一种旱稻孢囊线虫LAMP快速检测方法技术

本发明专利技术涉及一种旱稻孢囊线虫LAMP快速检测方法。通过比对旱稻孢囊线虫核糖体rDNA‑ITS序列，筛选获得特异性位点，设计筛选出5条LAMP引物HE‑F3、HE‑B3、HE‑FIP、HE‑BIP和HE‑LB。本发明专利技术提取旱稻孢囊线虫基因组DNA，通过环介导等温扩增，再对扩增产物显色和观察，从而快速检测和鉴定出旱稻孢囊线虫,能够从14种植物线虫22个群体中特异的检测出旱稻孢囊线虫，检测阈值为1/20000头孢囊，灵敏度较普通PCR方法的高10倍。本发明专利技术的检测方法具有特异性强、灵敏度高、操作简便、高效快捷，结果肉眼即可观察，在旱稻孢囊线虫快速检测和早期和田间诊断方面具有很高的应用价值。

A rapid detection method of upland rice cyst nematode LAMP

The present invention relates to a method for rapid detection of upland rice cyst nematode LAMP. Through the comparison of upland rice cyst nematode ribosomal rDNA ITS sequences, specific loci, selected 5 LAMP primers of HE F3, HE B3, HE FIP, HE BIP and HE LB. The method of extracting rice cyst nematode genome DNA, amplified by loop mediated isothermal amplification products, the color and observation, and rapid detection and identification of rice cyst nematode, can detect rice cyst nematode specific from 14 species of plant nematodes in 22 groups, the detection threshold value of 1/20000 capsule the sensitivity is better than the general PCR method is 10 times higher. The detection method of the invention has strong specificity, high sensitivity, simple operation, fast and efficient, the results can be visually observed, and has high application value in Upland Rice cyst nematode rapid detection and early diagnosis and field.

【技术实现步骤摘要】
一种旱稻孢囊线虫LAMP快速检测方法
本专利技术涉及一种旱稻孢囊线虫LAMP快速检测方法，属于生物

技术介绍
旱稻孢囊线虫(Heteroderaelachista)是一种主要侵染水稻的植物寄生线虫，最早于日本枥木县的稻田中被发现(OhshimaY.Heteroderaelachistansp.anuplandricecystnematodefromJapan[J].JapaneseJournalofNematology，1974(4):51-56.)。目前该线虫病害在湖南省多个县(市)丘陵地带的水稻田首次发现(DingZ，NamphuengJ，HeXF.FirstreportofthecystNematode(Heteroderaelachista)onriceinHunanprovince,China[J].PlantDisease,2012,96(1):151)。旱稻孢囊线虫一般寄生在寄主根部，其危害症状与水肥失调引起的症状极其相似，除吸收寄主的营养和对植物根部造成伤害外，还降低水稻对水的利用效率，继而影响寄主的生长和发育(丁中,NamphuengJanthathang本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种旱稻孢囊线虫LAMP快速检测方法，其特征在于：其中LAMP反应体系所使用的引物是：1)HE‑F3：5’‑GCTCTCTGTCCATGTCAGGA‑3’，2)HE‑B3：5’‑CCGCAACTAGCCCAATGC‑3’，3)HE‑FIP：5’‑GCAGGACAGCTGCCCATGTGGCGGATCGTTCGGGAGAA‑3’，4)HE‑BIP：5’‑GCGCAGCTTGGGATGCTTTTACCACAGGCTTACACTTGTG‑3’，5)HE‑LB：5’‑AGGTTGGAGCTGGGATGCG‑3’。

【技术特征摘要】
1.一种旱稻孢囊线虫LAMP快速检测方法，其特征在于：其中LAMP反应体系所使用的引物是：1)HE-F3：5’-GCTCTCTGTCCATGTCAGGA-3’，2)HE-B3：5’-CCGCAACTAGCCCAATGC-3’，3)HE-FIP：5’-GCAGGACAGCTGCCCATGTGGCGGATCGTTCGGGAGAA-3’，4)HE-BIP：5’-GCGCAGCTTGGGATGCTTTTACCACAGGCTTACACTTGTG-3’，5)HE-LB：5’-AGGTTGGAGCTGGGATGCG-3’。2.根据权利要求1所述的检测方法，其中的LAMP反应体系包括：(1)引物混合液：外引物HE-F3和HE-B3各0.2μmol/L，内引物HE-FIP和HE-BIP各1.4μmol/L,环引物HE-LB为0.4μmol/L；(2)反应混合液：3.2mmol/LdNTP,20mmol/LTris-HCl(pH8.8),10mmol/LKCl,3mmol/LMgSO4,10mmol/L(NH4)2SO4,0.1％Tritonx-100,8UBstDNA大片段聚合酶；(3)1μlDNA模板；...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭焕，彭德良，巧巧·吴泰，黄文坤，孔令安，贺文婷，丁中，
申请(专利权)人：中国农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11