液发生溶血后，达到溶血平衡状态前，测定混合液的散射值A1；(4)根据公式：溶血率%=（A0‑A1）/A0×100%，计算溶血率，输出结果。

【技术特征摘要】
1.一种基于散射比浊技术的红细胞渗透脆性测定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)在散射比浊分析模组的比色杯中，加入低压渗透的缓冲盐溶液；(2)往上述比色杯中加入红细胞，搅拌混匀后，测定混合液的散射值A0；(3)在混合液发生溶血后，达到溶血平衡状态前，测定混合液的散射值A1；(4)根据公式：溶血率%=（A0-A1）/A0×100%，计算溶血率，输出结果。2.根据权利要求1所述的基于散射比浊技术的红细胞渗透脆性测定方法，其特征在于，所述低渗透压的缓冲盐溶液是电导率为6.5～7.0mS/cm、pH值为7.0-7.4的NaCl或其他盐的缓冲盐溶液。3.根据权利要求1所述的基于散射比浊技术的红细胞渗透脆性测定方法，其特征在于，血细胞与低渗透压缓冲盐溶液的混合体积比例为1...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢岳军，纪玲，曾映，徐安平，刘先成，陈卫东，杨文创，
申请(专利权)人：深圳普门科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44