一种降解苯酚的葡萄球菌制造技术

本发明专利技术提供了一株葡萄球菌(Staphylococcus caprae)及其应用。该菌株命名为CL，保藏编号为CCTCC NO:M2016305。该菌能够在36h内将200mg/L浓度苯酚的液体培养基(10g MgSO4·7H2O、0.2g CaCl2·2H2O、2‑5g KCl、2.5g胰蛋白胨、10g酵母提取物、NaCl 5％、蒸馏水添加至1000ml。调节pH为7.2左右，121℃灭菌15min)中的苯酚降解90％以上。本发明专利技术的葡萄球菌CL具有较强的降解苯酚能力，可用于苯酚污染环境的生物修复，具有较好的经济价值和应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种降解苯酚的葡萄球菌
本专利技术涉及微生物及生物降解
，具体地，涉及一种葡萄球菌及其在降解苯酚中的应用。
技术介绍
苯酚及其衍生物对人和动植物的毒性很强，已被列入环境优先控制污染物名单。含酚废水主要来源于造纸、炼油、合成纤维、合成橡胶、农药等行业，是工业排放废水中主要的污染物。在这些含酚废水中除了含苯酚类污染物之外，往往还含有大量盐分而使之成为高盐含酚废水，这类废水排放到环境中会对土壤、地表水和地下水造成严重污染。由于高盐环境对微生物生长具有抑制和毒害作用，使得常规的生物降解技术在处理这类废水时存在瓶颈问题。嗜盐菌能直接用于去除高盐工业废水中的有机污染物而无需先降低废水盐度，因而逐渐受到人们的广泛关注。葡萄球菌(Staphylococcuscaprae)球形或稍呈椭圆形，直径1.0um左右，排列成葡萄状。葡萄球菌无鞭毛，不能运动。无芽胞，除少数菌株外一般不形成荚膜。易被常用的碱性染料着色，革兰氏染色为阳性。其衰老、死亡或被白细胞吞噬后，以及耐药的某些菌株可被染成革兰氏阴性。多数葡萄球菌能分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产生气。致病性菌株能分解甘露醇。葡萄球菌在自然界中分布很广，健康禽类的皮肤、羽毛、眼睑、粘膜、肠道等都有葡萄球菌存在，同时该菌还是家禽孵化、饲养、加工环境中的常在微生物。对于葡萄球菌对污染物降解的研究鲜有报道，有研究在非盐环境中葡萄球菌在36h，在同样的条件下，对苯酚的降解可以达到80％以上，但在高盐环境中对苯酚的研究未见有相关的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一株能够降解苯酚的葡萄球菌。本专利技术从盐湖底泥中分离到一株能够降解苯酚的菌株。通过菌株形态学特征，生理生化特征和16SrDNA序列分析将该菌株鉴定为葡萄球菌，命名为CL，该菌株于2016年6月2日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称，地址：中国武汉武汉大学，邮编430072)，保藏编号为CCTCCNO.M2016305，分类名为葡萄球菌Staphylococcuscaprae。本专利技术提供了含有葡萄球菌CL的菌剂。本专利技术提供了含有葡萄球菌CL的生物清洁剂。本专利技术提供了葡萄球菌CL或含有其的菌剂或含有其的生物清洁剂在清洁环境中的应用。进一步，本专利技术提供了葡萄球菌CL或含有其的菌剂或含有其的生物清洁剂在降解苯酚中的应用。本专利技术提供了葡萄球菌CL或含有其的菌剂或含有其的生物清洁剂在处理工业废水中的应用。本专利技术提供了葡萄球菌CL或含有其的菌剂或含有其的生物清洁剂在处理医用废水中的应用。本专利技术提供了葡萄球菌CL在制备生物清洁剂中的应用。本专利技术提供了葡萄球菌CL在制备生物降解剂中的应用。所述生物降解剂为苯酚降解剂。本专利技术的葡萄球菌CL能够在36h内，盐浓度0-5％时降解培养基中含有的浓度为200mg/L苯酚达到90％以上，当盐浓度在10％的种情况下，对苯酚的降解率为80％以上。本专利技术提供的葡萄球菌CL及其菌剂在使用过程中无污染，无公害，能够应用于苯酚污染环境的生物修复，可广泛应用于环境清洁领域，含苯酚的工业废水或医用废水处理领域，具有较好的经济价值和应用前景。附图说明图1为菌株CL与相近种16SrDNA序列进化树。图2为菌株CL的生长及苯酚的降解特性图。图3为菌株CL在不同NaCl浓度下对苯酚的降解情况图。图4为苯酚浓度的标准曲线(OD270)图。图5为菌株CL对不同初始苯酚浓度的降解情况图。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。在不背离本专利技术精神和实质的情况下，对本专利技术方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本专利技术的范围。