一种利用DNA甲基化抑制剂构建植物群体的方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，尤其是植物组织培养技术领域，公开了一种利用DNA甲基化抑制剂构建植物群体的方法，所述DNA甲基化抑制剂为5‑氮杂胞苷(5‑azaC)。本发明专利技术通过在叶片组织培养的分化培养阶段，在分化培养基中添加不同浓度的5‑azaC，诱导再生植株发生改变，获得生长和生理生化等表型性状产生广泛改变的群体。本发明专利技术可用于构建植物表观遗传学研究的突变体库，也可用于杨树等林木种植资源创新及新品种创制，具有广阔的应用前景。

Method for constructing plant population by using DNA methylation inhibitor

The invention belongs to the field of biotechnology, especially in plant tissue culture technical field and discloses a method for using DNA methylation inhibitors to construct plant populations, the DNA methylation inhibitor for 5 azacytidine (5 azaC). The present invention by differentiation culture medium for leaf tissue, in the differentiation medium supplemented with different concentrations of 5 azaC, regeneration of change, growth and physiological and biochemical phenotypic traits have wide change group. The invention can be used for constructing the mutant library of the plant epigenetics research, and can also be used for the tree planting resources innovation and the new variety creation of poplar trees, etc., and has wide application prospect.

【技术实现步骤摘要】
一种利用DNA甲基化抑制剂构建植物群体的方法
本专利技术涉及生物
，尤其是植物组织培养
，具体涉及一种利用DNA甲基化抑制剂构建植物群体的方法。
技术介绍
作为育种工作的物质基础，育种资源的丰富度直接决定良种选育的效率。当前，除了深入挖掘我国植物种质资源、规模化引进我国十分短缺又迫切需要的基因资源外，利用人工方法创造新的种质资源是解决育种资源匮乏、创造新的种质资源的有效途径。目前人工方法创造新的植物种质资源主要包括诱变技术和转基因技术。与转基因技术相比，诱变技术虽然具有变化性状不可控、可能出现有害变化性状等缺点，但其同时也具有变化群体大、性状丰富等优点，通过选择，能够从变化群体中获得优良的种质资源。诱变技术分物理诱变和化学诱变。物理诱变主要使用各种高能射线辐射诱导基因组发生变化。化学诱变是使用各种化学药剂诱导细胞发生变化，具有简单、高效、安全的特点。DNA甲基化抑制剂是一种化学诱变剂，其中常用的为5-氮杂胞苷(5-azaC)。5-azaC是一类不改变基因组序列，但能使基因组甲基化水平降低的碱基类似物，能够诱导生物发生变化。甲基化变化后，能够导致相关基因的表达发生变化，引起本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用DNA甲基化抑制剂构建植物群体的方法，其包括以下步骤：(1)外植体的选择、消毒预处理和培养；(2)无菌苗的扩繁；(3)无菌叶片的选择及预处理；(4)无菌叶片甲基化抑制剂处理；(5)再生芽的生根培养；(6)再生植株的温室移栽；其中，所述DNA甲基化抑制剂为5‑氮杂胞苷(5‑azaC)。

【技术特征摘要】
1.一种利用DNA甲基化抑制剂构建植物群体的方法，其包括以下步骤：(1)外植体的选择、消毒预处理和培养；(2)无菌苗的扩繁；(3)无菌叶片的选择及预处理；(4)无菌叶片甲基化抑制剂处理；(5)再生芽的生根培养；(6)再生植株的温室移栽；其中，所述DNA甲基化抑制剂为5-氮杂胞苷(5-azaC)。2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(1)中外植体的选择是剪取半木质化的新发枝条，剪去叶片，清洗后，放入超净工作台；外植体的消毒预处理为剪取5cm左右的茎段，采用75％的酒精灭菌30秒，10％的次氯酸钠消毒8-10分钟，用无菌水冲洗外植体3次，灭菌滤纸吸干；外植体的培养是将消毒灭菌后的外植体接种在MS启动培养基中。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中步骤(1)中在对外植体进行培养之前，还包括在无菌条件下将外植体材料上与消毒剂接触过的界面进行切除的步骤。4.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤(2)中无菌苗的扩繁是切取上述茎段外植体上生长的1-1.5cm高的芽，接种在生根培养基中，所述生根培养基为1/2MS+IBA0.01mg/L+NAA0.01mg/L+蔗糖25g/L+植物凝胶2.5g/L。5.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤(3)中无菌叶片的选择是选择中上部完全展开的叶片；无菌叶片的预处理是在无菌条件下，用医用手术刀切去0...

【专利技术属性】
技术研发人员：张冰玉，苏晓华，丁昌俊，高亚南，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院林业研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11