若未特别指明，实施例中所用的化学试剂均为常规市售试剂，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。实施例1葡萄球菌CL的分离和鉴定1、葡萄球菌CL的分离a、将采集到的固体样品(盐湖淤泥、海底淤泥、高盐废水处理污泥等)1-5g或500ml的液体样品(盐湖水、海水、高盐废水等)过滤物，溶于10-50ml液体培养基(10gMgSO4·7H2O、0.2gCaCl2·2H2O、2-5gKCl、2.5g胰蛋白胨、10g酵母提取物、NaCl15％、蒸馏水添加至1000ml。调节pH为7.2左右，121℃灭菌15min)，室温下，转速80-160rpm振荡30-120分钟，取出静置20-40分钟，用移液器吸取100μL，均匀涂布在固体培养基的培养平板上(上述液体培养基加2％琼脂得)，置于28℃恒温培养箱中进行静置培养。b、直到培长出可见菌落时，用接种环挑取单个菌落，在平板固体培养基表面上连续划线；c、如此反复划线培养，直至获得纯培养嗜盐菌菌株。d、挑取纯培养的单个菌落，转接于含有苯酚的液体培养基中，在28℃、150rpm的恒温摇床中进行培养，菌液至浑浊；本步骤中的液体培养基1L配方为NaCl100g、Tris2g、KCl2g、KNO31g、NH4Cl5g、MgSO4·7H2O24g、MnSO4·H2O0.688g、CaCl20.12g、葡萄糖1g，蒸馏水添加至1000ml。100ml上述液体培养基中加入灭过菌的0.05mol/LNa2HPO42ml、0.01mol/LFeSO42ml、10mg/mL酵母提取物2ml、10mg/mL胰蛋白胨2ml、10mg/mL苯酚2ml(换算后为200mg/L苯酚溶液)。e、用移液器吸取200μL菌液转接于步骤d所述的含有苯酚的液体培养基中，如此反复5-8次，获得一株稳定高效的降解苯酚的嗜盐菌，命名为CL。2、菌株的形态学特征该菌株CL稀释涂布在固体培养基中，60h后观察菌落呈金黄色，圆形，隆起，表面湿润且光滑，菌落边缘整齐，革兰氏染色后呈紫色，为革兰氏阳性球菌，且球状菌以大于两个的形式连成串状。3、16SrDNA鉴定该菌株的16SrDNA部分序列长为1058bp，将该序列在NCBI网站(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)上进行Blast比对分析，挑选与菌株CL同源序列相似性最高的有代表性的菌株，采用邻位相接法(Neighbor-Joining)并利用MEGA6.0软件构建系统进化树，见图1，自展检验(bootstrap)1000次。可知菌株CL为葡萄球菌，与目前已发表的葡萄球菌(StaphylococcuscapraeATCC35538)序列相似性达99％。综合菌体形态、生理生化特性和16SrDNA基因序列，该菌株CL于2016年6月2日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称，地址：中国武汉武汉大学，邮编430072)，保藏编号为CCTCCNO.M2016305，分类名为葡萄球菌Staphylococcuscaprae。实施例2葡萄球菌CL的降解苯酚性能试验采用高效液相色谱法检测葡萄球菌CL对含苯酚的培养基中苯酚的降解性能。(培养基为10gMgSO4·7H2O、0.2gCaCl2·2H2O、2-5gKCl、2.5g胰蛋白胨、10g酵母提取物、NaCl5％、蒸馏水添加至1000ml。调节pH为7.2左右，121℃灭菌15min，苯酚根据以下实验要求进行添加)1、菌株CL的生长及苯酚的降解特性在最适生长降解条件下，菌株CL的生长和苯酚浓度的变化曲线如图2所示。菌株CL在经过12h左右的停滞期后进入对数生长期，在此期间，菌株随时间几乎本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种葡萄球菌(Staphylococcus caprae)CL，其保藏编号为CCTCC NO:M2016305。

【技术特征摘要】
2016.06.27 CN 20161047578421.一种葡萄球菌(Staphylococcuscaprae)CL，其保藏编号为CCTCCNO:M2016305。2.含有权利要求1所述葡萄球菌CL的菌剂。3.含有权利要求1所述葡萄球菌CL的生物清洁剂。4.权利要求1所述的葡萄球菌CL或权利要求2所述的菌剂或权利要求3所述的生物清洁剂在清洁环境中的应用。5.权利要求1所述的葡萄球菌CL或权利要求2...

【专利技术属性】
技术研发人员：许继飞，赵吉，宋晓雪，武琳慧，刘崎峰，王川，包智华，
申请(专利权)人：内蒙古大学，
类型：发明
国别省市：内蒙古,15